昆明地区印度块菌子囊果的解剖结构研究

通过印度块菌子囊果石蜡切片的显微观察,对印度块菌子囊果包被及子实层的显微结构、子囊及子囊孢子的发育过程进行研究.结果表明:(1)印度块菌子囊果是由包被和子实层构成,子囊果的表面密被大量大小不一的疣状突起,包被由外皮层和内皮层构成;子实层由封闭的、大小不一的产孢组织构成,在产孢组织中包含有侧丝、产囊丝、子囊和子囊内的子囊孢子;(2)成熟印度块菌子囊果横切面上有明暗相间的迷宫状纹脉;(3)子囊卵形,由产囊丝顶端的细胞发育而来;(4)成熟子囊孢子红褐色,椭圆形至近球形不等,子囊孢子双层壁,外壁密布有刺状纹饰.子囊孢子在子囊内的发育过程中常出现败育现象,每个成熟子囊中含有1～5个子囊孢子(常见4个).     

华山松印度块菌菌根中的块菌交配型基因的初步研究

印度块菌属于子囊菌门异宗配合真菌,其交配型基因(mating type gene)的表达调控与块菌子囊果的形成和发育直接相关。已有研究表明在种植园内,两种交配型基因竞争性地感染宿主植物且不同交配型菌株的时空分布吻合概率可能是决定子实体产出及产量的关键因素之一。为增加印度块菌子囊果形成的几率,本研究以交配型基因MAT1-1-1及MAT1-2-1作为分子标记,检测了接种印度块菌菌剂后6个月、24个月和36个月的华山松菌根中块菌的两种交配型基因的动态变化,结果表明接种后24个月的单株苗存在两种交配型基因的菌根苗占总菌根苗的比例最高,暗示在此时间点进行块菌菌根苗室外移栽,有望在后期提高两种交配型菌株的时空分布吻合概率,从而提高子实体产生的几率。     

印度块菌(Tuber indicum)菌根促生细菌的研究

【目的】筛选对印度块菌菌根量和菌根苗长势有促进作用的菌根促生细菌(Mycorrhization helper bacteria,MHB)。【方法】选择华山松为宿主植物,自块菌菌根根际土壤中分离得到的11种细菌为供试菌株,将印度块菌菌剂与不同浓度的细菌混合于特定基质中后接种于华山松上,并通过对印度块菌与华山松形成的菌根数、华山松的株高和地径三方面的统计与分析,确认MHB。【结果】Pseudomonas sp. JCM 5481 (P143)、Streptomyces sp. EN31 (S191)、Variovorax paradoxus (V633)在浓度为2.4×109 CFU/mL时对印度块菌菌根数、株高和地径均有极显著促进作用(P<0.01);Pseudomonas chlororaphis (P11)、Pseudomonas corrugate (P127)在浓度为0.8×109 CFU/mL时对印度块菌菌根数、株高和地径均有显著促进作用(P<0.05)。4种假单胞菌浓度梯度的设置显示了不同菌株适宜的浓度不同。【结论】实验获得5种MHB,并表明细菌浓度是获得MHB的一个重要影响因素。     

适宜印度块菌生长的地形和土壤因子

在云南、四川和西藏印度块菌产区的9个地点进行调查和采样,选择地形因子和土壤因子为评价指标,采用主成分分析法对印度块菌生长适宜性进行综合评价,以确定印度块菌的生长与地形因子和土壤因子的关系.结果表明:1)地形因子和土壤因子15个指标中提取出的5个主成分,累计贡献率达到87.5％.地形因子中坡位对块菌生长的影响最大,坡位越高越不适宜块菌生长,以中坡和中下坡最佳.2)土壤因子中容重、粉粒含量、pH值、全氮含量、交换性钙镁含量是块菌生长的限制因子.容重为0.65～0.82 g· cm-3适宜块菌生长,而容重过高(＞1 g·cm-3)不利于块菌的生长;粉粒含量为30.0％、砂粒含量为55.0％左右适宜块菌的生长,而粘粒含量过高不利于块菌的生长.在土壤化学因子中,pH值在6.40左右、全氮为2.29 ～3.70 g·kg-1、交换性钙为22.91～37.17 cmol·kg-1、交换性镁含量为1.85～2.59 cmol·kg-1的环境条件适宜块菌生长.3)综合评价表明,在9个采集地点,云南省昆明市哨上村和西藏自治区林芝地区江色岗得分较高,其地形和土壤条件最适合块菌生长;而四川省攀枝花市二十九梁子和云南省楚雄州五顶山得分较低,其地形和土壤条件不太适宜印度块菌生长.     

普洱茶的香气成分

普洱茶（普洱熟茶）是以云南特有的大叶种茶制作的晒生毛茶（普洱生茶）为原料,经特殊的后李譬过程生产而成。与其原料晒青毛茶相比较,普洱茶的各类化学物质均发生了较大变化。本文应用气相色谱（GC）及气质联用（GC／MS／DS）技术,对云南临沧市生产的普洱茶和晒青毛茶等的香气成分进行分析比较。结果表明,普洱茶香气成分中的萜类、芳香族、以及有机酸类等化合物的组成和含量均与同一产地的晒青毛茶等均有显著的差异。     

印度块菌子囊果内部解剖结构的扫描电镜观察

利用扫描电镜对成熟印度块菌子囊果的内部结构进行了观察,以系统揭示其子囊果内部组织特征,为块菌属的分类以及块菌属真菌子囊果的生理研究奠定基础。观察结果进一步证明,成熟印度块菌子囊果横切面上的白色迷宫状脉络是由不育的侧丝构成,而暗脉则是被侧丝缠绕并包裹着的可育的菌丝组织,即产孢组织,这些白色脉络和暗脉就构成了印度块菌子囊果横切面上迷宫状的纹脉;产孢组织中,可观察到正在发育的大大小小的子囊被缠绕在一起的大量产囊丝与侧丝包裹着,形成密密麻麻微小的类似蜂巢状结构;子囊孢子游离于子囊中,成熟子囊孢子表面有刺状纹饰,刺的顶端有小弯钩。单个子囊内含的子囊孢子大小与其内含的子囊孢子数目有关,子囊内所含的子囊孢子越多,子囊孢子就越小。     

金菠萝品种果实香气成分和特征香气研究

采用固相微萃取-气相色谱质谱联用法研究了金菠萝品种果实不同部位果肉、中柱和果皮的香气成分,并利用香气值确定了不同部位的特征香气。结果表明:各部位香气组成不同,果肉和中柱部位以酯类为主,果皮部位以萜烯类为主。己酸乙酯和己酸甲酯是果肉和中柱部位含量较高的成分,(Z)-β-罗勒烯是果皮部位含量最高的成分。4-甲氧基-2,5-二甲基-3(2H)呋喃酮和癸醛是果皮香气贡献较大的成分,而2-甲基丁酸乙酯、4-甲氧基-2,5-二甲基-3(2H)呋喃酮和己酸乙酯是果肉和中柱香气贡献较大的成分。金菠萝品种果肉和中柱的香气值与果皮差异较大,且香气值主要集中于果肉。     

月见草鲜花香气成分分析

月见草(Oenothera odorata Jacq.)又名夜来香、待霄草。花色浅黄,香气甜润、清淡、幽雅。夜来香浸膏成分分析已有报道,但对其鲜花的香气成分至今尚未见报道。本文采用两根极性不同的毛细管柱的 GC/MS/DS 分离鉴定并辅助以双柱程升保留指数定性的方法,分析鉴定了月见草鲜花香气中的约12种成分。     

菠萝蜜中香气成分分析

用溶剂法提取菠萝蜜中的香气成分,用GC-MS联用技术鉴定了82个化合物,占香气成分总量的94．66％,主要为脂肪酸类以及酯类、醇类、烷氧基烷烃类和酮类物质,主要成分为亚油酸(24．10％),棕榈酸(15．72％)和油酸(6．16％)。     

国产松露乙醚提取物的GC-MS分析

采用气相色谱-质谱(GC-MS)法分析我国云南产黑松露(Tuber indicum)乙醚提取物的化学成分.从中鉴定了56个化合物,占提取物总含量的87.37％,化合物组成特征:以脂肪酸类化合物为主,占59.98％,其中含亚油酸达26.51％;醇、酯、醛和烃类化合物分别占7.96％、2.79％、2.44％和13.12％,另外还含有少量的苯衍生物,占1.08％.     

李氏块菌提取物抗氧化活性的研究

对李氏块菌Tuber liyuanum子实体的不同提取物,包括甲醇提取物(ME)、乙醇提取物(EE)、丙酮提取物(AE)、正丁醇提取物(BAE)和乙酸乙酯提取物(EAE),进行清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基、铁离子螯合能力、还原力以及总酚含量的测定和研究,发现ME对DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除及还原力活性最高,EC50值分别为23.37mg/m L、11.65mg/m L和24.47mg/m L;EE对羟基自由基清除和铁离子螯合能力活性最高,EC50值分别为7.24mg/m L和小于0.5mg/m L;ME的总酚含量最高(3.08mg GAE/g提取物),其次是EE(1.34mg GAE/g提取物),提取物总酚含量与抗氧化活性呈现出一定的正相关性。     

用传统分离培养法和高通量测序技术分析印度块菌子囊果内细菌的群落结构

块菌是重要的经济真菌, 在其生长发育过程中, 细菌扮演了重要角色。本文利用传统分离培养方法和高通量测序技术分析了印度块菌(Tuber indicum)子囊果内细菌的群落结构。共分离得到细菌532株, 根据物种累积曲线, 选取其中的112株细菌进行了16S rRNA基因序列分析, 共鉴定出4属40种, 其中假单胞菌属(Pseudomonas)菌株占所测菌株数的80%, 不动杆菌属(Acinetobacter)占12.5%, 链霉菌属(Streptomyces)占5%, 贪噬菌属(Variovorax)占2.5%。通过对印度块菌子囊果16S rRNA基因的V1-V3区高通量测序分析, 共获得细菌序列9,862条, 分属于7门43属220种, 其中变形菌门、拟杆菌门和放线菌门的物种占总物种数的99.7%, 是印度块菌子囊果内的优势细菌。黄杆菌属(Flavobacterium)、壤霉菌属(Agromyces)、微杆菌属(Microbacterium)、剑菌属(Ensifer)和寡养食单胞菌属(Stenotrophomonas)的物种数占总物种的86.3%, 是印度块菌子囊果内细菌的优势属。研究结果表明, 采用胰蛋白大豆培养基仅分离得到印度块菌子囊果内少数细菌物种, 而采用高通量测序技术分析发现, 印度块菌子囊果内细菌物种种类丰富, 群落结构复杂。     

Chemical Composition and Antioxidant Activity of Tuber indicum from Different Geographical Regions of China

Tuber indicum, an endemic truffle species in eastern Asian, is an edible mushroom that is both an important export and widely distributed across China. Many existing studies on truffles focus on analyzing their taxonomy, population genetics, volatile organic compounds and artificial cultivation of the truffles, while little information is available about their nutrient composition and pharmacological activity, especially the relationship between chemical composition in ascocarps and their geographic distributions. This study presents a comprehensive investigation of the chemical composition of T. indicum, including free sugars, fatty acids, organic acids, phenolic acids, flavonoids, and polysaccharides, and tracks the antioxidant activity of T. indicum ascocarps collected from five geographical regions of four provinces in P. R. China: Hebei, Tibet, Yunnan, and Liaoning province. Our results showed that T. indicum collected from Qujing, Yunnan province, possessed the highest amount of free sugars (23.67 mg/g dw), total flavonoids (2.31 mg/g dw), total phenolics (4.46 mg/g dw) and the highest DPPH and ABTS radical‐scavenging activities. The amount of water‐soluble polysaccharides was the highest (115.24 mg/g dw) in ascocarps from Tibet, the total organic acids was the highest (22.073 mg/g dw) in ascocarps from Gongshan, and polyunsaturated fatty acids were most abundant in those from Hebei province. This study reveals that the quantity of chemical compounds in T. indicum varies by geographical origin. Detecting differences in chemical composition may provide important data for understanding the relationship between environmental factors and truffle formation, as well as quality evaluation of the commercial species T. indicum throughout China.     

Effect of Temperature,pH, and Media on the Mycelial Growth of Tuber koreanum

Members of the genus Tuber are ectomycorrhizal fungi; this genus includes more than 180 species worldwide. In the present study, the optimal pH, temperature, and medium suitable for the mycelial growth of the Korean truffle, Tuber koreanum, were determined. Mycelium of T. koreanum, isolated from fruiting bodies collected in Korea, was used to investigate the effects of these environmental factors. The results showed that malt extract agar and potato dextrose agar were the most suitable for the mycelial growth of T. koreanum when cultured at a pH of 6.0 at 25 °C for 30 days.     

New data on ectomycorrhizae and soils of the Chinese truffles Tuber pseudoexcavatum and Tuber indicum, and their impact on truffle cultivation

Chinese truffles serve as a good complement to the market for Tuber melanosporum (Périgord black truffle). However, Chinese truffles could be introduced accidentally or fraudulently into the plantations of Mediterranean truffles, and they could have a negative effect on truffle production and natural ecosystems. The study of Tuber species from China which are commercialized in Europe began 14 years ago. Tuber pseudoexcavatum was proposed as a new species, and this has been validated by some authors based on molecular and phylogenetic studies. We synthesize their ectomycorrhizae using samples from the type collection, and we compare T. pseudoexcavatum and Tuber indicum ectomycorrhizae. The ectomycorrhizae of these species have a morphology which is related to the ectomycorrhizae of T. melanosporum. We provide useful information for the rapid screening of the above-mentioned Chinese truffles ectomycorrhizae, for the quality control of commercial plants mycorrhized with Tuber. Moreover, we analyze the soil tolerance and the host plant affinity of T. pseudoexcavatum and T. indicum, in order to assess the capacity of both Chinese truffles to penetrate T. melanosporum plantations and habitats.     

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定新鲜块菌子实体中α-雄烷醇

本研究建立了一种固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱的检测方法,用于检测新鲜块菌子实体中α-雄烷醇(5α-雄甾-16-烯-3α-醇)的含量。新鲜块菌样品经无水乙醇提取,Qasis HLB柱萃取富集后,采用超高效液相色谱-串联质谱进行分析定量。方法学验证结果表明该方法的回收率为88.49%-92.22%;检出限为0.120 9 ng/mL,定量限为0.398 9 ng/mL。该方法简便、精确,适用于新鲜块菌中α-雄烷醇含量的测定。     

HS-SPME-GC-MS法分析3种块菌子囊果主要挥发性成分

本研究采用顶空-固相微萃取结合气相色谱-质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS)比较分析了假喜马拉雅块菌Tuber pseudohimalayense、中华夏块菌T. sinoaestivum和印度块菌T. indicum子囊果主要挥发性有机化合物(volatile organic compounds,VOCs)组成与含量。结果表明,在3种块菌子囊果中共鉴定到173种VOCs,其中假喜马拉雅块菌、中华夏块菌和印度块菌子囊果中分别检测到79、63和71种挥发性成分,3种块菌子囊果中共有成分11种,其中1-辛烯-3-醇是含量最高的共有化合物(39.52%、38.98%和8.46%)。利用挥发性成分对3种块菌种类进行判别分析,结果表明2-丁酮、庚醛、苯乙烯、1-辛烯-3-醇和环十四烷能100.0%地将3种块菌样品按照种类正确分类。本研究初步确定了3种块菌子囊果VOCs组成和含量的差异,并探究了用VOCs相对含量区分3种块菌种类的可行性,为我国块菌质量评价,尤其是加工的块菌商品的鉴别提供了重要的理论依据。