用土壤杆菌确立了玉米性状转化技术

日本烟草产业(JT)遗传育种研究所研究员石田祐二等利用植物病原菌根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefacience)确立了玉米性状转化技术,于7月15日在东京召开的组织培养学会发表。 以前利用土壤杆菌的基因导入技术(Agrobacterium法)是适用于向双子叶植物中导入基因的简便的导入法。但是不适用于向单子叶植物中(Agrobacterium不能作为宿主)导入基因。JT公司1994年开发了世界第一个使用土壤杆菌向单子叶植物水稻中稳定地导入基因的技术。这次确认用同样的方法也能向玉米中     

根癌土壤杆菌转化水稻研究进展

就根癌土壤杆菌介导的水稻基因转化的研究现状,影响转化的一些因素和利用根癌土壤杆菌转化水稻的一些应用作一综述,并对目前根癌土壤杆菌介导水稻基因转化中存在的问题及解决办法作出评价。     

根癌土壤杆菌介导的水稻高效转化和转基因植株的高频再生

利用根襄封杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）介导的转化方法对４个粳稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．ｓｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）品种和２个灿稻（Ｏ．ｓａｔｉｖａ ｓｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）品种进行了转化。在对影响根癌土壤杆菌转化水稻效率的多种因素进行比较研究后,建立了根癌土壤杆菌介导的水稻高效转化和再生系统。将水稻成熟胚和未成熟胚来源的     

开发利用土壤杆菌的无标记植物性状转化法

日本烟草产业（ＪＴ）公司成功地开发了可从性状转化植物高效地去除选择性标记的利用土壤杆菌的无标记性状转化法。不仅限于双子叶植物,也能进行单子叶植物水稻的基因导入。ＪＴ公司在川崎市召开的日本育种学会上发表了该项成果。在植物的性状转化中使用了卡那霉素等基因,但是,如果能排除标记,就能反复使用单一标记,所以希望此法能在需要导入代谢系基因群等多种基因时使用。因此,选择标记的去除法是植物重组育种必需的技术。ＪＴ公司开发的载体是在其１９９４年开发的、土壤杆菌（不仅能向双子叶植物中导入基因而且也能向水稻和玉米等…     

诱导根癌土壤杆菌vir区基因表达信号分子的构效研究

以根癌土壤杆菌为介导的外源基因转化系统是目前应用最为广泛和有效的植物基因转化系统。根癌土壤杆菌D质粒毒性区。irA、virB、。irC、。irD。。irE、。irG6个基因位点,在外源诱导性信号分子的作用下,表达出转移DNA（T－DNA）复合物,整合人植物细胞核基因组中。利用根癌土壤杆菌这种天然的转化机制,已获得双子叶转基因植株。但单子叶植物难以被根癌土壤杆菌转化,某些研究者认为这是由于单子叶植物缺乏促使根癌土壤杆菌产生趋化运动以及诱导。ir区基因表达的信号分子［‘」。我们从幼穗分化期至抽穗扬花期水稻中分离获得2种高效…     

抑制根癌土壤杆菌生长和转移的水稻信号分子的鉴定

从水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｃｖ．ＩＲ７２）根中分离出一种高效抑制根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｎｅｆａｃｉｅｎｓ（ＳｍｉｔｈｅｔＴｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）生长及抑制根癌土壤杆菌在水稻细胞表面附着的水稻信号分子：乙基４－（邻硝基苯基）－３－硫代脲酸酯（Ｔ）,该化合物是一种新发现的天然的硫脲化合物,对根癌土壤杆菌生长和根癌土壤杆菌在水稻细胞表面附着具有较强抑制作用,水稻对根癌土     

影响根癌农杆菌介导水稻转化的因素分析

根癌农杆菌与来自水稻成熟种子盾片的愈伤组织共培养,将GUS基因导入水稻愈伤组织,并获得了转基因植株。通过比较影响根癌农杆菌转化频率的各种因素,表明激素配比为2,4-D1mg/L、TDZ0.5mg/L、NAA1mg/L时,可以大大促进籼稻愈伤组织的分化能力;酚类化合物的加入使农杆菌的转化频率提高8.9%-23.5%;共培养时农杆菌的稀释方式及适当调整潮霉素（hygB）的使用浓度影响到农杆菌的转化频率。     

根癌农杆菌介导的水稻遗传转化

就根癌农杆菌介导水稻遗传转化的研究历程和影响农杆菌转化水稻的几个关键因素以及这一问题的前景作了评述和展望     

根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究及应用

根癌农杆菌介导转化法（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT）具有转化效率高、遗传稳定、适用范围广等诸多优点,已成为真菌遗传转化研究中的强有力手段,在真菌基因资源开发、真菌性疾病研究和外源蛋白表达研究中发挥巨大作用。本文概述了根癌农杆菌转化法在真菌转化中的研究进展、技术优缺点、转化机制、实验方法和应用现状,着重介绍影响其转化效率的因素并对优化方法进行探讨,展望了该技术在真菌基因资源发掘、基因编辑等方面的应用前景,为今后真菌的遗传转化研究提供参考。     

植物遗传工程

质粒pGKB5的根癌土壤杆菌C58C1细胞悬浮液渗 入拟南芥生态型Wassilevskija植株。鉴定了高频 获得的转化株。它们含有转化的和未转化的营养部 分。转化频率平均为5个转化株/接种植株。遗f争 和分子学分析表明,花发育晚期出现转化,因所有 的转化株均是半合子,含有不同的T-DNA插入 物。以前用种菌转化法亦获类似结果。开始了一大 规模工程以产生5～10万T-DNA插入突变体。目 前正在分析最初的4000个转化株。此转化法适于那 些组培和/或繁殖困难的植物品种的转化。 (李思 经) 941953 豌豆对根癌土壤杆菌和发根土壤杆菌菌株转化反应 的变异…     

水稻转化体系的改进及转os-miR398基因植株的获得

针对根癌农杆菌介导的愈伤转化技术在实际应用中转化效率低及农杆菌污染等问题,对该方法在水稻转化过程进行改良:(1)在转化前将空白愈伤从培养基取出,于室温放置在空白皿中约24 h,使之处于饥饿状态,以利于T-DNA转化并提高转化率;(2)在愈伤与农杆菌共培养并经无菌洗脱后,在转移到相应培养基之前,将其于室温下继续放置在含有滤纸的培养皿里约24 h,从而有效地抑制农杆菌生长.采用本改良措施,成功将所克隆构建的os-miR398(水稻microRNA398)前体基因表达载体转化入水稻,与对照相比,改良后水稻转化效率可提高10%.     

通过基因枪提高根癌土壤杆菌转化水稻的效率

携带普通双元载体的根癌土壤杆菌（Ａgrobacterium tumefaciens (Smith et Townnsend)Conn)EHA105菌株对粳稻（Oryza sativa L.ssp.japonica)中花８号不敏感,转化效率较.在因枪将根癌土壤菌细胞直接轰击到水稻愈伤组织中可以显提高其转化效率。Ｓouthern检测证明转基因植物含有单拷贝的外源基因插入片段,转基因植物后代的ＧＵＳ基因表达呈３：１分离。     

根癌农杆菌在丝状真菌转化中的应用

原生质体转化法是丝状真菌转化的传统方法,但其过程繁琐且转化效率低。根癌农杆菌介导的转化方法原本是进行植物遗传转化的标准方法,但近年来发现该方法还可用于丝状真菌的转化。根癌农杆菌介导的丝状真菌转化具有操作简便、转化效率高、重复性好等优点,从而可以解决丝状真菌转化难的问题。在本文中,就其转化机制、特点和转化条件优化等方面的最新研究进展进行了综述。     

粒子枪促进土壤杆菌介导的转化

Pioneer Hi-Bred的科学家D.Bidney及其同事们发现,在用根癌土壤杆菌转化植物组织之前,对该组织进行微弹轰击,可促进转化作用。Bidney的研究小组用钨粒子轰击烟草叶和向日葵顶端分生组织,然后用含GUS或卡那霉素抗性基因的根癌土壤杆菌处理。他们发现,与未经轰击的组织相比,前粒子轰击能提高转化频率。在产生卡那霉素抗性的集落中,对烟草叶进行微弹轰击和土壤杆菌的转化作用相结合至少比只用包有DNA的粒子轰击进行直接转化要有效100倍。在向日葵分生组织衍生的植株中可观察到相似的结果。     

根癌农杆菌转化禾谷类作物及影响其转化的因素

综述了根癌农杆菌转化禾谷类作物的研究现状,根癌农杆菌与禾谷类作物间的相互作用研究,根癌农杆菌成功转化禾谷类的例子;影响根癌农杆菌转化成功的因素,如菌株类型,感受态细胞的选择,Vir基因的活化,选择合适的转化途径等。这些将为利用根癌农杆菌介导的方法,将外源基因导入禾谷类作物提供有益的帮助。     

玻璃珠促进土壤杆菌介导转化植物

Bidney等人曾报道,在土壤杆菌介导转化前先对组织进行微弹轰击可促进土壤杆菌介导的植物组织的转化。最近,美农部科学家W.S.Grayburn及B.A.Vick提出了一种通过创伤方法来促进土壤杆菌介导转化向日葵的技术。该方法勿需采用微弹轰击所需的专门的设备。 方法是:先除去向日葵的子叶,露出苗尖,将之与玻璃珠一起摇动,使向日葵胚性籽苗受伤,然后将籽苗与一种携带含gus基因质粒的根癌土壤杆菌毒性株共培养。转化后,籽苗生长发育为成熟的可育植     

发根农杆菌及其应用

农杆菌是一类侵染性非常广泛的Ｇ-土壤杆菌,农杆菌质粒介导的基因转移系统是植物基因工程中比较完善与有效的基因转移方法。在众多的转基因植物中有80%是由农杆菌介导转化的,但其中大部分是有根癌农杆菌Ｔｉ质粒介导法获得的。根癌农杆菌含有的Ｔｉ质粒,能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤,即诱发冠瘿瘤。发根农杆菌含有Ｒｉ质粒,侵染植物后能诱发植物细胞产生毛发状根,即发根瘤。近年来的研究发现发根农杆菌Ｒｉ质粒介导法比Ｔｉ质粒法具有一定优越性而被广泛重视,而且由其转化获得转基因植物和生物有效成分的报道愈来愈多,本文主要讨论发根农…     

基因工程技术在马铃薯遗传育种研究中的应用

在马铃薯育种研究中基因工程技术的应用与其他植物相比或与染色体工程技术和细胞工程技术相比,虽然起步较晚,但近年来进展较快,有些研究结果已开始由理论研究转入应用,发展前景令人鼓舞。 1.利用土壤杆菌进行遗传转化和基因转移 1)菌种方面:用土壤杆菌对马铃薯进行遗传转化的研究最早始于1977年,Anand和Hederlein用马铃薯块茎组织诱导出冠瘿瘤。在1985年以前一般都采用野生型菌种进行研究。如1991年Pueppke等用马铃薯两个品种的块茎圆片测定了土壤杆菌属4个种共22个菌系(根癌土壤杆菌18系,发根土壤杆菌1个系,     

根癌农杆菌介导里氏木霉转化体系的建立和条件优化

目的:采用根癌农杆菌介导的转化方法实现丝状真菌里氏木霉的遗传转化,并优化转化条件.方法:构建含潮霉素抗性基因(hph)的双元载体pCAM-hph后,转化根癌农杆菌LBA4404获得转化菌株.将根癌农杆菌的转化菌株和里氏木霉的分生孢子共培养后在含100μg/mL潮霉素的抗性平板上筛选里氏木霉转化子,并采用PCR扩增和序列测定对转化子中的插入片段进行了分析.结果:使用根癌农杆菌介导的转化方法转化里氏木霉,每106个分生孢子可获得25.8个转化子.最佳的转化条件为:农杆菌初始浓度为OD660约为0.8,孢子数为106个,共培养时间为48h,pH为5.0～5.5,培养温度为28℃.结论:建立了根癌农杆菌介导的里氏木霉转化方法,并获得了最佳的转化条件.     

高效、快速地将外源DNA导入根癌土壤杆菌

室温下用50mmol/LCaCl_2处理根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)以制备感受态细胞,然后经0℃冰浴及28℃热击处理,成功地将Ti质粒中间载体(>10kb)导入了根癌土壤农杆菌中。转化效率每个活细胞可达10~(-4)～10~(-5)转化子或10~6转化子/μgDNA。探讨了该菌细胞生长状态、CaCl_2滚滚浓度、温度、液氮、热击、复苏时间以及感受态细胞于4℃或—20℃(加15％甘油)下保存时间对根癌土壤杆菌转化的影响。