医学分子遗传学：第八讲 重组DNA技术与基因定位

人体基因组是一个十分复杂的结构,每单倍体基因组大约有3×10~9bp组成,分成22条常染色体和1条性染色体。据估计,在人体基因组上存在着大约50,000—100,000个结构基因,平均每分摩(cM)染色体上分布着20个结构基因。人体基因组大约有33cM,由此推算出人体基因组上含有约66,000个结构基因。现在已经明确地鉴定出了1,600多个人体基因,     

分子细胞遗传学在软组织肿瘤中的应用

软组织肿瘤是发生于纤维组织、脂肪组织、平滑肌、骨骼肌、滑膜等间叶组织的一组病因复杂,组织形态各异,临床表现多样的肿瘤.软组织肉瘤是此类肿瘤中的一小部分,以独特的临床袁现和特异性的遗传学改变为特点,虽然占人类所有恶性肿瘤的比例不到1%[1],但它们同样严重威胁着人类的生命并具有重要的诊断和治疗意义.随着组织化学染色、电镜技术和免疫组化技术等辅助手段的广泛应用,人们对软组织肿瘤的发生、发展和分类、诊断等方面有了更深刻的认识,特别是对其分子水平的研究表明除癌基因和抑癌基因的点突变之外,染色体易位和缺失所致的基因重排和丢失也是软组织肿瘤发生的重要分子机制.这使得分子细胞遗传学在软组织肿瘤研究中具有了重要作用和特殊意义.本综述通过分析分子细胞遗传学技术在软组织肿瘤的分类、诊断及预后等方面的应用,客观评价了此技术的作用、优缺点及未来的发展方向.     

DNA分子标记和基因定位

总结了现代分子生物学所发展出来的各类分子标记,并对分子标记应用的一个重要方面－－基因定位进行了详细阐述。     

医学分子遗传学：第四讲 多基因病分子遗传学

多基因病是一种异质性疾病,是遗传因子和环境因子相互作用的结果。它的性质相当复杂,其中某些疾病仅仅是由单个基因座位与个别环境因子相互作用所致,而有些则是由多个基因座位的微小效应叠加在一起相互作用引起。尽管多基因病的遗传因子较为复杂,但在不少多基因病中往往有一个或少数几个遗传因子的作用比较明显。这就为多基因病的分子遗传研究提供了重要途径。下面着重介绍有关高脂血症和糖     

DNA修复基因RAD24的分子克隆和序列分析

利用缺口修复（ｇａｐｒｅｐａｉｒ）方法克隆啤酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）野生型ＲＡＤ２４基因,并将其亚克隆到Ｍ１３ｍｐ１８和Ｍ１３ｍｐ１９,用双脱氧末端终止法对该基因的两条链均进行了序列测定,ＤＮＡＳｔｒｉｄｅｒ程序分析显示该基因编码２６８个氨基酸的蛋白质,基因缺失试验表明,该基因为细胞生存所必需。     

江苏省植物细胞遗传学研究回顾与展望

20世纪初"遗传的染色体学说"的提出和证明标志着细胞遗传学交叉学科建立,伴随相关学科的发展,20世纪60年代末期细胞遗传学又与分子遗传学相结合,建立发展了分子细胞遗传学交叉学科.分子细胞遗传学以DNA分子原位杂交技术为核心,不断拓展应用领域,为生命科学研究提供了直观、高效的技术手段.原位杂交技术与基因组、细胞生物学等技...     

单分子实时测序及其在微生物表观遗传学中的应用

表观遗传学对于微生物的生命进程起着重要作用。由限制-修饰系统调控的DNA修饰参与微生物的免疫防御系统,无限制-修饰系统调控的DNA修饰通过调控基因表达影响表型。然而,表观遗传信息还没有被常规地作为DNA信息收集分析。基于对DNA合成反应的动力学分析,单分子实时测序技术可以在获得基本序列数据的同时实现对被修饰核苷酸的检测。这个技术为微生物中已知DNA修饰的研究提供了新的平台,也为新型DNA修饰的发现做好准备。本文综述了单分子实时测序技术及其在微生物表观遗传学中的应用。     

脆性X智力低下基因:分子遗传学和生物化学研究

脆性Ｘ综合征是最常见的遗传性智力低下疾病。该病是由于脆性Ｘ智力低下基因（ＦＭＲ１）功能丧失所致。ＦＭＲ１基因位于Ｘ染色体长臂末端,由１７个外显子组成,覆盖约３８ｋｂ,转录方向从着丝粒到端粒（ＧｅｎＢａｎｋＬ２９０７４）。分子遗传学研究和突变分析显示,...     

医学分子遗传学讲座 第五讲限制性片段长度多态性

每个个休在溃传上是不同的,而不同的本质不是 在基因产物＿匕而是在DNA水平上的差异。这些差异 大多数都是由于不编码蛋白质的区域和没有重要调节 功能的区域发生了中立突变,这些中立突变所构成的 DNA变异称为DNA多态性。DNA多态性本质是 由于进化过程中的各种原因引起染色体DNA中核营 酸排列顺序发生了改变,当这种改变涉及到限制性内 切酶识别位点时,利用限制性内切酶可将DNA切割 成不同长度的限制性片段。这类不同长度的限制性片 段类型在人群中所呈现的多态频率分布现象,就称为 限制制性片段长度多态性（RFLP)o RFLP具有广泛 的用途,它可以作为一种“遗传路标”,对人类基因组制 图提供必要的标记,当多态性顺序与人类遗传性疾病 位点连锁时,可作为遗传缺陷的产前诊断或是鉴别携 带者的标记,还可以应用于亲子鉴定和群体研究等方 面。     

新酵母遗传学

基因克隆和酵母菌DNA转化技术已大大地加强了形式酵母遗传学的力量。现在已可能分离任何形式遗传学确定的基因,用离体产生的突变衍生物取代正常的染色体序列而任意改变酵母基因组,创造表现为自主复制子或小染色体的DNA分子。新酵母遗传学的这些独特的特征已用于研究真核分子生物学中的许多问题。     

硫杆菌的分子遗传学研究

硫杆菌（丁litKucjllSS）是一类革兰氏阴性的化能无机营养细菌,也是分布最广,研究得最多,经济意义很大的硫氧化细菌。该属中的氧化硫硫杆菌（T．th。whns）和氧化亚铁流杆菌（T．fer－rtx）xlua叫是极端嗜酸性的专性自养细菌,最适因为2,0～3．5,广泛分布于流化矿床的酸性废水中。这类细菌很早就被广泛应用于贵重金属的浸出和回收,特别适合于从低品位的矿石中浸出稀有资重金属,主要是通过氧化FeSO和Fe＆产生Fe”氧化剂,氧化金属硫化物使之变成可溶性的硫酸盐形式,从而回收有用金属。这种方法具有低成本,低能耗,无污染等特点…     

蜂猴属（Nycticebus）D-loop控制区和Cyt b基因遗传学研究

测定了蜂猴属线粒体DNA中的D-loop控制区部分序列和细胞色素b基因全序列（1140 bp）,对其变异情况进行了分析,并采用Mega 4.0软件中构建了分子系统树。无论是基于D-loop控制区部分序列构建的系统树,还是基于细胞色素b基因序列构建的分子系统树的拓扑结构图,都清晰地表明蜂猴属由两个分支组成,分支置信度较高,一支由N．pygmaeus聚成,另一支由N．coucang聚成,即支持蜂猴属由N．coucang和N．pygmaeus两物种组成。     

小麦背景中来自华山新麦草的抗条锈病基因的遗传学分析和分子标记

H9020—17—5是一个通过杂交和回交选育的普通小麦—华山新麦草易位系,接种鉴定表明其对条锈病具有优良抗性。遗传学分析证明易位系H9020—17—5的抗条锈性是由单基因控制的显性性状,抗性基因来自于华山新麦草,暂定名为YrHua。为了标记这个来自华山新麦草的抗条锈病基因,利用H9020—17—5与感病小麦品种铭贤169杂交,建立了F2分离群体。应用81对AFLP引物对119个经条锈菌生理小种CY30接种鉴定的F2单株进行了分析,结果得到两个与YrHua基因连锁的AFLP标记PM14(301)和PM42(249),遗传距离分别为5．4cM和2．7cM,并分别位于目标基因的两侧。将标记片段克隆、测序后,根据序列信息和酶切位点多态性设计特异性引物,将AFLP标记PM14(301)转换成了简单的PCR标记。研究结果为标记辅助育种提供了分子选择工具,同时也为进一步精细定位和图位克隆YrHua基因奠定了基础。     

牙鲆钙调素基因在原核和真核细胞中的表达

设计特异引物,以SMART cDNA为模板,应用PCR方法扩增牙鲆钙调素基因（Paralichthys olivocew calmodulin,PoCaM）。计算机辅助分析表明,PoCaM基因编码149个氨基酸的推定蛋白,其分子量为17kD,等电点为3．93,含有4个螺旋-环-螺旋样结构,与其它鱼类CaM氨基酸一致性为97．3％-100％。构建原核表达重组质粒pET32a／PoCaM,转化大肠杆菌B121（DE3）,用IPTG进行诱导表达,经SDS—PAGE蛋白电泳,结果显示PoCaM在大肠杆菌中进行了特异性融合表达,融合蛋白分子量约为34kD,与预期分子量大小一致。同时,以绿色荧光蛋白（GFP）为表达标签,构建真核表达重组质粒pEGFP—N3／PoCaM,经Lipofectamine 2000介导转染鲤鱼上皮瘤细胞（ Epithelioma papulosum cyprinid, EPC）,荧光显微镜观察显示,PoCaM在EPC细胞中进行瞬时表达,主要分布于细胞核及胞浆中[动物学报54（6）：1061—1067,2008]。     

滑膜肉瘤动物模型的分子细胞遗传学研究

用1例日本滑膜肉瘤（SS）患者的瘤组织标本接种裸鼠,获得了肿瘤生长。亲本肿瘤与裸鼠肿瘤在病理组织形态上存在一定差异,但两者的免疫组织化学特征相同。染色体分析表明,SS细胞株存在染色体数目和结构异常,患者外周血淋巴细胞染色体核型为正常女性,46,XX。 ＳＳ细胞株巴氏小体检出率低于对照,其正常X染色体比易位X染色体晚复制17小时。DNA印迹实验表明,SS DNA存在D2S3座位等位片段丢失,D1S57,D17S5和D13S30座位基因的部分缺失,但无DXS7,DXS14,和D2S44座位基因改变。     

电镜技术在核酸分子杂交研究中的应用

电子显微镜是目前唯一能直接看到DNA或RNA分子的工具,而电泳、同位素标记等技术只能间接地测定这些分子,电镜就是以它这种得天独厚的优点在核酸分子研究中崭露头角。基因的准确定位,核酸复制模型的完善,真核基因DNA倒转重复序列“十字架”结构的观 察及内含子的二发现等等,近四十年来,核酸分子杂交技术取得如此可喜的成绩,电镜所作的贡献是不能低估的。     

哮喘的分子遗传学研究进展

哮喘病和易感症的遣传学病因是复杂的,现可通过候选基因和易感位点筛选技术来进行研究。本文综述了哮喘易感基因的研究进展,同时讨论了哮喘遗传学研究对哮喘临床的应用前景。 Abstract:The genetics of asthma and atopy is complex,but can be approached by studies of both candidate genes and mapping of susceptibility loci.The progress in susceptibility genes for asthma and atopy is reviewed.New therapeutic approaches to asthma which are based on the study on asthma genetics for future are summarized.     

分子标记技术及其在保护遗传学中的应用

介绍了各种分子标记技术的原理和它们在保护遗传学领域中的应用,并对各种标记的优缺点进行了比较。指出在目前研究中,采用多种标记相结合的方法才能得到更为客观、合理的结果。