大麦成熟籽粒中b-淀粉酶水平与麦芽糖化力的相关分析

对10个二棱啤酒大麦品种和10个F₂杂种的成熟籽粒进行了B-淀粉酶活性和麦芽糖化力的分析。结果发现：B-淀粉酶水平与麦芽糖化力之间相关极显著（r=0.991）。B-淀粉酶和a-淀粉酶之间以及a-淀粉酶与糖化力之间的相关系数分别为0.499和0.55，其相关密切程度不如B-淀粉酶和糖化力。因此，在啤酒大麦育种程序中，测定籽粒中b-淀粉酶的活性水平可以预测麦芽糖化力的高低。     

介绍一种新型酶制剂——β-淀粉酶

天津市工业微生物研究所研制的β-淀粉酶,从1983年研制成功后,于1984年在河北省武清县建厂试生产,即建成了我国第一个β-淀粉酶工厂,并生产了商品酶制剂,酶活力高,至今已形成年产近100吨酶制剂的生产能力。β-淀粉酶是较好的糖化剂,可用于制造饴糖、麦芽糖、麦芽糖醇、麦芽糊精、醋,以及酿造新型啤酒、白酒等已在天津新华食品厂和河     

巨大芽孢杆菌淀粉酶基因的克隆及其在枯草杆菌中的表达

以λ噬菌体为载体,采用鸟枪法由B.megaterium基因组克隆得到了1个淀粉酶基因,并已被亚克隆到E.coli和B.subtilis中,其表达水平较B.megaterium高250倍。克隆株产生的淀粉酶对直链淀粉的早期水解产物主要为麦芽三糖和麦芽糖,随着水解时间的延长,又将它们转变为葡萄糖。同时能以麦芽三糖为底物水解为麦芽糖和葡萄糖。受体菌的平行提取物无上述水解活性。因而该酶被确定为糖化型α-淀粉酶。SDS-凝胶电泳法确定酶分子量为58000道尔顿。     

转TrxS基因啤酒大麦种子中硫氧还蛋白h与淀粉酶活性变化

导入TrxS基因后,转基因大麦籽粒的硫氧还蛋白h活性明显提高;淀粉酶活性也明显提高,其中α-淀粉酶活性在开花后30d提高了3倍以上,随着籽粒的发育,转基因对α-淀粉酶活性影响作用减少,对β-淀粉酶活性的影响有同样的趋势;转基因大麦种子发芽势明显提高。说明TrxS基因有望改善啤酒大麦的制麦特性和品质特性。     

α-淀粉酶家族的新成员——多功能淀粉酶

多功能淀粉酶是α淀粉酶家族（α-amylase family）的新一类成员,包括新普鲁兰酶 、麦芽糖淀粉酶和环麦芽糊精酶,它们在结构上具有α淀粉酶家族共有的4个高度保守的区 域,但在功能上又兼有糖苷水解酶和糖基转移酶的催化活性,而不同的多功能淀粉酶虽然在结 构与功能上具有一定的相似性,但不同来源的酶在底物特异性和水解、转移糖苷键的特异性 等方面存在着差异.多功能淀粉酶大多存在单体与二聚体或多聚体之间的平衡,其多聚化与N 结构域和环境中的离子强度调控有关.实验证明,通过突变可以改变多功能淀粉酶的催化特 性,甚至仅1个氨基酸的替换就能实现功能改变.多功能淀粉酶的结构保守性和催化多样性具 有重要的研究价值及应用前景.     

麦芽品质与大麦籽粒及农艺性状相关性初步研究

大麦籽粒和麦芽中影响啤酒生产的因素很多,对于它们之间的关系,国内报道尚少。从国外的一些工作来看,籽粒产量的构成因素之间多为负相关;产量与大麦某些品质以及麦芽品质性状之间有的为正相关,有的则为负相关。本文通过对一些麦芽品质和籽粒品质的测定,研究了这些品质之间以及与农艺性状之间的相关性,以求能为啤酒大麦的品质育种提供参考。     

耐高温α－淀粉酶在生产超高麦芽糖浆中应用的研究

本文着重研究了耐高温α－淀粉酶与ＢＦ—７６５８α－淀粉酶（即普通中温淀粉酶）在超高麦芽糖浆生产中的区别。使用耐高温α－淀粉酶可使淀粉液化更完全,并且可降低酶的用量,同时生产的超高麦芽糖浆中麦芽糖含量大大提高,具有一定的推广、使用价值。     

耐高温α—淀粉酶在生产超高麦芽糖浆中应用的研究

本文着重研究了耐高温α－淀粉酶与ＢＦ－７６５８α－淀粉酶（即普通中温淀粉酶）在超高麦芽糖浆生产中的区别,使用耐高温α－淀粉酶可使淀粉液化更完全,并且可降低酶的用量,同时生产的超高麦芽糖浆中麦芽糖含量大大提高,具有一定的推广,使用价值。     

Sh-2超甜玉米乳熟期籽粒大小糖分积累酶活性变化及其相关性分析

试验研究了夏季两个不同播期的sh-2超甜玉米乳熟期籽粒大小、糖分积累、酶活性的变化及其相关性．结果表明,由于籽粒乳熟后期脱水,籽粒长度、宽度、厚度、体积和可溶性总糖、果糖含量呈中间高,两头低的抛物线型;籽粒淀粉酶、过氧化物酶(POD)、超氧化物岐化酶(SOD)活性变化也均呈抛物线型;曲线符合方程=a bx cx2(y为籽粒大小、糖含量、酶活性,x为授粉后天数,a,b,c为参数)．相关分析表明,在播期一,α-淀粉酶、β- 淀粉酶、POD、SOD活性与籽粒长度、宽度、厚度、体积和可溶性总糖、果糖含量均无显著相关;在播期二,α-淀粉酶活性与籽粒长度、宽度、体积和可溶性总糖、果糖含量,SOD活性与籽粒长度、体积存在显著负相关．     

麦芽品质与大麦籽粒及农艺性状相关性初步研究

大麦籽粒和麦芽中影响啤酒生产的因素很 多,对于它们之间的关系,国内报道尚少。从国 外的一些工作来看,籽粒产量的构成因素之间 多为负相关［15,121;产量与大麦某些品质以及麦 芽品质性状之间有的为正相关,有的则为负相 关［,s,e,lol0本文通过对一些麦芽品质和籽粒品质 的测定,研究了这些品质之间以及与农艺性状 之间的相关性,以求能为啤酒大麦的品质育种 提供参考。     

转化法分离枯草芽孢杆菌8a5α-淀粉酶基因

用EcoRI部分降解枯草芽孢杜菌8a5染色体DNA,琼脂糖疑胶电泳分离纯化各降解片段,用转化法逐一测定各降解片段的转化活性。实验结果证明,a-淀粉酶基因本身可作为选择性标记用于a-淀粉酶基因的分离。用Hind III降解的λ-DNA 作为分子量对照,确定能高效转化淀粉酶基因的DNA片段大小约4.3kb.本实验获得的a-淀粉酶基因的转化率为1×10⁴转化子/μg DNA.     

用聚乙二醇(PEG)／无机盐双水相体系从枯草杆菌发酵液中提取a-淀粉酶的研究

本文报道分别用聚乙二醇(PEG)／磷酸盐和PEG／(NH·)2SO4双水相体系从枯草轩菌发酵液中提取a-淀粉酶。研究了PEG的平均分子量、PEG浓度,成相的盐的浓度和Nacl的浓度对a-淀粉酶和蛋白质的分配系数以及相比的影响,确定了最佳的操作条件。实验表明在180%PEG 1500／10％磷酸盐／0．05M NaCl的体系中,a-淀粉酶的分配系数为6.62,蛋白质分配系数为1．14,相比为2．5,a-淀粉酶总收率为94．3％,在16％PEG 1500／12％(NH₄)₂SO₄／O．05M NaCl体系中,a-淀粉酶分配系数为82,蛋白质分配系数为5．2,相比为O．92,酶收率为99％,结果表明用PEG／无机盐双水相体系直接从含有菌体的发酵液中提取a-淀粉酶是可行的。     

坚强芽孢杆菌β-淀粉酶基因的核苷酸序列分析

淀粉水解酶广泛用于淀粉加工业中,何秉旺等在选育产耐热β-淀粉酶菌株中得到一株坚强芽孢杆菌（Bacillusfirmus）725,该菌株产生的淀粉酶有较好的热稳定性,水解淀粉的主要产物为麦芽糖。自然菌株产生的淀粉酶往往是多种淀粉酶的混合,为进一步研究该菌株产生的淀粉酶的性质和在工业上应用的可能性,分离了三个淀粉酶基因,在大肠杆菌中克隆和表达[1]。其中重组质粒pBA150产生的淀粉酶的淀粉水解产物主要是麦芽糖［1］。β-淀粉酶（EC.3．2.1．2）水解淀粉的主要产物是麦芽糖,工业上可用于生产高麦芽糖浆,近年来又有β-淀粉酶用于啤酒工业的报道[2]。本文报道重组质粒pBA150的β-淀粉酶基因的序列分析及推导出的氨基酸序列同己知β-淀粉酶的氨基酸序列比较。     

坚强芽孢杆菌β-淀粉酶基因的核苷酸序列分析

淀粉水解酶广泛用于淀粉加工业中,何秉旺等在选育产耐热β-淀粉酶菌株中得到一株坚强芽孢杆菌（Bacillusfirmus）725,该菌株产生的淀粉酶有较好的热稳定性,水解淀粉的主要产物为麦芽糖。自然菌株产生的淀粉酶往往是多种淀粉酶的混合,为进一步研究该菌株产生的淀粉酶的性质和在工业上应用的可能性,分离了三个淀粉酶基因,在大肠杆菌中克隆和表达[1]。其中重组质粒pBA150产生的淀粉酶的淀粉水解产物主要是麦芽糖［1］。Β-淀粉酶（EC.3．2.1．2）水解淀粉的主要产物是麦芽糖,工业上可用于生产高麦芽糖浆,近年来又有β-淀粉酶用于啤酒工业的报道[2]。本文报道重组质粒pBA150的β-淀粉酶基因的序列分析及推导出的氨基酸序列同己知β-淀粉酶的氨基酸序列比较。     

贵州野生大麦麦芽品质性状的SSR标记分析

采用6对啤酒大麦的麦芽浸提和糖化力紧密连锁引物对103份采自贵州的野生大麦材料进行SSR标记。结果表明,贵州野生大麦麦芽品质性状存在丰富的变异,6对SSR引物共检测出38个等位变异,每个位点平均6.33个等位变异,其中GMS001位点对贵州野生大麦基因组DNA变异检测最有效。UPGMA聚类图显示,该6对与麦芽品质紧密连锁的SSR引物对区分野生大麦在贵州不同的资源产地和棱性是有效的,表现为遵义地区野生大麦遗传多样性丰富,而来自贵州凯里地区的野生大麦资源遗传多样性狭窄。麦芽品质性状标记结果表明贵州野生六棱大麦较四棱大麦的遗传差异更显著,表明进行贵州啤酒大麦人工育种的亲本应在亲缘关系较远的六棱大麦之间选择。     

二株高活力纤维素分解菌EA3-867和N2-78的获得及其特性的比较

拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii Rifai)野生型菌株AS 3．3002和木3,分别经多种物理化学因素(高能电子、60钴、紫外线、亚硝基胍、硫酸二乙酯等)诱变处理后,得到二株变异菌株EA3,-867和N2-78。它仉的固体曲、液体曲和酶制剂的各项纤维紊酶活力测定结果,均比野生型菌株明显提高。N2-78菌株经摇瓶培养60小时,其CMC糖化力为255毫克葡萄糖／毫升酶液,滤纸糖化力为8．2毫克葡萄糖／毫升酶液,棉花糖化力为13．4毫克葡萄糖／毫升酶液,分别比野生型菌株提高H．6倍、5．3倍和7倍。由EA3-867和N2-78的固体曲制取的纤维素酶粗制剂,其各项纤维紊酶话力测定结果,均较Onozuka R-10纤维索酶制剂为高。上述野生型菌株及变异菌株均具有果胶酶、半纤维紊酶、淀粉酶和少置蛋白酶的活力。变异菌株中果胶酶的活力较野生型菌株为高,淀粉酶和蛋白酶活力则较低。同时,变异菌株的形态也与原始菌株有明显差异。上述四株菌的孢子致死温度相同,CMC糖化、滤纸崩溃和滤纸糖化的最适pH相近,最适温度相同,分别为pH 4.4、60℃,pH4.8、60℃和pH4.8、60℃。     

巨大芽孢杆菌α-淀粉酶基因核苷酸序列分析

巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)AS1.127的淀粉酶基因的全碱基序列已被测定。结构基因由1982bp的单一开读框架组成。由DNA序列推测出的前体酶蛋白由659个氨基酸组成,N-端33个氨基酸为信号肽。成熟酶分子由626个氨基酸组成,分子量为68.676kD。该淀粉酶属糖化型α-淀粉酶。并与枯草杆菌(B.subtilis)168产生的糖化型α-淀粉酶之间有83.3%的同源性。分析发现两种菌产生的酶分子的N-端3/4的同源性为90.4%,而C-端1/4的同源性只有70%。序列排比结果说明在淀粉酶基因的趋异进化过程中,基因突变和遗传重组都曾起过作用。     

糯玉米SW70和SW22是一类新的淀粉合成酶基因功能缺失多突变体

糯玉米是一类相对于粮食玉米的重要天然突变体,其淀粉合成的遗传机制复杂而又多样。以糯玉米自交系5形22、普通玉米自交系5003、SW22（♀）和5003（♂）的杂种定向选育的糯玉米自交系SW70（自交4代）为材料,研究了自交系授粉后1、2、4周时,SW22、SW70和5003籽粒中ADP-葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）、淀粉合酶（SS）、淀粉分支酶（SBE）和淀粉去分支酶（DBE）共4个家族21个成员编码基因表达水平的变化。结果表明：1）SW22中多个淀粉合成酶编码基因的表达动态与SW70及5003中有显著差异。差异主要存在于淀粉合酶SS和淀粉去分支酶DBE基因家族：2）SW22及SW70籽粒中有明显的阢转录产物累积,但累积水平均显著低于5003籽粒中：3）SW22及SW70中颗粒结合淀粉合成酶编码基因Gbssm和异淀粉酶型去分支酶编码基因Iso2完全不表达．意味着SW22胚乳中GbssIIb基因和Iso2基因的功能完全缺失。目前,有关玉米籽粒中GbSSIIb和异淀粉酶型DBEIso2同时突变或单个基因突变均未见报道。推测淀粉合成酶基因GbssIIb和异淀粉酶型DBEIso2功能缺失以及耽功能部分缺失．共同导致了SW22和SW70籽粒中直链淀粉合成部分缺陷。     

枯草芽孢杆菌BF7658a-淀粉酶的性质

枯草芽孢杆菌(Baeillas subtilis) BF7658产生的a-淀粉酶(EC 3．2．1．1)在免疫学上与解淀粉芽孢杆菌(B．Amyloliquefaciens)产生的液化型一淀粉酶相同。 并且二者的a-淀粉酶的淀粉水解产物的层析谱带相同,分子量相等(约55000道尔顿),等电点相近(5．12和5．28);B．Subtilis Marburg 168a-淀粉酶分子量为64000道尔顿,等电点为6．12。因此,B.subtills BF7658产生的a-淀粉酶是液化型a-淀粉酶。因而建议将B．Subtilis BF7658改名为B．Amylolique]aeiens BF7658。     

酵母菌杂交育种——Ⅰ.酵母菌麦芽糖基因对麦芽糖发酵力的效应

为了研究酵母菌麦芽糖基因对麦芽糖发酵力的效应,我们从酵母菌分离出4个不连锁的麦芽糖基因。MALA、MALB和MALC是从啤酒酵母分离出的,MAL6是从卡尔斯伯酵母分离出的。用显微操作技术共组成20种不同基因组合和65个杂种。用不同基因型的二倍体杂种测定麦芽糖基因对麦芽糖发酵力的效应,结果表明: (1)根据单因子杂种产生CO_2的量可分为两类杂种,含MALA和MALB单因子杂种比含MALC和MAL6单因子杂种产生的CO_2量多。 (2)含MALA与MALB基因的纯合子与杂合子麦芽糖发酵力一样,而含其余两个基因的纯合子比杂合子产生CO_2量多。 (3)双因子杂种产生CO_2的量变化很大(2.8—4.9克),值得注意的是双因子杂种(MALB×MALA)产生的CO_2量最高,同时发现凡由MALB与另一MAL基因组成的双因子杂种表现出麦芽糖发酵力的相加效应(杂种优势),而由其他三个MAL基因组成的双因子杂种发酵力和亲株一样。 (4)多因子杂种(三因子、四因子杂种)麦芽糖发酵力和其双因子杂种相同。 这些实验结果提示在MAL基因和麦芽糖发酵力间有明显的相关性。