分泌抗加压素单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立(之一)

基于深入研究加压素在体内的作用的需要,特制备其单克隆抗体。以赖氨酸加压素为抗原免疫小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选出两株特异性高的杂交瘤细胞,产生的抗体对赖氨酸加压素有强的结合反应,对精氨酸压素有一定的交叉反应,对催产素基本无反应。鉴定证明,此抗体属IgG1亚类,为纯的、均一性的单克隆抗体。     

一种改进的分泌抗半抗原抗体杂交瘤细胞株筛选方法

目的:研究解决半抗原分子单克隆抗体制备技术路径中遇到的在阳性杂交瘤细胞株筛选时无法排除载体蛋白间交叉反应影响的问题,以半抗原去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)为例。方法:在NE完全抗原免疫小鼠实施细胞融合后,分别包被牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、BSA-NE、OVA-NE等4种不同抗原的酶标板平行检测细胞培养上清液;挑选BSA、OVA检测结果为阴性,BSA-NE、OVA-NE检测结果为阳性的孔内细胞进行克隆化筛选单克隆细胞。结果:本筛选方法可一次性从8板96孔板中筛选到13个符合要求的阳性孔,经3次克隆化后获得6株特异性强的杂交瘤细胞株。结论:本方法避免了载体蛋白间交叉反应对筛选的影响,改进了传统的单一指标筛选方法,筛选效率更高。     

抗仙台病毒杂交瘤细胞株的建立及所分泌单克隆抗体的部份理化性质

将经纯化仙台病毒免疫的Balb/c小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,经5次克隆和1次亚克隆,筛选出两株(5个亚株)分泌抗仙台病毒单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。在组织培养上清液中,它们的HAI滴度为1:10～1:160,ELISA滴度为1:256～1:512;在腹水中,HAI滴度为1:320～1:1 280,ELISA滴度为1:32 000～120 000,抗体均为IgM。染色体数目为90～110条。 用该McAb所做的补体结合、中和及被动免疫试验均呈阴性反应,用免疫酶方法对电泳转移所得到的     

抗卵清蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备

为制备分泌抗卵清蛋白的杂交瘤细胞,以高纯度的卵清蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得杂交瘤细胞,用ELISA间接法检测上清液中的抗卵清蛋白抗体效价,经3次单克隆化筛选,获得5株分泌抗卵清蛋白抗体的杂交瘤细胞株。     

人—人杂交瘤:分泌抗链球菌溶血素O单克隆抗体细胞株的建立

用人骨髓瘤细胞株和人脾脏细胞在PEG促进下进行人—人杂交,育选出能分泌抗链球菌溶血素O单克隆抗体杂交瘤S_1—19和S_1—22两株,共传了50多代,历时五个月,单克隆抗体分泌稳定,抗体为IgG型,杂交瘤染色体为68—76条而亲代细胞株仅为43条,证实杂交瘤是成功的。     

分泌抗芜菁花叶病毒株系特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及抗体理化性质测定

用经芜菁花叶病毒(TuMV)免疫的BALB／c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2／0－Agl4)融合,经3次克隆化培养和ELISA筛选,建立了5类分泌抗TuMV的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。其中4类分别对TuMV－CI株系、TuMV—C3株系、TuMV—C4株系和TuMV－c5株系具有特异性反应,第5类对TuMV 5个株系均有反应。以双抗体夹心ELISA和间接ELISA检测,上述McAb同CaMV、CMV、TMV、PVX和PVY等均不产生交叉反应,小鼠腹水McAb的滴度在1：256000--2048000之间,多为1：1024000,比常规多抗血清高400倍左右。对上述杂交瘤细胞系和McAb的生物学特性及理化性质进行了鉴定。用SDS—PAGE、Western—blotting对TuMV外壳蛋白亚基、McAb识别位点进行了分析,并就McAb区分TuMV株系进行了讨。     

分泌抗脊髓灰质炎 Ⅱ型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系

许多年来细胞生物学家进行了很多有关细胞杂交的实验研究,将具有不同遗传特性的两种动物细胞进行融合,形成一种新的杂交细胞,用来进行特定基因在染色体上的定位、基因表达以及动物细胞其它遗传特性的变化等方面的研究。为了观察免疫球蛋白产生的遗传控制,许多实验室进行了小鼠骨髓瘤细胞与其它细胞系之间相互融合的试验。在这样的研究中,Khletr和Milstein 1975,1976)证明,培养的小鼠骨髓瘤细胞能够同用羊红血球免疫了的动物脾细胞发生融合,从中选择出少量的杂交瘤细胞,它可在体     

抗牛血清IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用牛血清IgG免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用含山羊血清的培养基培养细胞,上清用间接ELISA法筛选。获得4株能稳定分泌抗牛血清IgG的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为1G5、2A8、3F5、4C5。其中2A8为IgG2a,其余3株为IgG1;腹水单抗的ELISA滴度均超过10-5;除3F5株单抗与山羊血清有交叉反应外,1G5、2A8、4C5株与人、马、猪、羊、兔、豚鼠等血清均不发生交叉反应;4株单抗与制备病毒性疫苗的基质液呈阴性反应;4株单抗识别分子量为160kD的牛血清IgG的两个不同抗原表位;4株单抗相对亲和力大小依次为4C5>2A8>1G5>3F5,相对敏感度依次为2A8>4C5>3F5>1G5;4株杂交瘤细胞株的染色体计数均大于90条,连续培养三个月以及冷冻保存半年后复苏,细胞生长良好。使用这些单抗建立的双抗体夹心法检测生物制品中的残留牛血清IgG。     

产生抗登革热Ⅰ型病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用登革热Ⅰ型病毒(夏威夷株)兔疫的小白鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得7个产生抗登革热Ⅰ型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系,这些杂交瘤细胞上清液及小鼠腹水抗体均用间接兔疫荧光法检测,其中3个杂交瘤细胞系产生的抗体对登革热Ⅰ型病毒具有型特异性。     

分泌抗马铃薯X病毒株系特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及抗体理化性质测定

用马铃薯x病毒(Pvx)免疫的BALB／c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2／0)融合,经3次克隆化后,筛选出3类分泌抗PVx株系特异性的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,该细胞株经传代20代以上,并经液氮冻存一年以后仍表现稳定。3个杂交瘤细胞株染色体数目集中在92—102条之间,其免疫球蛋白亚类均为IgG3,用ELlsA间接法测定细胞培养上清滴度为1：320—1：640,小鼠腹水抗体滴度为1：102400—1：204800,后者比兔抗血清滴度(1：320)高300倍以上。McAb对抗原具有中和作用,中和滴度为1：102。经反复冻融、硫铵沉淀和冻干后,抗体活性无明显变化。     

分泌人源性抗链球菌溶血素O单克隆抗体人—人杂交瘤细胞株的建立

自从淋巴细胞杂交瘤1975年创立以来（Kohler et al.,1975）越来越显示其优越性,（Sikora et al.,1982）,从其发展看来,前景广阔,针对恶性肿瘤,白血病和组织移植等提出了崭新的疗法。由于鼠源性单克隆抗体在临床应用上往往引起过敏反应和形成免疫复合物的危险性,激励着科学家们去开拓人—人杂交瘤,尽管前进的道路上还存在着许多困难,但人们还是不屈不挠地前进。目前,世界上共有三个人—人杂交瘤系统。（1）0lsson和Kaplan等培育的SKO—007人骨髓瘤细胞系统。（2）Croce等培育的GM 1500细胞系统。（3）Clark等的RPMI8226细胞系统。并且都进行了人—人杂交瘤的研究,但是多数杂交瘤阳性率低和分泌抗体量少。国内北京、上海、西安和昆明等都正在开展本项研究。我们从1984年8月,开始人单抗的研究,也碰到许多困难,深深体会到建立一个具有我国特色的人—人杂交瘤系统是十分重要的,现将我们的工作简要报告如下。     

连续分泌抗北京鸭红血球单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-1

以北京鸭红血球为抗原免疫Balb/cJ小鼠,三天后取脾细胞与小鼠NS-1骨髓瘤细胞在PEG作用下,用两种方法进行细胞融合。只有淋巴细胞杂交瘤细胞能在一种选择性培液——HAT液中生长,具有分泌抗体活性的杂交瘤细胞,借助其上清液的斑点试验加以选择。对斑点试验阳性的杂交瘤细胞进行克隆化和扩大培养,得到能专一分泌抗北京鸭红血球单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤,定名为CBH-1。在体外经过69代培养,历时十月余,分泌能力仍未见衰减。体内可传4—5代,腹水中可检出大量分泌抗体。用降植烷、Arlacel A和石蜡油诱发动物的腹水,其量以降植烷最高、石蜡油次之。使用国产石蜡油作为诱发腹水试验似具有一定实用价值。加5γ转铁蛋白至每毫升不含牛血清的DMEM液中,在15天的培养期内,结果至少与加20%小牛血清的培液的结果相似。首次克隆化后的CBH-1细胞中,空斑形成细胞达97.5%,再次克隆化的细胞中,空斑形成细胞达99.8%,证明是均一的细胞群落。本文还就杂交瘤制备过程及细胞稳定性问题进行了讨论。     

连续分泌抗北京鸭IgM单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-2

以北京鸭Ig为抗原免疫Balb/cJ小鼠三次,末次免疫三天后取脾细胞与小鼠NS-1骨髓瘤细胞融合,隔天换入1/2体积含有2倍HAT的完全DMEM选择培养液,借助酶联免疫吸附试验检测上清液。测得阳性的一株杂交瘤细胞经十二次克隆化培养被定名为CBH-2。在体外培养历时10月余,其分泌能力仍未见衰减。体内传至第八代,腹水中检出的分泌抗体强度比体外培养的上清液高8000倍。纯化得到的单克隆抗体经免疫双扩散分析证明该单克隆抗体属鼠1gG_1亚型。以经Sephadex G-200分离得到的北京鸭IgM作为包被抗原,酶标法测得的O.D值较高,而以北京鸭IgM经巯基乙醇断链后的蛋白或以DEAE-52柱分离得到的IgG作为包被抗原测得的O.D值较低。同时,以北京鸭Ig经Protein A-Se-pharose CL4B柱五次吸附后的流出蛋白包被,测得的O.D值也较低。由此可见CBH-2细胞产生的单克隆抗体专一性是抗北京鸭IgM。CBH-2细胞分泌的单克隆抗体与北京鸭Ig的免疫扩散未见沉淀线。用Balb/cJ、C_(57)BL/6J和ICR/JCL小鼠的腹腔渗出细胞作为克隆化的饲养细胞能达到相似效果。而以Wistar大鼠的腹腔渗出细胞作为饲养细胞效果较差,使用胸腺细胞时杂交瘤细胞则几乎不能生长。