共查询到18条相似文献,搜索用时 234 毫秒
1.
胶源神经营养因子(Glialcellinederivedneurotrophicfactor,GDNF)是大鼠B49细胞系中分离纯化得到的一种蛋白质[1],由于其对多巴胺神经元的专一性的神经营养作用而被发现。GDNF成熟蛋白由134个氨基酸组成,具有两个N-糖基化位点。它属于TGF-β基因家族但与该家族其它成员的氨基酸序列同源性仅为20%,可能是一个新的亚家族。最近研究表明,它对发育中的运动神经元也有很强的神经营养作用[1]。对啮齿类[3,4],灵长类的弥猴[5]的活体试验表明,胶源神经营养因子是一种治疗神经退化发夹知病如帕金森氏症、肌萎缩性脊髓索硬化症等的非常有效的潜在药物。由于GDNF在体内含量极低而且公在发育早期表达,因而只有通过基因工程方法才能获得大量的GDNF。本文报道采用PCR方法从中国入基因组DNA 中扩增出编码GDNF的基因,并实现在大肠杆菌中的高效表达。这为进一步研究GDNF的结构和生物学功能打下了坚实的基础。 相似文献
2.
克隆人白细胞介素-26(human interleukin-26,hIL-26)基因,构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。对GenBank上报道的hIL-26基因进行序列分析后设计合成引物,利用RT-PCR技术从人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA中反转录并扩增得到人成熟肽IL-26基因。将得到的基因克隆到pMD18-T载体中,菌落PCR筛选、酶切鉴定并进行DNA序列分析。用BamHI和EcoRⅠ将目的片段切下,插入表达载体pBV220相应的位点。42℃热诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的20%,Western印迹法证实重组蛋白为特异性蛋白,分子筛纯化后纯度达90%以上。表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性,用RT-PCR检测复性的重组蛋白能促进PBMC合成IFN-γ。 相似文献
3.
人Leptin的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
用 RT- PCR自脂肪细胞 RNA扩增人瘦素 (leptin)基因的 c DNA片段 (约 50 0 bp)并克隆至克隆载体 p SK(+) ,获得重组质粒 p SK- OB,DNA序列分析显示获得的 Leptin基因和文献报道一致 .用限制酶 Eco R 和 Bam H 从 p SK- OB切下并插入原核表达载体 p BV2 2 0的相应限制酶位点 ,转化大肠杆菌 DH5α.转化菌株经 42℃诱导 ,SDS- PAGE检测和 Western印迹鉴定 ,获得高水平重组人瘦素的表达菌株 ,其表达量达菌体总蛋白的 30 %以上 . 相似文献
4.
重组人脑源性神经营养因子在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
按照人脑源性神经营养因子(hBDNF)基因成熟肽编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出360bp的片段,插入到改构载体pTIG-trx上,获得了pTIG-trx—BDNF原核表达重组质粒,限制性酶切分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为hBDNF基因成熟肽编码序列。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得了高效可溶表达,并对表达产物进行了分离纯化,得到纯度大于83%的样品,Western杂交证实该蛋白具有hBDNF抗原活性。 相似文献
5.
6.
7.
大鼠OB基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
采用RTPCR技术扩增大鼠OBcDNA编码区序列。PCR产物酶切后定向克隆至pUC19质粒。经核苷酸序列测定表明与文献报道的大鼠OBcDNA编码区序列一致。继之构建了pBV220rOB表达质粒并获得了OB基因在大肠杆菌中的特异表达。大鼠OB基因产物的获得为研究肥胖与某些非传染性疾病(如糖尿病、高血压病)间的关系提供了条件 相似文献
8.
CPIOA是一种由抗菌肽Indolicine经过序列改造,且对多数革兰氏阳性病源细菌具有较强抗菌活性的多肽序列。研究根据已报道的CP10A氨基酸序列,兼顾大肠杆菌密码子偏好性,设计CP10A的核苷酸序列,利用PCR技术合成相应的DNA序列,后克隆构建重组表达载体pET32a(+)-CP10A,转入大肠杆菌AIM94菌株。经IPTC诱导表达和15%SDS—PAGE电泳检测后发现产物以包涵体形式存在,且融合表达量占总蛋白的50%。在变性条件下经Ni—NTA亲合柱层析及复性,最终获得了较高纯度的可溶性重组蛋白。研究首次实现了CPl0A抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达,为进一步研究其生物学活性及应用奠定了一定的基础,同时也为研究抗菌肽表达提供了一种方法。 相似文献
9.
人脑源性神经营养因子基因的克隆及在大肠杆菌中表达何晓龙,路长林,王成海(第二军医大学神经生物学教研室,上海200433)关键词神经营养因子;基因克隆脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotic…i。血。tor,BD贾助是Bade等人... 相似文献
10.
人β2-微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 总被引:18,自引:1,他引:18
β2-微球蛋白(β2m)是主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子的轻链部分,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物,利用RT-PCR方法从人白细胞中克隆了β2m基因,并构建了成熟β2m的原核表达载体,在大肠杆菌中得到高效表达。表达的β2m大部分在包涵体中,经洗涤、变性和复性,并以强阴离子交换柱层析纯化,获得SDS-PAGE纯的人重组β2m,Western印迹法分析表明该蛋白具有与抗人天然β2m抗体反应的特性。此工作为制备MHCⅠ类分子四聚体奠定基础。 相似文献
11.
人白细胞介素—18基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
利用反转录PCR(RTPCR)法从人肝组织中分离人白介素18(hIL18)基因。克隆到Tvectoreasy载体中,经酶切初步鉴定后进行DNA序列分析,结果表明与文献报道完全一致。以pBV220为表达载体,在大肠杆菌中高效表达了hIL18基因,重组蛋白占菌体总蛋白的27.2%。为进一步研究其生物活性奠定了重要基础。 相似文献
12.
目的 :克隆并表达人可溶性增殖诱导配体 (sAPRIL ,即人APRIL105-250) ,为探索其在多种肿瘤细胞的增殖和存活以及促肿瘤形成中的作用奠定基础。方法 :从GENBANK中查找人APRIL蛋白 (编号:07588)序列 ,取其部分胞外 (APRIL105-250)序列设计引物 ,用RT PCR从扁桃体总RNA中扩增出人APRIL105-250基因 ,测序后将克隆载体经酶切并构建表达载体 ,在大肠杆菌中表达 ,并纯化蛋白。结果 :经克隆测序后进行同源比较 ,证实所克隆的基因即为人APRIL105-250 基因。在大肠杆菌中表达量达 43.6% ,获得纯化蛋白。结论 :成功克隆与表达、纯化了人APRIL105-250基因 ,为深入研究其功能奠定了基础 。 相似文献
13.
人白细胞介素22基因的分离及其在大肠杆菌中的克隆与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
白细胞介素 2 2 (IL 2 2 )是 2 0 0 0年发现的一种新的人类细胞因子 ,它在多种组织中均有表达 ,包括胰腺、脑 ,肝、小肠、直肠和肾等 .在功能方面 ,IL 2 2上调肝细胞急性期产物 ,参与炎症反应[1~ 3] ;诱导胰腺相关蛋白PAP1 Reg2和OPN的高表达 ,表明IL 2 2参与胰腺免疫功能反应[4 ] ;它对ConA刺激下Th1细胞IFN γ的产生没有明显的抑制作用 ,却大大抑制了Th2细胞IL 4的分泌 ,这对于哮喘有潜在的治疗作用[1] .我们利用反转录PCR获得了编码hIL 2 2成熟蛋白的cDNA ,并构建了高表达载体pBVhIL 2 2 ,… 相似文献
14.
小鼠Nanog基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
按照nanog基因编码序列设计合成引物,利用RT-PCB从小鼠的囊胚期胚胎中扩增得到该 基因,并将该基因克隆到pET-28b(+)载体上,获得pET-28b(+)-nanog原核表达重组质粒,限制 性酶分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为nanog基因编码序列。重组质粒转化大肠杆 菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达,western杂交证实该 蛋白具有6-His抗原活性,从而证实目的蛋白为Nanog蛋白。 相似文献
15.
霍乱毒素B亚单位基因(CtxB)的克隆及其表达 总被引:7,自引:0,他引:7
从霍乱弧菌中抽提基因组DNA,用PCER方法获取霍乱毒素B亚单位基因(CtxB)。序列分析结果表明,CtxB基因编码124个氨基酸,其中编码62位Thr的密码子与文献报道有差异。将CtxB基因插入质粒pGEX-4T-2,构建pGEX-CTXB表达质粒,转化大肠相菌BL21(DE30,筛选表达菌株CTXB/BL21。工程株经IPTG诱导表达,可产生大量的表达蛋白,经SDS-PAGE分析,融合蛋白分子 相似文献
16.
通过DNA体外重组技术,以pET-3b为表达载体,构建了重组表达质粒pET-6R(B)和PET-6R(B)4,分别编码28kD的hIL-6R配基结合区片段及其53kD的二联体蛋白,并为酶切分析和DNA序列分析所证实。SDS-PAGE分析表明,含有重组表达质粒的菌株可分别表达出28kD的蛋白rIL6R-28和53kD的rIL6R-53。重组蛋白分别占菌体总蛋白的45%和29%左右。重组蛋白主要以包涵体形式存在,Western印迹表明重组蛋白具有IL-6R的抗原性。 相似文献
17.
利用PCR技术和DNA体外重组方法,将内皮素A型受体(EndothelintypeAreceptor,ETAR)胞内区cDNA克隆到pUC18载体中进行序列分析。结果表明,DNA序列与预期结果完全相符。然后用低熔点琼脂糖回收插入到pUC18载体中的ETAR胞内区DNA片段,连接到pGEX2T融合蛋白表达载体的凝血酶位点下游,转化大肠杆菌JM103,得到的重组质粒命名为2T/ETAR。JM103(2T/ETAR)经30℃培养、IPTG诱导明显表达出ETAR胞内区融合蛋白,表达产物主要以包涵体形式存在。包涵体经变性和复性后,用亲和层析一步纯化法获得了较纯的ETAR胞内区融合蛋白,为进一步研究ETAR胞内区的功能打下了良好的基础 相似文献