μ阿片受体基因敲出（Knockout）小鼠模型的建立和阿片受体镇痛及成瘾机理的

１９９２年克隆出阿片δ受体后,已从不同种属的动物克隆出阿片受体的三个亚型μ,δ,和κ受体。最近法国Ｋｉｅｆｆｅｒ实验室的Ｍａｔｔｈｅｓ等利用小鼠胚胎干细胞基因敲出技术繁育成功了一个μ阿片受体缺陷的种系小鼠,这种小鼠除无μ阿片受体外,生长,发育,生殖和活动周期等正常小鼠无异,且小鼠的δ和κ受体的数量和分布,内源性阿片肽的表达和对热刺激的敏感性都与正常小鼠无异。给予该小鼠吗啡,无镇痛,位置偏受和身体依     

NMDA受体拮抗剂对阿片类药物耐受和依赖的阻断作用

本文综述阻断ＮＭＤＡ受体离子通道复合药物对阿惩耐受和成瘾发生的影响。行为药理学研究显示,非竞争性ＮＭＤＡ受体拮抗剂、竞争性ＮＭＤＡ受体拮抗剂和甘氨酸受占拮抗剂能抑制阿片耐受和戒断反应,其药理学特性明显不同于其他类型抗阿片耐受和成瘾的药物,阐述了ＮＭＤＡ受体拮抗剂治疗阿片类芗耐受和领事的系列化机制。并指出ＮＭＤＡ受体拮抗剂具有神经毒性。     

人IFNα具有镇痛作用并与阿片受体有关

人ＩＦＮα具有镇痛作用并与阿片受体有关朱千政张笑冰王晶张汝丽侯云德（中国预防医学科学院病毒学研究所,北京１０００５２）神经内分泌系统和免疫系统间具有广泛的相互调节作用,干扰素是第一个观察到具有激素作用的细胞因子,１９８１年Ｂｌａｌｏｃｋ等发现人白细胞...     

福尔马林致痛提高大鼠中枢μ阿片受体密度及电针的加强作用

用放射自显影方法观察到;（１）大鼠脚掌注射福尔马林后,某些与镇痛有关的脑区如尾核头部、伏隔核、杏仁核、中央灰质、脚间核、中缝大核、脊髓背角等结构中μ阿片受体密度明显增加（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）;（２）给予电针抑制痛反应的大鼠,在其大部分上述结构及扣带回、隔区、视前内侧区、内膝体、上丘、中缝背核及中央上核受体密度明显增加;与福尔马林注射组相比,脚间核、中央灰质尾端腹外侧区、腰膨大背角的受体密度进一步增加。从而在受体水平支持伤害性刺激可以激活体内内阿片肽能活动,而电针可以加强这一活动的设想。     

人源μ型阿片受体的cDNA克隆及转染CHO细胞的活性分析

μ型阿片受体是阿片类药物镇痛与成瘾的分子基础。从人脑组织总RNA通过RTPCR扩增获得μ型阿片受体的cDNA,将其克隆至pcDNA31(+)中,用酶切鉴定正确的重组质粒转染CHO细胞。筛选的单克隆细胞株,检测阳性的细胞克隆表达的μ型阿片受体介导胞内信号转导的能力。通过与激动剂和拮抗剂的信号转导分析证实,阳性的细胞克隆表达的μ型阿片受体与天然的μ型阿片受体具有基本一致的生物学特性,因此可以用来作为高效镇痛低成瘾药物筛选平台的候选细胞株。     

CHO细胞表达人源μ型阿片受体及其活性分析

μ型阿片受体在阿片类药物镇痛与成瘾中发挥重要作用 .从人脑组织总RNA通过一次反转录和两次PCR法扩增获得 μ型阿片受体的cDNA ,将其克隆至pcDNA3 1 (+)中 ,转染CHO细胞后 ,筛选单克隆细胞株并制备膜受体 ,检测重组细胞株表达的 μ型阿片受体与特异性配体的结合能力 .通过饱和性结合和竞争性结合试验证实 ,重组细胞株表达的 μ型阿片受体与天然的 μ型阿片受体具有基本一致的生物学特性 ,为进一步研究阿片受体与配体相互作用的分子机制打下了基础     

镇痛多肽——内吗啡肽-1的人工合成及活性研究

 用液相合成方法合成了具有镇痛作用的μ阿片受体的内源性配体——内吗啡肽 - 1(endomorphin- 1 ) ,该四肽为 Tyr- Pro- Trp- Phe NH2 .液相合成法是在氨基酸的 N端用 Boc(叔丁氧羰酰基 )作保护基 ,C端用 HOSu(N-羟基琥珀酰亚胺 )活化 ,与未加保护基的氨基酸在碱性条件下接肽 .先分别合成 C端二肽和 N端二肽 ,再缩合为四肽 ,产物的保护基用盐酸脱帽去除 .中间产物用薄层层析和熔点鉴定其纯度 ,最终得到了高纯度的四肽 .小白鼠脑室注射 (i.c.v)测定表明 ,8.2 5nmol剂量给药 ,其镇痛活性为 87% ,明显高于吗啡 (morphine) .     

阿片μ受体阻滞剂对习得性无助小鼠运动能力及抑郁、焦虑样行为的影响

目的 探讨阿片μ受体(μopioid recepters,μRs)阻滞剂对习得性无助小鼠运动能力及行为的影响。方法 将小鼠随机分为学习-消退组、共轭组、对照组。在小鼠学习逃避电击刺激实验前进行μRs阻滞剂β-FNA或生理盐水(Sal)预处理。将小鼠在旷场实验中的运动距离进行t检验以观察小鼠的运动能力,通过穿梭箱、强迫游泳、高架十字迷宫、旷场等实验探究阻滞μRs后小鼠无助行为的变化。结果 两组小鼠较对照组运动距离无显著性差异;两组小鼠在3 d学习期内的被电击时间无差异;两组小鼠第2天与第3天的鼻触器触碰总次数具有显著性差异(P<0.001)。结论 阿片μ受体阻滞剂对习得性无助小鼠的运动能力无影响,μRs在对小鼠的逃避厌恶刺激的行为形成过程中有着重要调节作用。     

脑内阿片受体PET成像及其在痛与镇痛研究中的应用

脑内阿片受体在痛与镇痛中的作用机制一直是神经科学领域研究热点之一。正电子发射体层扫描(positron emission tomography,PET)是目前在体定量检测脑内相关分子参与神经信号转导的唯一途径。本文在简要回顾阿片受体和内源性阿片肽的发现、生理功能及其脑内分布的基础上,对已应用或有望应用于人体的阿片受体选择性和非选择性示踪剂及其在PET成像中的应用进行介绍,并对阿片成像结果所反映的神经机制进行解读。鉴于脑内阿片受体在介导痛与镇痛中的重要作用,文中着重就近年来有关痛与镇痛的脑内阿片受体PET成像研究进展予以综述。     

醋酸铜诱导家兔排卵前LH峰过程中下丘脑μ—阿片受体密度的变化

下丘脑β-内啡肽（β-EP）活动减弱是排卵前GnRH／LH峰形成的重要因素，为了解下丘脑μ-阿片受体是否参与了这一过程，本文利用放射受体自显影结合计算机图像处理，观察醋酸铜诱导家兔排卵前LH峰过程中下丘脑μ-受体密度变化。给新西兰雌兔注射1％醋酸铜0．9ml（醋酸铜组）或生理盐水（对照组），于注射后不同时间处死，观察下丘脑内侧基底核（MBH）及视前内侧区（MPO）的μ-受体密度变化，结果表明：醋酸铜组给药后1hMPO部位μ-受体密度明显增加（P＜0．05），于给药后3及3．5h明显减少，LH峰出现。MBH部位μ-受体密度变化和MPO部位相似，对照组μ-受体及LH水平无明显波动。相关分析表明：MBHμ-受体密度变化和血LH水平呈显著负相关（γ＝-0．5481，P＜0．01）。上述结果表明下丘脑μ-受体减少与排卵前LH峰形成密切相关。     

外周炎性刺激条件下大鼠脊髓背角PPE mRNA及L-ENK样品和μ阿片受体样阳性结构的变化

以鹿角菜胶（ＣＡＲ）注射到大鼠一侧后爪的足底皮下作为伤害性刺激模型,分别于ＣＡＲ刺激后６、１２ｈ和１、３ｄ处死动物,对照组动物仅将盐水注入一侧后爪足底皮下,用原位杂交法和免疫组织化学法观察前原脑啡肽（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ阳性神经元、亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）和μ阿片受体（ＭＯＲ）样阳性结构在大鼠脊髓背角（ＳＤＨ）的分布和变化。对照组大鼠ＳＤＨ内可见到大量ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元,这些阳性神经元主要分布于Ⅰ、Ⅱ层和Ⅴ、Ⅵ层,ＣＡＲ刺激后６ｈ,刺激侧ＳＤＨ中ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元的数量明显增多,１２ｈ和１ｄ达到最高水平,３ｄ时略有下降,但仍高于正常水平。Ｌ－ＥＮＫ样阳性纤维和终末主要分布于正常大鼠ＳＤＨ的Ⅰ、Ⅱ层,ＣＡＲ刺激后１ｄ,Ｌ－ＥＮＫ样阳性结构在刺激侧ＳＤＨ中的密度略有升高,３ｄ后下降直至低于正常水平。ＭＯＲ阳性胞体和纤维主要分布于ＳＤＨ的Ⅱ层,ＣＡＲ刺激后１ｄ,刺激侧Ⅱ层中ＭＯＲ阳性结构明显增加,并持续到刺激后３ｄ。上述结果提示阿片类物质在伤害性信息调控中具有重要作用。     

人源μ型阿片受体与激动剂慢性作用介导的cAMP上调作用研究

μ型阿片受体是阿片类药物镇痛与成瘾的分子基础。从人脑组织总RNA通过RT-PCR法扩增获得μ型阿片受体的cDNA,将其克隆至pcDNA3．1( )中,转染CHO细胞后筛选单克隆细胞株,检测重组细胞株表达的μ型阿片受体与激动剂慢性作用介导的胞内信号转导能力。通过激动剂慢性作用信号转导分析证实,DAMGO能够明显抑制吗啡慢性给药引起的重组细胞株胞内cAMP水平的上调作用,初步揭示了阿片受体与特异性配体相互作用的信号转导机制。     

大鼠μ型阿片受体的pIRES2-EGFP质粒构建及其在HEK293细胞中的表达

提取大鼠脑组织总RNA,通过逆转录巢式PCR,扩增μ型阿片受体全长cDNA,克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,纠正点突变后,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,测序及酶切结果表明μ基因正确,μ-pIRES2-EGFP质粒构建成功.用脂质体法将μ-pIRES2-EGFP转染入HEK293细胞中,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光,应用免疫组化荧光可以观察到μ基因的高强度表达.     

阿片受体在大鼠丘脑中央下核和顶盖前区前核介导电针镇痛中的不同作用

本文旨在研究阿片受体是否参与丘脑中央下核(nucleus submedius,Sm)和顶盖前区前核(anterior pretectal nucleus,APtN)所介导的不同强度电针的镇痛作用。以辐射热诱发甩尾(tail flick,TF)反射潜伏期为伤害性反应的指标,观察了Sm和APtN微量注射阿片受体拮抗剂纳洛酮对不同强度电针“足三里”穴(St．36)抑制大鼠TF反射的效应。结果表明,Sm给予纳洛酮(1．0μg,0．5μl)阻断强电针(5mA)对TF反射的抑制效应,而对弱电针(0．5mA)的效应无明显影响;相反,APtN给予纳洛酮阻断弱电针对TF反射的抑制效应,而对强电针的效应无明显影响;纳洛酮供给到Sm或APtN邻近其它脑区对强、弱电针的效应均无影响。这些结果提示,Sm内的阿片受体参与介导强电针兴奋细传入纤维(A-δ和C类)产生的镇痛,而APtN内的阿片受体则介导弱电针兴奋粗传入纤维(A-β类)产生的镇痛。     

激活κ-阿片受体抑制小鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制

目的:探讨外源性κ-阿片受体激动剂U50,488H对小鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用及其机制。方法:选择成年雄性C57小鼠40只,将其随机分为4组:假手术组(Sham),缺血再灌注组(I/R),κ-阿片受体激动剂U50,488H+I/R组(U+I/R),κ-阿片受体阻断剂nor-BNI+U50,488H+I/R组(N+U+I/R)。建立小鼠急性心肌缺血再灌注在体模型,通过小动物超声仪检测小鼠心功能,采用氯化三苯基四氮唑-伊文思蓝双染检测心肌梗死面积,检测血清心肌损伤物LDH活性和cTnI含量,Western-Blot检测Ca MKII和磷酸化Ca MKII的表达。结果:与Sham组相比,I/R组小鼠心功能下降,心肌梗死面积增加,血清LDH和cTnI水平升高(P0.05),心肌组织内磷酸化Ca MKII的表达明显增加(P0.05);与I/R组相比,U+I/R组心功能改善,心肌梗死面积减小,血清LDH和cTnI水平降低(P0.05),心肌组织内CaMKII磷酸化被抑制(P0.05)。给予nor-BNI后,上述U50,488H的作用均被阻断。结论:κ-阿片受体激活可抑制CaMKII磷酸化并抑制心肌缺血再灌注损伤,改善心功能。     

钙离子对小鼠电针镇痛和吗啡镇痛影响的相似性

本工作以小鼠为对象研究了脑 Ca~(2 )水平与吗啡及电针镇痛的相互关系。脑室内注射杆菌肽和亮-脑啡肽能增强电针镇痛,后者可被腹腔注射 Ca~(2 )对抗。用多巴胺受体激动剂阿朴吗啡和拮抗剂氟派啶预处理并不改变 Ca~(2 )对电针镇痛的对抗作用,这表示脑内多巴胺类似不直接参与 Ca~(2 )对抗电针镇痛的作用。Ca~(2 )对抗电针镇痛和吗啡镇痛的时程十分相似。所有的结果表明,吗啡镇痛与电针镇痛的机理很可能是相同的。     

克班宁的镇痛作用部位及作用机制探讨

以探究克班宁的镇痛作用部位并初步明确其镇痛机制为目的。采用小鼠足趾注射甲醛法、热板法及腹腔注射醋酸(扭体法)所致疼痛模型,探讨克班宁的镇痛作用;以小鼠输精管经壁电刺激法,了解克班宁对吗啡受体的影响。结果发现克班宁在3.2 mg/kg时对三种疼痛模型均显示明显的抑制作用,并能明显抑制小鼠输精管经壁电刺激所引起的收缩,且该收缩不能被纳络酮所拮抗。因此,克班宁可能具有中枢样镇痛作用,但作用机制与吗啡受体无关。     

M受体对吗啡戒断大鼠脊髓和脑干NMDA受体基因表达及中脑导水管周围灰质中谷氨酸释放的调节

应用鞘内注射反义寡脱氧核苷酸技术和RT—PCR反应,观察毒蕈碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,M)对吗啡依赖大鼠脊髓和脑干NMDA受体NR1A和NR2A mRNA表达和中脑导水管周围灰质区(periaqueductal grey,PAG)中谷氨酸释放的影响。结果显示,吗啡依赖大鼠脊髓NR1A和NR2A mRNA表达明显升高,而脑干中NR1A和NR2A mRNA表达没有显著变化;注射纳洛酮后1h,吗啡戒断大鼠脊髓和脑干中NR1A和NR2A表达显著高于依赖组,经NMDA受体拮抗剂MK801(0．125mg／kg,i．p．)、M受体拮抗剂东莨菪碱(0．5mg／kg,i．p．)、M1受体拮抗剂呱伦西平(10mg/kg,i．p．)和NOS抑制剂L-NAME(10mg／kg,i．p．)处理后,脊髓和脑干中NR1A和NR2A基因表达都较戒断组明显减少。在纳洛酮激发前24h鞘内注射NR1A和M2受体的反义寡脱氧核苷酸(4μg／只),戒断症状评分值及脊髓和脑干的NR1A mRNA的表达均较对照组明显减少。吗啡依赖大鼠在纳洛酮注射前24h鞘内注射M2受体反义寡脱氧核苷酸(4μg/只),可以明显减少PAG内透析液中谷氨酸含量。上述结果提示：NMDA受体的基因表达和谷氨酸释放参与吗啡戒断过程,而这种表达受到M受体的调节。     

OPRM1(A118G)基因多态性与肺癌癌痛患者镇痛效果的相关性

目的:探讨阿片样物质受体(μ1 opioid receptor,OPRM1)(A118G)基因多态性与肺癌癌痛患者镇痛效果的相关性。方法:选取本院2017年3月至2019年10月收治的360例肺癌患者作为研究对象,判断患者阿片耐受与不良反应发生情况。收集患者血液指标,检测OPRM1(A118G)基因多态性情况并进行相关性分析。结果:在360例患者中,阿片耐受78例(耐受组),耐受率为21.7%;耐受组的性别、年龄、体重指数、肿瘤最大直径等与非耐受组对比差异无统计学意义(P0.05),两组临床分期与淋巴结转移等对比差异有统计学意义(P0.05)。OPRM1(A118G)基因共有AA、AG、GG三种基因型,两组人群的OPRM1(A118G)基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律;两组OPRM1(A118G)基因型分布差异具有统计学意义,耐受组的OPRM1(A118G)基因GG基因型比例显著高于非耐受组(P0.05),等位基因G频率显著高于非耐受组(P0.05);耐受组的呼吸抑制、恶心呕吐、头晕、皮肤瘙痒等不良反应发生率为35.9%,显著高于非耐受组的2.8%(P0.05)。直线相关性分析显示OPRM1(A118G)基因GG基因型与阿片耐受、淋巴结转移、临床分期都呈现相关性(P0.05);二分类变量Logistic回归分析显示OPRM1(A118G)基因GG基因型、临床分期、淋巴结转移为影响阿片耐受的主要因素(P0.05)。结论:肺癌癌痛患者在镇痛中存在阿片耐受情况,与患者的OPRM1(A118G)基因多态性与治疗不良反应显著相关,OPRM1(A118G)基因GG基因型、临床分期、淋巴结转移为影响阿片耐受的主要因素。