扁桃愈伤组织诱导及分化的研究

以扁桃优良品种'Naporeil'的茎段、叶片和花药作为外殖体,分别对其进行愈伤组织诱导和分化研究,以筛选愈伤组织的最佳诱导增殖培养基、分化培养基和生根培养基.结果表明,该品种以茎段、花药作为外殖体最易诱导获得愈伤组织,叶片不适宜作为外殖体诱导愈伤组织;愈伤组织的最佳诱导增殖培养基均为B5+0.5 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,愈伤组织诱导率为100%,增殖倍数最高可达7倍;茎段愈伤组织的分化培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.8 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ZT,分化率为71%;花药愈伤组织未见分化.由茎段愈伤组织再分化获得的不定芽在1/2MS+0.5 mg/L IBA培养基上诱导生根,并给以黑暗预处理可使生根率达80%以上.     

资源植物罗布麻的愈伤组织诱导和植株再生研究

以罗布麻（Apocynum venetum L.）无菌苗的叶、茎和根作为外植体,在不同激素与浓度组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导和植株再生研究。结果表明,在多个激素浓度配比的培养基中,罗布麻叶和茎的愈伤组织诱导率均可达到100%;但进一步将愈伤组织转接到含有不同激素组合的培养基进行不定芽分化时,叶和茎来源的愈伤组织的不定芽分化率有很大不同,茎来源的愈伤组织虽可在多个培养基中有不定芽分化,但最高诱导率仅达20%;而叶片来源的愈伤组织虽仅有4个激素组合培养基中有不定芽的分化,但最高分化率可达到35%。因此,构建罗布麻再生体系的最佳外植体应选择叶片。愈伤组织诱导与不定芽分化的最佳培养基均为：MS＋NAA0.1 mg/L＋6-BA 1.0 mg/L;不定芽在1/2MS＋NAA 0.2 mg/L生根培养基的生根效果最佳,不仅根群质量好,且生根率也高达100%;此再生苗的移栽成活率也最高,在适宜条件下可达75%。     

罗汉果叶片离体再生快繁技术

以罗汉果(Ssiraiti grosvenori)叶片为外植体,探讨培养方式、激素组合对愈伤组织诱导和不定芽分化的影响。结果表明:罗汉果叶片在培养基MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.7 mg/L上培养4周愈伤组织的诱导率达90%以上;罗汉果愈伤组织在培养基MS+BA 1.0 mg/L+IBA0.2 mg/L+赛苯隆(TDZ)0.1 mg/L上不定芽的分化率可达70%,平均出芽指数3.7;罗汉果试管苗在培养基MS+BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L上茎芽增殖比较稳定,在培养基MS+IBA0.1 mg/L上培养2周开始分化不定根,其生根率在90%以上。     

濒危物种绒毛皂荚组织培养快繁技术的初步研究

以绒毛皂荚(Gleditsia vestita Chun et How ex B.G.Li)种子为外植体,通过愈伤组织诱导、不定芽分化增殖、生根和驯化移栽,建立了绒毛皂荚组织培养的快速繁殖体系。结果表明:1)绒毛皂荚子叶和胚轴在MS+6-BA3.0 mg/L+KT 0.4 mg/L+IAA 0.3 mg/L培养基上同步诱导出愈伤和芽,愈伤组织诱导率达到90.5%,同步分化率高达77.9%;2)不定芽增殖的最佳培养基为1/2MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+NAA 0.2 mg/L,培养20 d后,增殖倍数为4.0;3)MS+NAA 0.5 mg/L+IAA 0.25 mg/L条件下,生根率高达100%,且移栽后植株长势好,成活率达90%以上。     

玉竹的组织培养与快速繁殖

以玉竹[Polygonatum odoratum (Mill.) Druce]根状茎、叶片和茎段为外植体,于附加不同激素配比的MS培养基中诱导愈伤组织、不定芽和不定根,探讨增殖培养和植株再生的条件.结果表明,叶片和茎段外植体诱导愈伤组织和芽的分化率很低;而根状茎外植体易于培养,有较高的诱导率和增殖倍数,其愈伤组织、不定芽和不定根的诱导率分别可达87%、90%和99%以上.适宜根状茎外植体愈伤组织诱导的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,有利于增殖和丛生芽分化的培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA和MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,而1/2MS+3.0～5.0 mg/L NAA适宜诱导试管苗生根培养.试管苗的移栽成活率可达85%以上.     

鼎湖山紫背天葵组织培养及植株再生

选用紫背天葵无菌苗叶片为外植体,建立了离体培养体系,并探讨其愈伤组织生长和不定芽诱导的适宜培养条件。通过研究得出:愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+2,4-D 1.00 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+LH 200 mg/L+CH200 mg/L+YE 200 mg/L,愈伤组织诱导率为96.88%。不定芽诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+LH 200 mg/L+CH 200 mg/L+YE 200 mg/L,不定芽诱导率为77.3%。不定芽转至1/2MS培养基中均可100%生根并长成完整植株,小苗移栽成活率达到90%。     

梨蒴珠藓愈伤组织诱导和配子体再生研究

以梨蒴珠藓无菌藓株为外植体诱导愈伤组织和配子体再生,接种于含不同激素组合的MS和Knop固体培养基上,分别进行愈伤组织和不定芽的分化,并探讨愈伤组织诱导和配子体再生的适宜培养条件.结果显示,愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L 2,4-D,愈伤组织诱导率为33.3%;不定芽诱导的最佳...     

‘光叶蔷薇’器官间接再生体系的建立及GUS基因转化的初步研究

以‘光叶蔷薇’（Rosa wichuriana ‘Basye’s thornless’）无菌苗的顶生幼嫩小叶为外植体,探讨了其愈伤组织诱导及植株再生的方法。结果表明,高浓度的生长素NAA能诱导外植体产生愈伤组织;由NAA诱导的愈伤组织在附加TDZ的MS培养基上,先暗培养再进行光照培养可直接分化出不定芽。诱导愈伤组织的最佳NAA浓度是7.0 mg/L、暗培养时间为10 d,而最佳分化培养基是MS + 5.0 mg/L TDZ + 30 g/L葡萄糖 + 2.5 g/L GEL,分化率达18.34%。以诱导产生的愈伤组织为侵染受体,初步建立了‘光叶蔷薇’GUS基因转化体系。农杆菌菌液浓度OD₆₀₀值为0.5、侵染30 min、共培养2 d、乙酰丁香酮的浓度为50 μmol/L是'光叶蔷薇’愈伤组织转基因的最优条件。     

樱桃砧木Colt离体叶片再生

以樱桃砧木Colt试管苗的叶片为外植体 ,通过先诱导愈伤组织分化不定芽以及叶片直接分化不定芽两种途径诱导再生。结果表明 :在MS附加NAA 1 0mg/L、KT3 0mg/L、ZT0 2 5mg/L培养基中 ,愈伤诱导率可达 1 0 0 % ;诱导的愈伤在MS附加NAA 0 2mg/L、IAA0 5mg/L、6 BA 0 5mg/L、KT 1 0mg/L、GA 0 5mg/L培养基中 ,不定芽分化率为 2 1 3% ;在MS附加 6 BA 6 0mg/L、NAA 1 0mg/L、GA 0 5mg/L中 ,叶片 -叶柄不定芽诱导率可达 48 3%。     

韭菜胚根高效植株再生体系的建立

为了建立韭菜高频植株再生体系,以韭菜胚根的不同部位为外植体,研究了不同部位愈伤组织和芽的诱导。结果表明,胚根尖为诱导愈伤组织的最佳外植体,愈伤诱导率达到81.4%,出芽率达到73.3%;比较在不同激素配方上的愈伤组织诱导和芽的分化,在MS+1 mg/L BA+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L KT培养基中再生率最高,诱愈率达到80%以上,不定芽分化率达78.8%,繁殖系数为24.7;在MS+1 mg/L GA+0.5 mg/L KT不定芽伸长培养基中,30 d不定芽伸长为独立植株,比例为85.5%;独立的韭菜苗在1/2MS+0.3 mg/L IAA中生根率及根系状况最佳。通过该方法 130 d左右即可从胚根脱分化再生出植株。     

徐长卿子叶组织培养及再生体系的建立

以徐长卿子叶为材料,进行愈伤组织诱导、愈伤组织和不定芽分化、试管苗生根、移栽及移植等研究。结果表明,MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 0.4 mg/L是子叶愈伤组织诱导和继代培养的理想培养基;MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.2 mg/L是愈伤组织分化培养的理想培养基;MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.2 mg/L是不定芽分化继代培养的理想培养基;炉灰渣是试管苗移栽的理想基质,移栽成活率可达97%。试管苗移植后长势旺盛,根系发达,当年开花。根据本试验结果可建立徐长卿子叶诱导再生体系。     

葶苈愈伤组织诱导及分化研究

为保护野生资源、实现人工栽培,本研究以葶苈(Draba nemorosa)嫩茎为材料,采用组织培养方法进行愈伤组织诱导与分化、不定芽生根与试管苗生根继代增殖培养,以及移栽和定植研究。结果表明,MS+6-BA 0.4 mg/L+2,4-D 2.5 mg/L是愈伤组织诱导培养和继代增殖培养的理想培养基;MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L 是愈伤组织分化培养和不定芽继代增殖培养的理想培养基;1/3MS+IAA 0.6 mg/L是不定芽生根培养和生根继代增殖培养的理想培养基;试管苗移栽成活率为86.8%,定植成活率为96.4%;定植苗保持了野生葶苈的植物学性状。     

万寿菊杂交亲本的离体培养

以万寿菊‘钻石’雄性不育株的幼嫩叶片和子房为外植体进行离体快繁,结果表明:培养基MS+0.8 mg·L-1 IAA+0.6 mg·L-1 6-BA+30 g·L-1蔗糖既有利于叶片愈伤组织的诱导也有利于不定芽的分化,愈伤组织诱导率达97.9％,不定芽诱导率达45.8％;培养基MS+0.5 mg·L12,4-D+0.5 mg·L-16-BA+ 30 g·L-1蔗糖为诱导子房愈伤组织的最佳培养基,出愈率为77.8％;培养基MS+0.05 mg·L -1 NAA+0.5 mg·L-1 6-BA+ 30g·L-1蔗糖为诱导子房愈伤组织不定芽分化的最佳培养基;将不定芽接至MS培养基上,7d后即可生出不定根,生根率可达98％,移栽成活率达90％以上.     

‘光叶蔷薇’器官间接再生体系的建立及GUS基因转化的初步研究

以‘光叶蔷薇’(Rosa wichuriana‘Basye's thornless’)无菌苗的顶生幼嫩小叶为外植体,探讨了其愈伤组织诱导及植株再生的方法。结果表明,高浓度的生长素NAA能诱导外植体产生愈伤组织;由NAA诱导的愈伤组织在附加TDZ的MS培养基上,先暗培养再进行光照培养可直接分化出不定芽。诱导愈伤组织的最佳NAA浓度是7.0 mg/L、暗培养时间为10 d,而最佳分化培养基是MS+5.0 mg/L TDZ+30 g/L葡萄糖+2.5 g/L GEL,分化率达18.34%。以诱导产生的愈伤组织为侵染受体,初步建立了‘光叶蔷薇’GUS基因转化体系。农杆菌菌液浓度OD600值为0.5、侵染30 min、共培养2 d、乙酰丁香酮的浓度为50μmol/L是‘光叶蔷薇’愈伤组织转基因的最优条件。     

香石竹毛状根诱导、离体培养及其植株再生

为了探讨利用发根农杆菌遗传转化所产生的毛状根来创新香石竹种质的可能性,本文采用叶盘法,建立了发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes对香石竹Dianthus caryophyllus L.叶片外植体的遗传转化及其植株再生体系。结果表明,发根农杆菌ATCC15834感染香石竹幼嫩叶片外植体12 d后,从叶片外植体切口中脉处产生白色毛状根,21 d后约90%的叶片外植体产生毛状根。所获得的无菌毛状根能在无外源激素的MS固体和液体培养基中快速自主生长。PCR扩增和硅胶薄层层析结果显示发根农杆菌Ri质粒的rol B和rol C基因以及冠瘿碱合成酶基因已在香石竹毛状根基因组中整合并得到表达。将毛状根置于MS+6-BA 1.0-3.0 mg/L+NAA 0.1-0.2 mg/L中培养15 d后产生淡黄绿色的疏松愈伤组织。愈伤组织不定芽分化的最适培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.02 mg/L,培养6周后不定芽分化率为100%;平均每个愈伤组织产生30-40个不定芽;将不定芽转至1/2 MS或1/2 MS+0.5 mg/L NAA的培养基中10 d后产生不定根,发育成再生植株。再生植株移植于栽培基质中20 d后,成活率达95%以上。     

川芎高频再生体系的建立

为建立川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)高频再生体系,优化了诱导和分化培养基及培养条件。以叶柄为外植体,以MS为基本培养基,KT 2.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L的激素组合对不定芽分化最有利。在此基础上,针对外植体来源、培养条件和愈伤组织继代时间3个因素进行优化。结果表明:采用川芎无菌苗叶柄作为外植体,黑暗条件下诱导出愈伤组织,再在光照下继代培养15 d后转入分化培养基中对不定芽诱导最为有利,分化率为44.4%。分化后得到的不定芽在含NAA 0.5 mg/L和IBA 0.5 mg/L的 1/2MS培养基上生根率达90%,移栽存活率为95%。     

红金钻蔓绿绒高频再生体系的建立

以红金钻根茎、叶片、叶柄为外植体,通过直接诱导不定芽和间接(愈伤组织)诱导不定芽途径,建立组培快繁体系。本研究发现:根茎直接诱导不定芽最佳培养基:MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2 mg/L GA_3;通过愈伤组织间接诱导不定芽及其分化的最佳培养基:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA;不定芽增殖最佳培养基:MS+3.0 mg/L 6-BA+0.8 mg/L IBA;生根最佳培养基为:1/2MS+0.75 mg/L NAA。将植株种植于草炭和珍珠岩以3:1混合的基质中,成活率达98%。     

红叶石楠离体植株再生频率的影响因素研究

以红叶石楠带芽茎段及叶片为外植体,分析激素和培养条件等因子对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明,MS+0.10mg/L 2,4-D+0.50mg/L NAA+0.50mg/L 6-BA+0.50mg/L KT为最佳愈伤组织诱导培养基,暗培养的愈伤组织诱导率高于光培养,其愈伤组织诱导率可达100%(带芽茎段)和98%(叶片)。MS+0.50mg/L IBA+2.00mg/L 6-BA+2.00mg/L KT为最佳分化增殖培养基,分化率91%以上,增殖倍数6.8以上,均达到最高。1/2MS+0.50mg/L IBA+0.01mg/L NAA为最佳生根培养基,生根率92%,生根量4.4根/株,均达到最高。     

不同植物生长调节剂对铁皮石斛(Dendrobium candidum)再生的影响

本实验以铁皮石斛无菌苗茎段为外植体,通过添加不同浓度的植物生长调节剂,诱导铁皮石斛愈伤组织形成与分化,建立铁皮石斛组织培养再生体系。结果表明,外植体接种5 d后,在改良MS培养基上添加2 mg/L PBU和0.05 mg/L IAA,可达到100%的愈伤诱导率。将愈伤组织接种在MS培养基上,添加0.1 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA,不定芽诱导率为90.8%。适合铁皮石斛芽增殖培养基为:MS+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+100 mg/L Vc+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。PBU浓度为0.5 mg/L,NAA浓度为0.05 mg/L时,芽苗生长情况良好,最适合用于不定芽伸长。铁皮石斛最适生根的培养基为:MS+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+100 mg/L Vc+0.5 mg/L IBA,生根率可高达94.1%。本研究成功建立了铁皮石斛高效再生体系。     

商陆离体再生体系的构建

目的:建立商陆离体再生体系。方法:选取商陆的幼茎、茎节、叶片、叶柄和顶芽为外植体,以MS作为基本培养基,通过添加不同浓度配比的植物生长调节剂分别进行愈伤组织、丛生芽和生根诱导,筛选商陆离体再生体系方案。结果:顶芽和幼茎为外植体诱导的愈伤组织出愈时间早,愈伤组织质量高,以培养基MS+6-BA0.5 mg/L+2.4-D 0.5 mg/L的诱导率最高,达到100%;其中,只有以顶芽产生的愈伤组织才能分化出丛生芽,芽分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.25 mg/L,诱导率为98%;诱导生根的适宜培养基为1/2 MS+NAA 0.3 mg/L,诱导率达100%。结论:建立和完善了商陆离体再生体系方案,为商陆遗传转化体系的构建奠定了基础。