伊枯草菌素A发酵过程中游离氨基酸的HPLC分析

建立一种快速、高效测定游离氨基酸含量的异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生高效液相色谱法,并利用此方法分析检测iturin A发酵过程中游离氨基酸的动态变化。以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,采用Venusil-AA(4.6 mm×250 mm,5μm)氨基酸分析专用柱,并优化HPLC检测色谱条件。结果表明:梯度洗脱程序、流动相pH值、色谱柱温对分析时间、色谱峰分离及峰型具有重要影响。当最优色谱条件为:流动相A为0.1 mol/L无水乙酸钠缓冲溶液(pH6.4±0.1)-乙腈(66∶5),流动相B为乙腈-水(4∶1),流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,色谱柱温40℃,梯度程序洗脱,35 min内可完全分离16种氨基酸,且各氨基酸在一定浓度范围内线性关系良好(R2均大于0.9986),加标回收率在83.84%-108.02%之间,RSD值均小于2.77%。该方法耗时短、操作简便、准确可靠,具有良好的精密度和稳定性。通过此方法研究分析伊枯草菌素A发酵过程中各游离氨基酸含量变化规律,发现其氨基酸浓度变化规律大致分为三类。     

木豆不同品种和叶龄对叶片氨基酸形成的影响和聚类分析

为了解木豆(Cajanus cajan)叶片的氨基酸含量的变化,对19份种质资源和1～3叶龄的木豆叶片氨基酸含量进行研究。结果表明,不同种质资源和叶龄的木豆叶片中均含有17种氨基酸,必需氨基酸以苏氨酸、异亮氨酸和赖氨酸的含量最高,分别为0.67%、0.70%和0.48%,非必需氨基酸以丝氨酸、酪氨酸和组氨酸的含量最高,分别为0.69%、0.66%和0.44%。除赖氨酸和丙氨酸外,其余15种氨基酸含量在木豆叶片中总体上随着叶龄的增加呈现上升趋势。不同种质资源的木豆叶片中总氨基酸含量差异明显。聚类分析可将19个木豆种质资源划分为低氨基酸型(I)、中氨基酸型(II)、中高氨基酸型(III)、高氨基酸型(IV)等4大类型。这为高品质木豆叶茶的加工与高氨基酸木豆品种选育提供了理论依据。     

化工上的应用

<正>反相高压液相色谱梯度洗脱理论基础的发展,有助于最佳分离条件的选择。采用乙内酞苯硫脲氨基酸(PTH一氨基酸)做模拟系统,选择好梯度洗脱条件,在20分钟内,可以测定19种普通的PTH一氨基酸。虽然,要求平均溶剂强度和理论     

反相高效液相色谱法测定血浆游离氨基酸

本文报告了采用高效液相色谱法反相梯度洗脱,邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生化,荧光检测分血浆游离氨基酸。实验采用线性洗脱,在50分钟内可同时测定18种氨基酸,血浆样品的预处理简单,衍生化反应的时间仅需1分30秒,血浆样品的实际进样量少于1μl。本测定方法的精确度高,各个氨基酸保留时间的变异系数平均为0.89%±0.45%(SD),峰面积的变异系数平均为2.06%±1.76%(SD),各个氨基酸的浓度在15—150μmol/L的范围中,线性关系的相关系数平均为0.985±0.0305(SD)。准确性好,各个氨基酸的回收率平均为97.6%±5.1%(SD)。实验还讨论了氨基酸分离时溶液pH值、柱温、离心速度等因素对分析结果的影响。     

离子交换法从生产胱氨酸废液中分离提取三种碱性氨基酸

本研究利用国产７３２阳离子交换树脂,从生产胱氨酸废液中提取了三种碱性氨基酸。通过实验确定了洗脱分离三种氨基酸：组氨酸、赖氨酸、精氨酸的较适宜工艺条件,并根据平衡原理和色谱理论探讨了洗脱剂阴离子和ｐＨ值对洗脱分离的影响规律。有如下关系：设单位体积中离子交换树脂吸附总量为Ｑ,则：注＊：Ｋ＝ｐ／ｑｐ、ｑ分别为氨基酸在固定相（树脂）和流动相）（洗脱剂）中所占分数。注：ｎ（ｍａｘ）＝ｒ／ｑ：指洗脱出氨基酸最大浓度时洗脱剂用量。其中γ表示理论塔板数。由（４）式可看出,Ｅ值增大时ｎ（ｍａｘ）减小,即洗脱剂用量减少,由（３）式可知,ｐＨ值直接影响Ｅ值大小,不同ｐＨ条件下对Ｅ的影响如图１。由图１可知,Ｅ值随ｐＨ变化存在一个突跃阶段。恰当地调节ｐＨ值,可大幅度提高洗脱剂的洗脱能力,从而降低洗脱剂用量,降低成本;同时使洗脱后氨基酸与洗脱剂的分离更容易;另外不同的氨基酸由Ｅ值表现出的突跃阶段所对应的ｐＨ范围是不同的,因此可以利用洗脱剂ｐＨ值的改变选择性地洗脱某种特定的氨基酸,使性质类似的三种碱性氨基酸得以分离,由图２表示的实验结果证实了这一点。１．２．洗脱剂中阴离子对阳离子交换树脂洗脱的影响。当洗脱剂阴离子为弱酸根离子（以Ｓ－表示?     

高效液相荧光法测定大鼠脑内氨基酸类神经递质方法的改良

目的 改良测定大鼠脑组织氨基酸类神经递质的反相高效液相色谱荧光法.方法 改良使用磷酸盐-甲醇-乙腈作为流动相,反相高效液相色谱洗脱,高丝氨酸作为内标,邻苯二甲醛柱前衍生和荧光检测器,检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体、中脑、小脑和下丘脑6个脑区中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(G1n)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)和牛磺酸(Tau)6种氨基酸类神经递质含量.结果 6种氨基酸在20 min内洗脱完全,分离效果良好;在6.25～ 400 μmol/L浓度范围有较好的线性关系,其相关系数不低于0.99;6种氨基酸日内试验精密度范围为1.38％ ～7.59％;日间试验精密度为2.7％～8.68％;6种氨基酸回收率不低于80％.结论 改良后的反相高效液相色谱荧光法灵敏度较高、重复性好,能有效分离检测大鼠脑组织分区中氨基酸类神经递质含量.     

树脂交换基的型式和上柱液的pH 对精氨酸生产的影响

<正> 树脂交换基的型式和上柱液的 pH 对氨基酸的分离有着十分重要的影响,根据资料报道,强酸性阳离子交换树脂的交换基为游离酸型如 H~+是其交换基时,全部氨基酸均可以进行交换吸附;交换基为盐型如 Na~+、NH_4~+是其交换基时,且上柱液的 pH 又在中性或微碱性时,只有碱性氨基酸可以进行交换吸附。但是,对于猪毛酸水解,提取胱氨酸后 pH4.8母液中精氨酸的生产,树脂交换基采用何种型式阳上柱液的 pH 以多少为最合适呢?为此,我们将732树脂处理成 H~+、Na~+、NH_4~+三种型式和调上柱液的 pH4.8、6.5,进行了精氨酸纯度和产量测定,我们又用稀氨水洗脱,绘制了精氨酸洗脱曲线。     

复合氨基酸注射液中氨基酸对山梨醇测定的影响与解决方法

复合氨基酸注射液如１１Ｓ、１４Ｓ中的氨基酸可使山梨醇的测定结果偏高６％,解决方法是将注射液通过磺酸型阳离子交换树脂柱,氨基酸成分在柱上被交换,山梨醇用水洗脱后测定。本方法对制订复合氨基酸类注射液的质量标准与确保产品质量均具有实际应用价值。     

LC-MS/MS 检测癫痫患者神经递质类氨基酸

目的:建立液相色谱串联质谱同位素内标法检测神经递质类氨基酸并用于癫痫患者临床评价.方法:选用AAA-C18柱色谱柱,以乙腈水(含有0.01%七氟丁酸、0.1%甲酸)为流动相,采用梯度洗脱进行分离,血浆样品用iTRAQ-115衍生化试剂处理后,加入iTRAQ-114衍生化的氨基酸内标并进样,选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测.疾病组与健康组的统计采用t检验和主成份分析.结果:疾病组和健康组氨基酸测定结果显示:Trp、GABA两组间没有显著性差异(P＞0.05),Arg、Glv、Ser、Tau、Asp、Glu、EtN、两组间有显著性差异(P＜0.05),通过PCA分析显示,疾病组与健康组之间差异明显,Asp、Glu、Ser等是引起差异的主要氨基酸.结论:试验方法灵敏、专属性强,并初步的用于癫痫患者体内氨基酸评价.     

人参糖肽PG-g的分离纯化与结构分析

本研究以人参根水提物为原料,通过超滤得超滤液,超滤液浓缩后进行活性炭柱分离纯化,分别以水、5%、30%、60%和95%乙醇洗脱。理化性质测定结果显示30%乙醇洗脱组份(PGO)含糖量最高,同时含有蛋白质。PGO通过Sephadex G-15及DEAE-Sephadex A-50纯化得到糖肽PG-g,其由Ara、GlcA和GalA组成。甲基化分析结果表明PG-g以GlcA与GalA为非还原末端,以(1→3)-连接的GalA和(1→6)-连接的GlcA为主链,分别在GlcA的C3位与GalA的C6位存在分支点,同时还存在(1→2,4)-连接的Ara。糖与肽之间通过Ara-Hyp糖苷键连接在一起。PG-g含有14种氨基酸,以Cys和Tyr含量最高。     

两种柱前衍生反相高效液相色谱法测定血液和尿液中游离氨基酸

建立以PITC法和AQC法为柱前衍生试剂测定血液和尿液中游离氨基酸含量的测定方法。采用Waters-e2695操作系统,色谱柱为Shim-vp,ODS(250mm×4.6mm,5μm)(日本,岛津公司),以甲醇/乙腈/水和醋酸钠溶液(pH 6.5)为流动相,梯度洗脱。分别采用紫外和荧光检测器对血液和尿液中游离氨基酸进行含量测定。结果显示,两种衍生化方法灵敏度好、分离度高,具有良好的线性范围(r>0.990 0),准确度高(平均回收率为75.1%～127.0%),进样精密度好(RSD为0.12%～3.42%)。PITC法在尿液中游离氨基酸含量测定中显示了良好的测试准确性;而AQC法测定尿液中组氨酸、苏氨酸、脯氨酸超出线性范围,需要对尿样的前处理进行深入研究。     

DNFB柱前衍生化RP-HPLC测定大黄种子氨基酸的含量

采用柱前衍生RP-HPLC法测定大黄种子中氨基酸的含量。6 mol/L盐酸水解得到氨基酸,以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为柱前衍生化试剂,梯度洗脱。色谱柱为Gemimi-NX C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A相为0.1 M乙酸钠水溶液,B相为乙腈-水(1∶1),柱温37℃,检测波长360 nm。结果表明,三种正品大黄种子中均含有17种氨基酸,总量在11.30%~19.26%。该方法灵敏、准确,有良好的重复性和稳定性。     

提高Beckman 121 MB型氨基酸分析仪的分辨率

在Stein和Moor等人研究的基础上发展起来的Beckman 121MB型氨基酸分析仪,以聚苯乙烯磺酸树脂作为阳离子交换剂。单柱洗脱系统由pH3.28、pH3.90和pH 4.95的柠檬酸钠缓冲液组成。该仪器与日本、瑞典等国的同类仪器相比最大的缺点是无滤氨柱。因此对试剂、环境的要求很高,以消除氨对分析的污染。但在实际工作中,蒸馏水,缓冲液、试剂及实验室环境都可能带入氨,从而导致氨基酸分析,特别在碱     

天然牛磺酸的离子色谱分析方法研究

通过考察实验的稳定性、精确度及回收率等,研究不同氨基酸对牛磺酸检测的干扰,成功建立了离子色谱法分离牛磺酸梯度洗脱程序,探索出一种更高效、更快速、更灵敏的离子色谱检测方法。色谱柱为氨基酸分析柱(Amino Pac PA-10,2 mm×250 mm)、氨基酸保护柱(Amino Pac PA-10 2 mm×50 mm);流动相组成为流动相A(纯水)、流动相B(250 mmol/L Na OH溶液),流动相C(1.0 mmol/L乙酸钠(Na OAc)),进行梯度洗脱;流速为0.24m L/min;柱温为30℃;采用积分脉冲安培检测器检测;进样量为25μL。该法优化了牛磺酸的检测时间,提高了牛磺酸的检测效率,可运用于实验和生产中。     

高效液相色谱测定蕨类植物中氨基酸含量

以5种蕨类植物(大羽贯众、美丽复叶耳蕨、黄山鳞毛蕨、狗脊蕨和紫萁)根状茎为研究材料,利用邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法分析了材料中的氨基酸成分.鉴于材料中蛋白质含量较低,测定方法中增加了样品的使用量并采用了梯度洗脱程序.结果表明,测试的5种蕨类植物所含总氨基酸含量较低,很少有超过5%,尤其在狗脊蕨中只有1.74%.在...     

HPLC法分析乳清蛋白对糖尿病模型小鼠血浆氨基酸组分的影响

为寻求有效的氨基酸分离方法并探讨乳清蛋白对2型糖尿病防治的作用机制,采用HPLC法分析乳清蛋白中氨基酸组分及含量;分别以0％、10％、20％和40％的乳清蛋白(WP)灌胃1型、2型糖尿病模型组、正常组小鼠,4周后观察各组血浆氨基酸的变化.乳清蛋白中亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸分别占氨基酸总量的14.40％、5.93％和5....     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定马尾松(Pinus massoniana )针叶中γ-氨基丁酸和17种游离氨基酸

建立了自动在线柱前衍生反相高效液相色谱法同时测定γ-氨基丁酸(GABA)和17种游离氨基酸含量的方法.以邻苯二甲醛-9-芴基甲基氯甲酸酯(OPA-FMOC)为衍生试剂进行衍生,Agilent Hypersil AA-ODS-C18色谱柱分离,梯度洗脱,二极管阵列检测器检测,在19min内分离测定了马尾松苗木针叶中GABA 和17种游离氨基酸的含量.该方法测定氨基酸的回收率高于90.1%,精密度和重现性均较好(相对标准偏差为0.21%～2.81%),经测定,发现马尾松被马尾松毛虫取食后,所测18种氨基酸总量明显降低,从418.3μg · g-1降低到310.4μg · g-1鲜重.     

海洋颗粒物/沉积物中的氨基酸及其对有机质降解的指示作用

氨基酸是海洋有机质尤其是有机氮的重要组分,其地球化学行为活跃,在海洋有机质生物地球化学循环过程中起着重要作用.氨基酸的含量、组成和分布等信息可有效指示有机质的降解状态.本研究系统总结了海洋颗粒物/沉积物中氨基酸的分布特征及影响因素,以及氨基酸对有机质降解程度的指示作用.海洋颗粒物/沉积物氨基酸的主要成分为甘氨酸(Gly)、谷氨酸(Glu)、丙氨酸(Ala)和天冬氨酸(Asp),其含量从近岸到大洋逐渐降低,并随深度增加呈下降趋势组.氨基酸的碳、氮归一化产率()越低,表明有机质%AA-C/TOC,%AA-N/TN)以及基于氨基酸成的降解因子(DI的降解程度越高.基于非蛋白质氨基酸以及)D型氨基酸含量与组成的活性因子(RI)和D型氨基酸与L型氨基酸比值(D/L等指标可以根据细菌对氨基酸的转化作用来指示有机质的降解程度,其中RI值越接近于0,D/L值越高,蛋白质与非蛋白质氨基酸的比值的高Asp/β-Ala和Glu/γ-Aba(氨基丁酸)越小,均表明有机质受到微生物降解和转化程度越.颗粒物/沉积物中氨基酸的迁移转化过程主要受到溶解氧、营养盐水平、有机质来源、沉积环境以及微生物转化等因素的影响.今后应加强颗粒物和沉积物之间的协同效应以及微生物对氨基酸的影响与具体调控机理研究.     

HPLC-ELSD法测定发酵液中L-精氨酸含量

建立了一种快速、准确的高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定发酵液中L-精氨酸含量。采用Prevail C18色谱柱(C18 5μm,250×4.6 mm,Alltech),以5 mmol.L-1七氟丁酸(三氟乙酸调pH至1.0)和乙腈为流动相,采用梯度洗脱,总流速为1.0 mL/min。ELSD参数:漂移管温度为117.0℃,载气流速为3.2 L/min。L-精氨酸等氨基酸的回收率为96%~104%。能够快速、精确测定发酵样品中目的产物L-精氨酸与其它氨基酸含量。     

反相高效液相色谱用于几种氨基酸的定量分析

采用高效液相色谱法等浓度的洗脱天门冬氨酸、谷氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺,分析氮代谢中几个主要氨基酸。由邻苯二甲醛(OPT)和β-巯基乙醇柱前衍生反应,在14分钟内可同时测定四种氨基酸。测试样品经预处理。生成荧光性的衍生物1-硫代烃基-2-烃基异吲哚。反应是瞬时的,其荧光量子