米非司酮对恒河猴母胎界面细胞凋亡和凋亡分子p53表达的影响

胎盘形成过程中发生活跃的细胞增殖、迁移和凋亡等活动。p53蛋白是参与调节细胞周期和凋亡过程的原癌基因。本实验用原位末端标记、蛋白印迹和免疫组织化学方法研究正常和米非司酮(RU486)处理后恒河猴母胎界面绒毛和蜕膜组织细胞凋亡及p53蛋白表达。在正常妊娠的恒河猴母胎界面,凋亡信号主要集中在合体滋养层和细胞柱内的一些滋养层细胞;p53蛋白主要定位于细胞滋养层。在母体蜕膜中,也在部分基质细胞中检测到细胞凋亡和p53蛋白表达。经过RU486处理2d后,胎盘绒毛和母体蜕膜中凋亡细胞数都显著增加,绒毛中增加的凋亡信号集中于细胞滋养层。同时,RU486处理也导致绒毛细胞滋养层和蜕膜基质细胞中p53表达明显增加。以上结果提示,在正常妊娠中,生理性的细胞凋亡和p53表达可能是控制细胞滋养层细胞增殖、保持胎盘组织动态平衡的一个重要机制;RU486终止早孕的可能途径之一是促进母胎界面细胞凋亡,推测p53参与这一过程。     

可溶性endoglin减弱人早孕细胞滋养细胞的浸润功能

本研究旨在探讨可溶性endoglin(soluble endoglin,sEng)对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响。采用胰蛋白酶-DNase消化法培养人早孕期(孕6～8周)细胞滋养细胞,传代后待细胞长满至70%～80%,分别加入没有添加(对照组)和添加sEng(10μg/L)的细胞培养液培养24h;Transwell技术检测细胞滋养细胞的浸润功能;RT-PCR法检测细胞滋养细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达;Western blot方法分别检测细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果显示,sEng组细胞滋养细胞浸润能力低于对照组。与对照组比较,sEng组细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白的表达明显下降(P<0.05)。以上结果提示,sEng可能通过调节人早孕细胞滋养细胞中MMP-2、MMP-9的表达而影响细胞的浸润能力,从而参与子痫前期的发生。     

改良的高纯度人早孕绒毛膜滋养层细胞培养方法

目的培养纯度较高的人早孕绒毛膜滋养层细胞,为研究胎盘绒毛在妊娠期间的作用及其机制提供细胞学基础。方法胰蛋白酶-DNA酶消化法分离培养绒毛膜滋养层细胞,再运用流式细胞仪细胞分选获得高表达HLA-G的人早孕绒毛膜滋养层细胞。流式细胞术检测分选前后原代培养细胞HLA-G的表达率,相差显微镜观察滋养层细胞形态学特点,免疫荧光显微镜鉴定细胞来源,台盼蓝染色检测细胞活力。结果通过流式细胞检测,分选前的原代培养细胞体系中HLA-G的表达率为86.5%,经过分选带有PE荧光/HLA-G阳性表达的原代培养细胞后,其纯度可达98.0%。倒置相差显微镜下,可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长。细胞角蛋白染色阳性,波形蛋白染色阴性,表明细胞性质为上皮来源的绒毛膜滋养层细胞。台盼兰排斥试验检测细胞活力,细胞活力良好,存活率超过92%。结论该方法可以有效获得高纯度的,具有生物学活性的人早孕绒毛膜层细胞,为在体外研究生理妊娠及病理妊娠中滋养细胞的作用提供了一种改良的技术手段。     

早期自然流产绒毛组织miR-10b表达及意义

目的:探讨miR-10b在早期自然流产绒毛中的表达及其临床意义.方法:应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测早期自然流产患者绒毛及正常早孕绒毛中miR-10b的表达水平;在滋养细胞系HTR8中上调miR-10b,研究miR-10b过表达滋养细胞的浸润功能改变.结果:①real-time PCR检测显示,miR-10b在早期自然流产患者绒毛表达(2.916±0.061)与正常早孕绒毛对照组(1.0±0.106)相比增高,差异有统计学意义(P＜0.001).②过表达miR-10b后,侵袭实验证实滋养细胞侵袭力明显增强.结论:miR-10b可能促进了滋养细胞浸润功能,参与了早期自然流产的病理过程.     

复发性流产患者阴道菌群变化及其与凋亡蛋白Bcl-2和Bax的相关性CSCD

目的 研究复发性流产(RSA)患者阴道菌群变化及其与凋亡蛋白Bcl-2及Bax的相关性。方法 将我院2016年1月至2019年1月收治的75例RSA患者纳入RSA组,并将同期于医院计划生育门诊自愿接受早孕吸宫流产的100例早孕妇女纳入早孕人流组。比较两组阴道菌群差异,IL-17、TNF-α水平及绒毛组织凋亡蛋白Bcl-2及Bax阳性表达量,分析血清IL-17及TNF-α与绒毛组织凋亡蛋白阳性表达间的相关性。结果 RSA组异常菌群检出率显著高于早孕人流组(P<0.05)。RSA组占比最高的三种异常优势菌分别为粪肠球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌,早孕人流组分别为解脲脲原体、白假丝酵母菌和无乳链球菌。RSA组血清IL-17水平显著低于早孕人流组,TNF-α水平显著高于早孕人流组(P<0.05)。RSA组绒毛组织Bcl-2阳性细胞数及Bcl-2/Bax水平均显著低于早孕人流组(P<0.05),RSA组绒毛组织中Bax阳性细胞数显著高于早孕人流组(P<0.05)。相关性分析显示,RSA组IL-17与绒毛组织Bcl-2阳性表达呈正相关,与绒毛组织Bax阳性表达呈负相关,TNF-α与患者绒毛组织Bcl-2阳性表达水平呈负相关,与绒毛组织Bax阳性表达成正相关。结论 RSA患者阴道异常菌群检出率高,其优势菌分布情况与早孕人流患者也存在差异,阴道异常菌群可能通过影响免疫细胞因子水平,导致绒毛组织凋亡蛋白Bcl-2及Bax表达异常造成流产,但其具体机制尚不明确。     

CXCL10和MMP-13在妊娠滋养细胞疾病滋养细胞中的表达及其临床意义

目的检测妊娠滋养细胞疾病滋养细胞中CXCL10和MMP-13表达情况,探讨其在滋养细胞疾病浸润和转移中的作用。方法采用免疫组织化学Powervision法检测40例早孕绒毛,30例葡萄胎,18例葡萄胎恶变(随访发生恶变),35例滋养细胞肿瘤(28例绒癌,7例胎盘部位滋养细胞肿瘤)中CXCL10和MMP-13的表达。结果CXCL10和MMP-13在滋养细胞肿瘤中表达阳性率和免疫反应性强度最高;在葡萄胎恶变组中表达阳性率和免疫反应性强度较高,但是低于在滋养细胞肿瘤中的表达阳性率和免疫反应性强度;在葡萄胎组和早孕绒毛组中表达阳性率和免疫强度较低。CXCL10和MMP-13在滋养细胞肿瘤中的表达,年龄<40岁组中表达低于年龄>40岁组;在临床分期分组(Ⅰ、Ⅱ)中表达低于临床分期分组(Ⅲ、Ⅳ);在FIGO预后评分分组低危组中表达低于高危组。结论CXCL10和MMP-13在早孕绒毛组织中低表达,而在滋养细胞肿瘤中高表达,提示其可能参与滋养细胞疾病的浸润和转移过程,因此联合检测CXCL10和MMP-13的表达可能对葡萄胎恶变的早期诊断以及对滋养细胞肿瘤的预后评估提供依据。     

柘木总黄酮对白血病K562细胞增殖、凋亡及EGR1/TP53通路的影响

[目的]探讨柘木总黄酮对白血病K562细胞增殖、凋亡及EGR1/TP53通路的影响。[方法]体外培养K562细胞,阴性对照组细胞不进行处理;阳性对照组用终浓度为10 mg/mL的甲磺酸伊马替尼干预,低、中、高剂量组分别用终浓度为50、100、200 mg/mL的柘木总黄酮干预。48 h后分别采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡情况,同时采用ELISA法检测各组细胞中IL-6、IL-12、TNF-α水平,Western Blot法检测各组细胞中EGR1、TP53、Wnt、β-Catenin和ERK1/2蛋白水平。[结果]通过生物学数据库http://wwww.hprd.org查找EGR1的相互作用蛋白,发现TP53与EGR1相互作用;与阴性对照组比较,阳性对照组和柘木总黄酮低、中、高剂量细胞增殖率和Wnt、β-Catenin、ERK1/2蛋白水平降低,细胞凋亡率、IL-6、IL-12、TNF-α和EGR1、TP53蛋白水平增加(P<0.05);与阳性对照组比较,各柘木总黄酮剂量组细胞增殖率和Wnt、β-catenin、ERK1/2蛋白水平增加,细胞凋亡率、IL-6、IL-...     

EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白表达的调节

目的:探讨EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白表达的调节,为EGb761的临床运用提供可行的依据。方法:LPS(1μg/m L)诱导不同时间后,western blotting检测THP-1细胞上清液中HMGB1蛋白含量变化及不同浓度EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白的表达和NF-κB的活性;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。共聚焦显微镜观察EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白核转位变化。结果:(1)LPS组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量在刺激6-12 h后明显高于空白对照组,而EGb761+LPS组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均显著低于LPS组(P0.05)。(2)EGb761处理LPS诱导THP-1细胞6 h后细胞上清液NF-κB活性表达量较空白对照组低,随着处理时间延长至12 h,NF-κB的活性表达量呈明显下降趋势(P0.05)。(3)LPS诱导THP-1细胞18 h后,细胞上清液中HMGB1蛋白含量呈明显升高趋势(P0.05)。(4)不同浓度EGb761对LPS诱导THP-1细胞18 h后,HMGB1蛋白含量较空白对照组有下降趋势,HMGB1蛋白含量随着EGB761浓度增加至100μg/m L呈下降趋势并呈浓度依赖效应(P0.05)。(5)LPS诱导THP-1细胞后,在共聚焦显微镜下可见胞浆中大量HMGB1蛋白标记分布,而EGb761+LPS共同诱导THP-1细胞后胞浆中可见少量HMGB1蛋白分布。结论:LPS可诱导THP-1细胞IL-1β、IL-6、TNF-α表达增多及NF-κB活化,导致HMGB1蛋白表达增多及核转位,而EGB761能抑制THP-1细胞IL-1β、IL-6、TNF-α表达及NF-κB活化,调节HMGB1蛋白的表达及核转位。     

坏死细胞释放IL-1β对血管平滑肌细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的研究坏死血管平滑肌细胞释放IL-1β对周围正常细胞侵袭和迁移的影响,并探讨其可能的机制。方法无血清低糖低氧条件下培养细胞,建立细胞坏死模型,收集坏死细胞培养上清液,用于干预正常血管平滑肌细胞。实验设坏死上清组（NCS）、IL-1β组、NCS＋IL-1RA组和对照组（Control）。Tran-swell小室实验和细胞划痕实验检测各组细胞侵袭和迁徙能力,RT-PCR和Western印迹检测各组MMP-2和MMP-9的表达,Western印迹检测各组NF-κB的激活情况。结果NCS组和IL-1β组细胞侵袭和迁移能力均显著高于对照组（P〈0．05）,NCS＋IL-1RA组细胞侵袭和迁移能力显著低于NCS组和IL-1组（P〈0．05）;对照组和NCS＋IL．1RA组NF-κB、MMP-2和MMP-9均显著低于NCS组和IL-1β组（P〈0．05）,IκB显著高于NCS组和IL-1β组（P〈0．05）。使用NF-κB特异性抑制剂处理后,NCS组和IL-1β组细胞侵袭和迁移能力显著性降低（P〈0．01）;MMP-2和MMP-9的表达也显著性减少（P〈0．01）。结论坏死血管平滑肌细胞能够上调MMP-2和MMP-9的表达,促进正常细胞的侵袭和迁移,且这种促进作用与IL-1β的大量释放诱导NF-κB的活化有关。     

姜黄素对小胶质细胞的活化的影响

目的:研究姜黄素对脂多糖引起的小胶质细胞活化状态的影响,并探讨TOLR4受体在其中的作用。方法:采用体外培养N9小鼠小胶质细胞系,脂多糖作为刺激,激活小胶质细胞。采用ELISA法检测小胶质细胞培养基中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;相差显微镜观测细胞形态;免疫细胞化学和western blot观测小胶质细胞TOLR4受体表达情况。结果:与对照组相比,暴露于100ng/ml脂多糖24 h的小胶质细胞促炎症因子TNF-α、IL1β和IL-6释放量明显增加(P0.05),姜黄素浓度为10μM时,可显著减少小胶质细胞释放TNF-α、IL-1β和IL-6(P0.05),此外,姜黄素还可改善小胶质细胞形态,并降低暴露于脂多糖中的小胶质细胞TOLR4受体的表达。结论:姜黄素可能通过抑制TOLR4表达,减轻了脂多糖对小胶质细胞的激活。     

沙门菌CWDMs脂代谢检测

采用毛地黄皂苷敏感试验和菌细胞胆固醇、甘油三脂及胆碱酯酶定性与定量分析法,检测伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌经L 型变异后形成的细胞壁缺陷突变株(CW DM )的脂类代谢活性,了解这些CW DM 变异的性质和探讨细菌细胞壁缺陷突变与细菌演变的关系。结果表明,沙门菌CW DM s 具有显著的胆固醇和甘油三脂代谢活性、对毛地黄皂苷高度敏感并且还具有与白色念珠菌相似的胆固醇和甘油三脂的含量,但未能检出胆碱酯酶活性。CW DM s返祖菌丧失了脂类代谢酶类和胞浆膜不含胆固醇,恢复了与其亲代细菌型相似的代谢特征。提示在沙门菌天然即存在有与脂类及胆固醇代谢相关的基因,细胞壁的缺陷导致这些脂类及胆固醇代谢基因活化,以致 CW DM s 能够表达固醇和甘油三脂代谢活性和胞浆膜含有胆固醇     

沙门菌CWDMs氨基酸代谢的检测

采用氨基氨利用生长试验和谷丙转氨酶（ＧＰＴ）、谷草转酶（ＧＯＴ）、乳酸脱氨酶（ＬＤＨ）、肌酸激酶（ＣＫ）、α－闳丁酸脱氢酶（α－ＨＢＤ）、γ－谷志肽酶（γ－ＧＴ）,酸性磷酸酶（ＡＣＰ）定性与定量分析法,检测伤ＣＷＤＭｓ变异的特点及其机制,探讨ＣＷＤＭｓ变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌ＣＷＤＭｓ变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌ＣＷＤＭｓ在仅含蛋氨酸或脯氨     

沙门菌CWDMs乳酸脱氢酶同功酶的观察

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的ＣＷＤＭｓ及其宁代细菌型和伤寒杆菌粗糙型的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同功酶,以了解沙门菌ＣＷＤＭｓ生物氧化的特点和机制,探讨ＣＷＤＭｓ变异的性质。结果表明,伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的细菌型及伤寒杆粗糙型在聚丙烯酰胺凝胶电泳后显示出相同的４种具有不同泳动速率的ＬＤＨ同功酶,但ＣＷＤＭｓ仅显示２种ＬＤＨ。ＣＷＤＭｓ的２种ＬＤＨ同功酶与其亲代细菌型及伤寒杆     

两种蚤的幼虫形态

关于蚤类幼虫形态的研究,进展比较缓慢,我国王敦清1956年首次描述7种蚤的幼虫形态以后,由柳支英,虞以新(1957),孙昌秀(1965),叶瑞玉(1982,1986),费荣中(1986)等学者先后共描述过约29种蚤的幼虫形态。到目前为止,我国已知蚤类幼虫形态约36种,隶属6科19属。本文描述未见报道的无棘鬃额蚤Frontopsylla aspiniformis Liu etWu(1960)和青海双蚤Amphipsylla qinghaiensis Ren et Ji(1979)两种蚤山幼虫形态。     

光照对蕨类植物配子体假根向重力性的影响

对８种蕨类植物配子体假根向重力性反应的研究结果表明,除卷柏Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ ｔａｍａｒｉｓｃｉｎａ Ｓｐｒｉｎｇ配子体假根无向重力性反应并且其生长方向与光照方向无关外,其它７种的配子体假根均有向重力性反应,并且假根的向重力性反应在配子体发育初期,因光照的方向不同而异,表现为负向光性。随着配子体发育至片状体阶段,光对其向重力性反应的影响逐渐减弱,而重力的影响增强。在蕨类植物配子体发育初期,光对     

中国鳐类脑颅的研究

作者解剖观察了33种,隶于4目、7亚目、15科、19属的中国鳐类脑颅的形态。研究结果认为:锯鳐目和鳐目是原始类群,它们均具吻软骨,其中圆犂头鳐科和团扇鳐科是特化类群。电鳐目亦具吻软骨,它们是特化和退化类群。在较高等的鲼目则无吻软骨。依据鳐类不同的分类阶元,其脑颅亦各具有不同的式型。