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1.
重组人白细胞介素—6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的构建及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
针对肿瘤坏死因子(TNF)在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上的白细胞介素-6(IL-6)受体明显增高的事实,根据TNF结构与功能研究的最新信息,利用PCR技术,对人TNFα基因进行了改造,并将共与IL-6成熟肽编码区cDNA通过人工接头进行融合,融合蛋白在大肠杆菌表达后,Westernblot分析表明,分子量约为37kD,活性检测结果证实,该融合蛋白兼具有TNF抗肿瘤活性和结合IL 相似文献
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Bcl——2基因表达对TNF及OA诱发的细胞编程死亡的不同效应 总被引:1,自引:0,他引:1
用TNF和OA(Okadaicacid)诱发人神经母细胞瘤SK细胞死亡,并证明细胞死亡为编程死亡(ProgrmmedCellDeath,简称PCD)。将编码Bcl-2全长蛋白的cDNA植入PJX41neo载体中,使其表达由HCMV病毒起动子控制。形成的顺义(pBcl-2-S)及反义(pBcl-2-AS)表达质粒经转染导入SK细胞中获得稳定转染子。Western印迹表明顺义转染子表达大量的26kdBcl-2蛋白,而反义转染子则不表达。增强表达的Bcl-2蛋白能抑制由TNF引发的PCD,但不影响OA引发的PCD,从而证明了Bcl-2基因产物抗细胞死亡效应的特异性。 相似文献
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用红藻氨酸(KainicAcid,KA)12mg/kg给SD大鼠颈部皮下注射,诱发动物出现癫痫发作,该癫痫发作于8小时内完全缓解。KA后1周再次给予KA(此次为阈下剂量5mg/kg),检测上述动物对癫痫刺激的敏感性。结果表明,与对照组比较,于4周前开始并连续灌服微生态调节剂实验组动物癫痫敏感性的形成受到明显抑制(P<0001),同时用免疫细胞化学方法观察大鼠脑内海马部位星形胶质细胞的神经胶质原纤维酸性蛋白(GlialFibrilaryacidicproteinGFAP)免疫反应活性的变化,发现KA后1~7天,实验组与对照组比较,海马部位神经胶质原纤维酸性蛋白免疫反应活性明显受到抑制。结果表明微生态调节剂的抗癫痫敏感性作用可能与抑制胶质细胞过度增生有关。 相似文献
4.
针对肿瘤坏死因子(TNF)在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上白细胞介素-6(IL-6)受体明显增高的事实,根据TNF结构与功能研究的最新信息,利用PCR技术,对人TNFα基因进行了改造,并将其与人IL-6成熟肽编码区cDNA通过人工接头进行融合。融合蛋白在大肠杆菌中表达后,Westernblot分析表明,分子量约为37kD;活性检测结果证实,该融合蛋白兼具有TNF抗肿瘤活性和结合IL-6受体的能力,在高表达IL-6受体的人骨髓瘤细胞上测得的细胞毒活性较同样位点突变的TNF高约3倍。 相似文献
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单核/巨噬细胞分泌TNF—α的调控及在老年时的改变 总被引:3,自引:0,他引:3
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核/巨噬细胞分泌的细胞因子。它不仅有杀伤肿瘤细胞的特性,还在炎症、休克和自身免疫等病理过程中起重要作用。刺激巨噬细胞分泌TNF-α的主要物质有内毒素、病毒、某些细胞因子和有丝分裂原以及神经肽等。而前列腺素E(PGE)、cAMP类似物和肾上腺素类等可抑制其分泌。很多文献报道TNF-α在老年时单核/巨噬细胞的分泌有改变。 相似文献
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细胞信号转导分子在TNF—α诱导c—jun基因表达中的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
前期研究表明p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通过磷酸化心肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor2,MEF2)转录因子家族成员调节c-Jun蛋白表达。c-jun的启动子区存在MEF2位点,MEF2转录因子家族成员以同源或异源二聚体形式与其结合。研究了p38和BMK1(big MAP kinase1)在TNF-α诱导c-jun基因表达中的调控作用。p38上调MEF2A的转 相似文献
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牙髓紫卟啉菌内毒素对炎症性细胞因子的介导作用 总被引:2,自引:0,他引:2
牙髓紫叶琳菌ATCC35406是近年来新发现的重要致病性专性厌氧菌,采用改良酚-氯仿-石油醚法提取牙髓紫卟啉菌ATCC35406内毒素脂多糖,通过Kramer测定法、软琼脂细胞培养法以及胸腺细胞增殖法测定脂多糖的细胞生物学活性。结果显示:纯化脂多糖可不同程度地诱导小鼠模型生成肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)和白介素-1(IL-1),并在一定范围内呈剂量依赖型,提示牙髓紫卟啉菌内毒素在动物模型和细胞模型中具有显著的细胞生物学和免疫学活性. 相似文献
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Rel/NF-κB与神经系统疾病 总被引:1,自引:0,他引:1
自从 1 986年真核细胞核转录因子Rel/NF κB被发现以来 ,对它的研究就一直方兴未艾。Rel/NF κB参与一系列病理和生理过程反应 ,如免疫反应、炎症反应等 ,在细胞的生长、分化、粘附、凋亡等过程中也具有十分重要的作用。1 .Rel/NF κB信号转导通路在静息状态时 ,Rel/NF κB与抑制蛋白IκB结合 ,抑制其核转位信号 ,使之以无活性形式存在于胞浆中 ;胞外刺激信号如活性氧介质 (ROI)、细胞因子、神经递质、病毒、UV、内质网超载等通过转导激活IKK上游激酶MEKK 1或NIK而使IKK复合物活化 ,在酪蛋白激… 相似文献
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老年大鼠单核/巨噬细胞分泌和表达肿瘤坏死因子增多 总被引:2,自引:0,他引:2
为研究老年时肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌及表达的改变,在内毒素(LPS)1.0μg/ml刺激大鼠单核/巨噬细胞后,用酶联免疫法(ELISA)测定培养液中TNF-α含量,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCK)测定TNF-αmRNA。同时测定培养液中一氧化氮(NO)和前列腺素I2(PGI2)的含量。结果显示:老年鼠TNF-α分泌量及其mR-NA明显高于青年鼠。NO产量在老年鼠与青年鼠之间无明显差异。老年鼠PGI2分泌明显低于青年鼠。由于PG能抑制TNF-α释放,从而推测,PGI2产生能力的降低可能是老年大鼠单核/巨噬细胞TNF-α分泌量明显高于青年鼠的原因之一。 相似文献
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蝎毒抗癫痫反复发作的GFAP基因调控机制 总被引:8,自引:0,他引:8
已有的资料证实红藻氨酸 (Kainicacid ,KA)癫痫模型具有癫痫发作敏感性长期增强的特征 ,伴有海马结构胶质原纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidprotein ,GFAP)的大量表达 ,其为海马结构反应性胶质化的神经病理学基础 ;用反义GFAPmRNA转染的星形胶质细胞的细胞株内不再表达GFAP。新近 ,我们从KA癫痫大鼠海马结构中发现调控GFAP基因表达的序列特异的DNA结合蛋白。我们从前的工作已证实蝎毒具有明显的抗癫痫反复发作的作用 ,抑制癫痫大鼠海马结构GFAP的过量表达 ,但蝎毒阻… 相似文献
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采用PCR方法引入编码氨基酸残基序列为GGGGSGGGGS的镜头,将sTNFR1 cDNA与人IgG:Fc cDNA片段连接,构成融合基因fusion 1。将fusion 1克隆在pBSⅡ SK^+载体上。测定序列后,转入pRSET-B表达载体,在大肠杆菌中表达,得到分子量为45kDa的蛋白,超声破碎后电泳证明表达的蛋白为包涵体,经免疫蛋白印迹证实为我们构建的融合蛋白。 相似文献
12.
肿瘤坏死因子的分离纯化 总被引:3,自引:0,他引:3
肿瘤坏死因子(Tumornecrosisfactorα)具有抗肿瘤、抗病毒和免疫调节等功能。自从1975年Carswel等人[1]发现该因子以来,TNF一直受到科学界的重视。TNF是一种含有157个氨基酸的非糖基化蛋白,相对分子质量大约为1735... 相似文献
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地塞米松、噻庚啶和山莨菪碱对LPS诱导大鼠肝脏TNFα表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
地塞米松(Dex)、噻庚啶(Cyp) 和山莨菪碱(Ani) 对脂多糖(LPS) 诱导的大鼠肝脏TNFα表达的影响。Wistar大鼠40 只, 静脉注射LPS(EcoliO111B4 5m g/kg) 后, 立即静脉给予Dex 5m g/kg、Cyp5m g/kg 或Am i10m g/kg,于LPS攻击后2h 取动物的肝脏,APAAP法进行TNFα免疫组织化学研究,North-ern 杂交分析TNFαm RNA 表达水平。结果发现LPS攻击后2h, 肝脏TNFαm RNA 表达水平显著增高, 肝脏枯否氏细胞胞浆内有大量的TNFα红染颗粒。Dex、Cyp 或Ani均能显著降低大鼠肝脏TNFαm RNA 水平和TNFα含量。结果表明Dex、Cyp 和Ani均显著抑制LPS诱导的TNFα基因表达, 可能有抗感染性休克作用。 相似文献
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内源性NO在LPS和TNFα诱导离体兔肺动脉反应性变化中 … 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNFα)所致离体肺动脉反应性张力变化与肺动脉源性一氧化氮(nitric oxie,NO)的关系。方法:离体兔肺动脉环用LPS+TNFα、LPS或深剂孵育2h和6h,检测肺动脉对乙酰胆碱(ACh)、硝普钠(SNP)和苯肾上腺素(PE)的累积剂量反应,以及一氧化氮 相似文献
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目的:观察壳寡糖对脂多糖(LPS)诱导的猪髋动脉内皮细胞(PIECs)炎症损伤的影响以及潜在的分子机制。方法:以脂多糖(1g/mE)*《激PIECs细胞,建立炎症损伤模型,以RT—PCR和Westernblot的方法观察壳寡糖(COS)预保护PIECs细胞24h,对白介素-8(IL-8)和血管细胞粘附分子.1(VCAM-1)表达水平的影响,以及对JNK信号蛋白磷酸化和c-Fos转录因子表达的影响。结果:壳寡糖可抑制脂多糖刺激的PIECs表达IL-8和VCAM-1,并抑制JNK信号通路的磷酸化和转录因子c-Fos的表达。结论:壳寡糖对脂多糖刺激的PIECs细胞中IL-8和VCAM—1表达的抑制作用是通过抑制上游的JNK信号通路磷酸化和转录因子c-Fos的表达实现的,从而缓解脂多糖对细胞造成的炎症损伤。 相似文献
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细胞增殖必伴有染色体的一分为二及细胞质的增生,β微管蛋白则参与细胞的增殖过程.正性和负性调节因子对β微管蛋白的表达及细胞增殖间的相关性研究显示,不同生理剂量的正性调节因子IGFⅡ、T3/T4处理UMR106细胞12h,Northernblot实验发现它们在促进细胞DNA合成的同时,可使β微管蛋白mRNA表达增加,呈剂量依赖关系.而负性调节因子TNFα则相反地在抑制细胞DNA合成的同时,使β微管蛋白mRNA表达降低,也呈剂量依赖关系.Westernblot实验进一步表明,IGFⅡ可使β微管蛋白表达增加,而TNFα使β微管蛋白表达降低.由此可见,β微管蛋白的合成与细胞增殖间存在着一定的相互联系. 相似文献
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长期以来,迷走神经刺激(vagus nerve stimulation,VNS)被广泛用于临床顽固性癫痫和药物抵抗性抑郁症的治疗,近年来又有文献报道迷走神经刺激术对脑缺血损伤也具有保护作用.VNS可以减少梗死灶面积和增加脑缺血后实验动物的功能评分,机制上它可以通过减少兴奋性谷氨酸的释放抑制神经元的兴奋性,通过抑制细胞因子的合成以减少炎症组织的损伤,并能够抑制神经元凋亡、提高神经营养因子表达水平、促进神经细胞新生以及促进去甲肾上腺素释放等.迷走神经刺激术作为未来治疗脑缺血损伤的一种新的方法,具有良好的应用前景,本文就其作用机制进行综述. 相似文献
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bcl—2和IL—1和TNFα表达的调节作用初探 总被引:1,自引:0,他引:1
通过将反义bcl-2基因转梁于U937细胞,建立了Bcl-2蛋白表达受抑的U937细胞模型,证实了模型细胞的增殖和存活表型授课和线菌素D-结晶紫试验和ELISA检测表明模型细胞上清中TNFα的活性和含量无明显变化,小鼠胸腺细胞增殖试验表明模型细胞上清中IL-1活性升高,提示bcl-2的表达对TNFα的表达无明显影响,但可能在一定程度上抑制了IL-1的表达或活性。 相似文献
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以质粒pIJ486为载体,将来源于质粒pHT1的肿瘤坏死坏因子(TNF-a)cDNA克隆至变铅青链霉菌,以新霉素(30μg/ml)为选择标记,获得了数百转化子,实验表明No.7转化子s.lividans TK54-HT所含重组质粒pIJT7已克隆有TNFcDNA。L929细胞毒实验结果表明该转化子TNF表达量可达10^8活性单位/升以上,中和实验确证其表达产物为人TNF-a,SDS-PAGE表明克 相似文献