几株甲型流感病毒神经氨酸酶(NA)理化特性和抗原性的比较

以两株甲2型流感病毒株贵57-1、甘66-3(H2N2)和两株甲3型流感病毒株京科68-1、穗防74-315(H3N2)为代表株,测定温度、pH及金属离子对感染的鸡胚尿囊液病毒神经氨酸酶(NA)活性的影响,并用NA交互抑制试验检查贵57-1NA与穗防74-135NA之间的N抗原变异情况。 结果表明,在50℃加热30分钟4株病毒的NA活性仅下降原活性的10％以下;但56°C30分钟加热,两株甲2型病毒(H2N2)的NA活性明显下降,仅为原活性的12％以下;而两株甲3型(H3N2)则分别为原活性的34％及37％。根据Paniker和Tams等的报道,N2的活性对45℃及56℃加温比N1更稳定。似乎表明,变异着的NA抗原有越来越耐热的趋势。     

出血热病毒株的分型和抗原性比较的进一步研究

本工作进一步对分离自不同来源的14株出血热病毒用空斑减少中和试验(PRNT)方法进行了分型。以不同株的家兔免疫血清对国际上血清Ⅰ型和Ⅱ型参考毒株进行试验,除分离自褐家鼠的K_(24)-株外,其余13株均可定为血清Ⅰ型或血清Ⅱ型用已知的Ⅰ型和Ⅱ型出血热高价免疫血清与K_(24)株进行中和试验,根据两型免疫血清的中和效价则可将K_(24)株定为血清Ⅱ型,但是K_(24)株免疫血清对6株Ⅰ型病毒和4株Ⅱ型病毒的中和效价几乎相同(相差≤2倍),表明K_(24)株是一株具有广谱中和抗原的出血热病毒。     

脊髓灰质炎Ⅲ型病毒RNAT1-寡核苷酸指纹图谱的比较

制备了4株(京6和昆1、4、14)Polio 3型野毒株的RNA T1-寡核苷酸图谱,并与中Ⅱ2疫苗株的图谱做了比较。与中Ⅲ 2株图谱相比,京6和昆4株分别有5个和14个点不同,而昆1和昆14株则完全不同。这表明;Polio 3型病毒RNAT1-寡核苷酸图谱为区分Polio 3型野毒株和疫苗相关株,提供了较可靠的依据。     

我国两株登革2型病毒基因组的全序列分析

本研究对我国两株登革2型病毒D2-43株、D2-04株的基因组进行了全序列测定,在此基础上对这两株引起不同临床症状及鼠神经毒力的登革病毒的基因组序列进行了比较分析,结果表明D2 43株与D2-04株基因组全长约为10 723nt,核苷酸序列的同源性为95.1%,氨基酸序列的同源性为97 6%,不存在特别的高变区.这两株序列中共有83个核苷酸的变化导致了氨基酸的变化,其中21个差异氨基酸可引起所在位点电荷或极性的变化,位于登革病毒粒子表面的E糖蛋白第126位氨基酸由Glu(D2-04株)→Lys(D2-43株)的变化对其抗原性有影响,可能引起了病毒对鼠神经毒力的改变.对结构糖蛋白E基因的聚类分析表明D2-43株与新几内亚株、台湾87株及菲律宾83株亲缘关系较近,D2-04株与牙买加株及巴西90年分离株的亲缘关系较近,表明我国存在不同起源的登革2型病毒感染.     

2010年深圳地区诺如病毒的基因分型

了解2010年深圳地区诺如病毒的基因型别及分子流行病学特点。 用诺如病毒特异性引物（GI-SKF/GI-SKR、COG2F/G2-SKR）,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法进行诺如病毒核酸扩增,阳性产物回收纯化并测序,用Clustal W和MEGA4.0生物软件对诺如病毒序列进行序列比对和系统进化分析。 85份阳性标本中有79株诺如GⅡ型和6株诺如GⅠ型,其中55株为GⅡ/4(2006b)型,16株为GⅡ/4(2008variant)型,2株为GⅡ/1型,4株为GⅡ/5型,2株为GⅡ/11型,1株为GI/4型,2株为GI/5型,3株为GI/6型。 2010年深圳地区诺如病毒的主要型别是GI和GⅡ,并且以GⅡ/4型为主,流行优势株为GⅡ/4（2006b）。     

不同人群肠道携带耐万古霉素肠球菌的研究

调查住院病人、门诊病人和正常人粪便中耐万古霉素肠球菌的携带率及其耐药表型、基因型和同源性, 为临床预防和治疗选药提供依据。根据CLSI指南做药敏试验, 用PCR法检测万古霉素耐药基因, 用重复基因外回文序列-聚合酶链反应(REP-PCR)进行同源性分析。从住院病人肠道中分离出31株(20.67 %)耐万古霉素肠球菌, 其中22株VRE为VanA基因型, 9株VIE为VanC1基因型。22株VRE同源性分析, A型有19株, 其中A1型4株, A2型6株, A3型4株, A4型3株, A5型2株。B型、C型、D型各1株。9株VIE中有3对菌株分别有100%同源性。门诊病人分离出4株VIE(4%), 为VanC1型, 其中两株有100%同源性。正常人中分离出11株(27.5%)VIE, 8株为VanC1型, 3株为VanC2型; 11株VIE同源性分析, 以A型为主, A1型有1株, A2型有2株, A3型有1株, A4型有1株, D1、D2、D3型各有1株, B、C、E型各有1株。2株住院病人VIE与2株门诊病人VIE有100%同源性, 另外2株住院病人VIE与1株门诊病人VIE有100%同源性。他们与正常人分离的VIE同源性低。22株VRE对万古霉素的MIC值>512 μg/mL, 16株VIE对万古霉素的MIC值为16 μg/mL。8株VIE对万古霉素MIC值为8 μg/mL。可见住院病人肠道中VRE携带率高, 是医院感染的危险因素, 46株耐万古霉素肠球菌的耐药表型与耐药基因型一致; 耐万古霉素肠球菌对多种抗菌药物耐药; 部分菌株有较高的同源性。     

不同人群肠道携带耐万古霉素肠球菌的研究

调查住院病人、门诊病人和正常人粪便中耐万古霉素肠球菌的携带率及其耐药表型、基因型和同源性,为临床预防和治疗选药提供依据.根据CLSI指南做药敏试验,用PCR法检测万古霉素耐药基因,用重复基因外回文序列-聚合酶链反应(REP-PCR)进行同源性分析.从住院病人肠道中分离出31株(20.67%)耐万古霉素肠球菌,其中22株VRE为VanA基因型,9株VIE为VanC1基因型.22株VRE同源性分析,A型有19株,其中A1型4株,A2型6株,A3型4株,A4型3株,A5型2株.B型、C型、D型各1株.9株VIE中有3对菌株分别有100%同源性.门诊病人分离出4株VIE(4%),为VanC1型,其中两株有100%同源性.正常人中分离出11株(27.5%)VIE,8株为VanC1型,3株为VanC2型;11株VIE同源性分析,以A型为主,A1型有1株,A2型有2株,A3型有1株,A4型有1株,D1、D2、D3型各有1株,B、C、E型各有1株.2株住院病人VIE与2株门诊病人VIE有100%同源性,另外2株住院病人VIE与1株门诊病人VIE有100%同源性.他们与正常人分离的VIE同源性低.22株VRE对万古霉素的MIC值>512μg/mL,16株VIE对万古霉素的MIC值为16μg/mL.8株VIE对万古霉素MIC值为8μg/mL.可见住院病人肠道中VRE携带率高,是医院感染的危险因素,46株耐万古霉素肠球菌的耐药表型与耐药基因型一致:耐万古霉素肠球菌对多种抗菌药物耐药;部分菌株有较高的同源性.     

多位点序列分型在食源性金黄色葡萄球菌分型中的应用研究

对食源性金黄色葡萄球菌进行多位点序列分型(MLST)分析,了解其基因型特征,并与流行病学资料进行对比分析。应用MLST方法对2012年石家庄市分离出的18株食源性金葡菌进行基因分型,并对该地区食源性金葡菌分子特性和流行病学特性进行分析。18株食源性金葡菌通过MLST分析得到10个ST序列型,其中ST5序列型最多,共5株;其次为ST464序列型,共3株;ST7型和ST15各2株;ST6型、ST9型、ST59型和ST2138型各1株,有2个菌株是2个新的ST型其ST码分别为287-1-1-8-1-1-1和10-14-8-6-278-3-2。本地区食源性金葡菌的ST型别丰富,主要流行克隆系为ST5和ST464,ST6、ST7、ST9、ST15、ST59和ST2138等克隆系也有分布。     

产ESBLs大肠埃希菌的AmpC基因型分析

目的 了解深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌合并产AmpC酶的状况及基因型特点.方法 从近几年深圳市人民医院产ESBLs大肠埃希菌临床菌株中,筛选出对头孢西丁耐药菌株51株,PCR分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,同时应用多重PCR检测菌株的AmpC酶基因,序列测定PCR阳性产物以确定其基因亚型.结果 51株菌中有49株至少检出一种ESBLs或AmpC基因.单ESBLs基因阳性菌株37株(72.5％),单AmpC基因阳性4株(7.8％),合并ESBLs和AmpC基因阳性的8株(15.6％).共有41株(80.4％)含CTX-M-14基因,4株含CTX-M-15,其他基因型ESBLs较少.2株检出两种ESBLs基因;一株同时检三种ESBLs基因.检出AmpC基因的菌株12株,其中10株为DHA-1型,2株为CMY-2型;其中6株DHA-1型及2株CMY-2型菌同时检出CTX-M-14基因.结论 该院头孢西丁耐药产ESBLs大肠埃希菌中大多数为单产ESBLs菌,主要为CTX-M-14型;少数同时产生ESBLs和AmpC酶,AmpC酶以DHA-1型为最常见.     

流行性出血热(EHF)地鼠肾细胞(GHKC)灭活双价疫苗的人体观察

我国地鼠肾细胞(GHKC)和沙鼠肾细胞(MGKC)培养的EHF灭活疫苗均已进行小量人体试用观察,获得了令人鼓舞的结果。我们用GHKC研制的一批EHF灭活单价疫苗(L99株家鼠型病毒)(88-17批)对12名志愿者进行接种观察,未发现明显的不良反应,接种3针后全部中和抗体阳转(酶斑减少中和试验,EF-RNT),一年后其中10人血清仍保持抗体阳性。鉴于野鼠型和家鼠型EHF病毒间存在有明显的抗原性和免疫原性差异,为获得一种对预防两型EHF同样有效的灭活疫苗,我们用GHKC适应的两型EHF病毒株(野鼠型病毒JR株,家鼠型病毒L99株)制出GHKC灭活双价疫苗90-1批(液体苗)及90-2批(冻干苗),经检定合格,卫生部批准后进行了人体试用观察。疫苗用0.025％福尔马林灭活,加Al(OH)_3佐剂0.5     

石油发酵产蛋白酶菌株Pseudomonas aeru■inosa Nu53-1减毒的研究

石油发酵产蛋白酶菌株Pseudomonas aeruginosa Nu 53-1经NTG诱变处理曾选得42株嘌呤缺陷型。其中多数菌株产蛋白酶能力低于亲株,一株需要腺嘌呤或次黄嘌呤的嘌呤缺陷型B625-25产酶略高于亲株。小白鼠毒力试验表明B625-25的LD_(50)刃为18.95亿,而Nu53-1则仅为0.22亿(按3天死亡数计算)。嘌呤缺陷型与亲株相比毒力下降86倍左     

产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分析

目的 了解深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的ESBLs和头孢菌素(AmpC)酶基因型分布特点.方法 收集深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌临床菌株64株,PCR法分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,并进行DNA测序分型.同时应用多重PCR对其中的头孢西丁耐药株进行AmpC酶基因扩增,DNA序列确定其基因型.结果 64株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,61株(95.3％)检出至少一种ESBLs基因.其中51.6％ (33/64)检出SHV-12基因,46.9％(30/64)检出CTX-M-14基因.11株(17.2％)检出AmpC基因,其中10株为DHA-1型,1株为CYM-2型.19株(29.7％)检出2种以上的ESBLs或ESBLs合并AmpC基因.结论 该院产ESBLs肺炎克雷伯菌中,最常见的ESBLs基因型为SHV-12和CTX-M-14型;AmpC酶的主要基因型为DHA-1,菌株中同时产生多种β-内酰胺酶的较多.     

转座子Tn5诱变慢生大豆根瘤菌

用pSUP1011载体系统,Tn5诱变慢生大豆根瘤菌110、123,其KmR菌落出现频率为5x10-8一5x 10-7。Tn5的SmR。基因能在慢生大豆根瘤菌中表达。用卡那霉素加链霉素来筛选插入变株,可完全排除自然突变的干扰。从4450个KmR变株中检出营养缺陷型7株,其中His-(4)、Glu-(1)和Trp-(2),吸氢功能缺陷型10株,其中2株His-同时是吸氢缺陷(Hup-)和共生固氮缺陷(Nif-),其原养型回变体(回变频率为0.5×10-8)都同时恢复了吸氢与固氮功能,又失去了对卡那霉素的抗性。4株对氧特别敏感的Hup-缺陷型,在培养状态下无吸氢活性,但结瘤固氮时不放氢。     

非复制型痘苗病毒的生物学性状研究进展

痘病毒被广泛用于针对多种感染性疾病和癌症的疫苗研究,而非复制型痘苗病毒的发展又进一步提高了其安全性。来源于中国天花疫苗株的复制缺陷型痘苗病毒天坛株(NTV)正是一株非复制型痘苗病毒。为了促进未来NTV作为疫苗候选株在临床中的应用,我们对NTV与另外2株非复制型痘苗病毒,即改良痘苗病毒安卡拉株(MVA)和NYVAC的生物学性状做简要综述,主要讨论了它们的基因组结构、体外生长特性、病毒复制和形态发生、组织中的病毒分布和病毒-宿主细胞间的相互作用。     

单增李斯特菌新疆分离株lmo0160基因克隆及序列分析

【目的】单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,常引起人和动物致病。其细胞壁表面LPXTG基序蛋白在单增李斯特菌致病过程中发挥重要作用,根据参考株全序列预测的41个LPXTG基序蛋白中仍有部分蛋白功能未知。对单增李斯特菌新疆绵羊脑分离株LM90SB2的LPXTG基序蛋白Lmo0160的基因进行克隆及生物信息学分析,为功能验证提供基础。【方法】根据GenBank中收录的lmo0160序列设计特异性引物,利用PCR方法对新疆分离株的lmo0160基因进行扩增,将扩增产物克隆到pMD 19-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定,并对基因核苷酸序列和蛋白序列进行分析。【结果】分离株LM90SB2的lmo0160序列全长为1 708 bp,包含1 428 bp的开放阅读框,共编码475个氨基酸;LM90SB2株lmo0160核苷酸序列与CFSAN008100株(4b型,美国)、CFSAN023463株(4b型,美国)、J2-064株(4b型,美国)、F2365株(4b型,奶酪,美国)和NTSN株(4b型,绵羊脑,中国扬州)相似性为99.0%-99.1%;与M7株(4a型,牛奶,中国浙江)相似性为97.2%,与Finland1998株(1/2a型,美国)、N53-1株(1/2a型,熟火腿,瑞士)、N1546株(1/2a型,鱼,丹麦)和EGD-e株(1/2a型,美国)相似性为87.2%-91.1%;其推导的氨基酸序列与上述菌株相似性为91.8%-99.4%。系统进化树显示,LM90SB2菌株的lmo0160基因与CFSAN023463、F2365和NSTN菌株亲缘关系较近,处于同一分支上,而与标准株EGD-e菌株亲缘关系较远。蛋白质二级结构预测表明,LM90SB2的Lmo0160蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,不形成跨膜结构。蛋白结构域预测表明Lmo0160蛋白含有胶原蛋白结合域和Cna B结构域。【结论】克隆了LM90SB2的lmo0160基因,为进一步研究LM90SB2的lmo0160基因功能奠定了基础。     

DNA斑点杂交法在单纯疱疹病毒检测及分型中的应用

本文从HSV-2(333)DNA BgLⅡH_2片段中筛选出HSV型共同性(7.8kb)及HSV-2型特异性(3.0kb)DNA片段,经~(32)P标记后作为探针用斑点杂交法对4株HSV标准株及24株疑为HSV分离株进行了检测和分型。结果能准确地将2株HSV-1及2株HSV-2标准株区分开,并确定24株疑HSV分离株中21株为HSV。这些结果与血清学鉴定结果一致,且HSV-2型特异性DNA探针的HSV-2检出率高于McAb。     

转座子Tn5对柠檬酸细菌的诱变

含自杀性质粒 PJB4JI：：Mu：：Tn5的大肠杆菌1830与四株柠檬酸细菌作接合杂交均能获得Kanr转移接合子。其中一株(c-3-1)的Kayr转移接合子中绝大部分对庆大霉素敏感。鉴别了3000个这样的转移接合子菌落获得了2l株营养缺陷型,其中赖氨酸1株,尿嘧啶1株,精氨酸2株,异亮氨酸2株,组氨酸2株,甲硫氨酸株,苯丙氨酸1株,酪氨酸1株,丝氨酸1株,苏氨酸1株,亮氨酸3株,脯氨酸1株,腺嘌呤3株和乳糖利用1株。用琼脂糖电泳检查部分营养缺陷型突变体DNA均未发现自杀性质粒PJB4JI：：Mu：：Tn5,以32p标记的Tn5 DNA为探针与每个营养缺陷型的染色体作杂交均看到了Tn5 DNA同源序列的存在。由此得出结论,这些营养缺陷型产生于转座子Tn5从自杀性质粒PJB4JI到c-3-1染色体的转座。     

乙脑/登革4型嵌合病毒的构建及其小鼠神经毒力测定

目的构建以乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)疫苗株SA14-14-2为基因骨架的乙脑/登革4型嵌合病毒,并分析该嵌合病毒对小鼠的神经毒力。方法通过重叠PCR方法扩增含有登革病毒4型(DENV-4)H241株pr ME基因序列和乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的NS1蛋白前177个核苷酸的融合片段,用Nar I和Bgl II双酶切后替换乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2全长克隆中的相应区域,构建成乙脑/登革4型嵌合全长克隆,通过体外转录和转染BHK21细胞获得嵌合病毒(JEV/DENV-4 chimeric virus,JD4)。通过测定嵌合病毒JD4和2个母本株JEV SA14-14-2株及DENV-4 H241株蚀斑大小、小鼠脑内神经毒力和皮下感染入脑能力、乳鼠脑内神经毒力,比较JD4和母本株之间的差异。通过将JD4在原代地鼠肾(primary hamster kidney,PHK)细胞传代30次,分析传代后嵌合病毒的神经毒力是否减弱及减弱的程度。结果测序结果表明,构建的嵌合病毒JD4基因组序列和预期一致,没有产生新的位点突变。JD4蚀斑较SA14-14-2明显偏小,但和DENV-4 H241株没有明显区别。JD4对3周龄小鼠具有较强的脑内神经毒力,和母本株DENV-4 H241没有差异,对小鼠没有神经侵袭力。乳鼠实验结果表明,嵌合病毒JD4脑内神经毒力虽然略低于母本株DENV-4 H241,但两者之间没有明显差异,都明显强于乙脑疫苗株SA14-14-2。在PHK细胞传代30次后,小鼠神经毒力虽然有所减低,但并不明显。结论成功构建了嵌合病毒JD4,通过测定并比较JD4与母本株的蚀斑特征、小鼠及乳鼠神经毒力等试验,为分析登革疫苗候选株安全性研究奠定了基础。     

粉被虫草N6-(2-羟乙基)腺苷高产菌株的原生质体诱变育种*

在粉被虫草(Cordyceps prainosa Petch)无性型——粉被马利娅霉(Mariannaeapruinosa Liang)原生质体形成和再生的前期研究基础上,报道了通过原生质体诱变培育高产N⁶-(2-羟乙基)腺苷菌株的研究结果。粉被马利娅霉Cp-14单孢子株经15W紫外灯照射后,获得一高产突变株MpM-135．经多代移植后,此突变株比出发菌株Cp-14的N⁶-(2-羟乙基)腺苷含量提高了14.8％。实验还表明,粉被虫草无性型菌丝提取物对枯草杆菌(Bacillussubtilis)抗紫外辐射效果与菌丝所含N⁶-(2-羟乙基)腺苷含量有正相关性。     

白豆杉的核型和性染色体的研究

白豆杉pseudotaxus chienii(Cheng)Cheng是我国裸子植物特有属之一,雌雄异常,根尖 细胞染色体分析表明：雌株有一对异形性染色体,异配性别,属ZW型;雄株是同配性别,属ZZ型,雌株的型为2n=2x=24=22m(2SAT ZW) 2T,雄株的核型为2n=2x=24=22m(2SAT ZZ) 2T。Giemsa C-带,显示,Z染色体长短臂均具端带,W染色体不显带。