HPI在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞特异性抑增殖效应研究

肝细胞增殖抑制因子（Ｈｅｐａｔｉｃｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＨＰＩ）粗制品、半纯品和纯品对体外培养的人肝癌细胞具有显著抑增殖作用,随样品纯度提高抑制活性逐渐增强。纯品（浓度５μｇ／ｍｌ）的抑制率达７７．７１％。正常成年大鼠肝细胞呈ＨＰＩ阳性表达。在ＤＥＮ诱发大鼠肝细胞癌的发生发展过程中,转化的癌前期细胞和肝癌细胞呈ＨＰＩ阴性表达。表明肝细胞ＨＰＩ的表达能力在其癌变过程中消失,从而失去了自身的抑癌作用。     

甲胎蛋白在体外对人肝癌细胞生长的影响

本文用MTT比色法观察了甲胎蛋白(AFP)在体外对人肝癌细胞生长的影响。结果表明,AFP能促进SMMC-7721人肝癌细胞的生长。当AFP与AFP抗体合用时,AFP抗体能减弱AFP对SMMC-7721细胞生长的促进作用;AFP抗体单用对此种细胞的生长亦有抑制作用。另一方面,在相同的实验条件下,AFP和AFP抗体对HL-60人白血病细胞的生长无明显影响;提示AFP的促生长作用具有一定的肿瘤细胞特异性,并非一种蛋白质对培养细胞的非特异性营养作用。此外,AFP亦能促进MCF-7人乳腺癌细胞的生长,AFP抗体对此种细胞的生长有抑制作用。由于MCF-7细胞存在功能性AFP受体,也能合成和分泌AFP。这就提示,人肝癌细胞中的AFP很可能与其受体特异性结合,产生促生长效应。确切机制尚待进一步阐明。     

integrin β1在不同细胞周期肝癌细胞与内皮细胞粘附中的作用

探讨了integrin β1在不同细胞周期人肝癌细胞(SMMC-7721)上的表达和在肝癌细胞与人脐静脉内皮细胞粘附过程中的作用.未同步处理的肝癌细胞(对照组)各细胞周期时相百分比为G0/G1期53.51%、G2/M期11.01%、S期35.48%,采用胸腺嘧啶脱氧核苷、秋水仙碱顺序阻断和胸腺嘧啶脱氧核苷双阻断后释放培养的方法获得G1期和S期的肝癌细胞,其同步率分别为74.09%和98.29%.G1期肝癌细胞integrin β1表达的荧光强度较S期和对照组相应值明显降低.利用微管吸吮技术定量研究了肝癌细胞与内皮细胞之间的粘附力学特性,发现G1期肝癌细胞的粘附力值比S期相应值明显降低(P＜0.01),而S期的粘附力值与对照组比较无明显差别,integrin β1在肝癌细胞与内皮细胞粘附过程中的贡献约50%.结果提示胸腺嘧啶脱氧核苷和秋水仙碱能较好地将肝癌细胞同步于G1期和S期,integrin β1在SMMC-7721肝癌细胞上的表达水平呈现周期差异,在肝癌细胞与内皮细胞粘附过程中,S期细胞可能起的作用更大,integrin β1在这一粘附过程中起着重要作用.     

表阿霉素对肝癌亚细胞蛋白质组影响的研究

表阿霉素是临床应用的抗癌药物之一,它干扰DNA的复制和转录,并能诱导癌细胞凋亡。表阿霉素对癌细胞蛋白质表达谱的影响,涉及到表阿霉素药理作用的机制,对此进行研究,有助于抗癌药物作用机制的理解。运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,对比分析表阿霉素干预前后,肝癌细胞线粒体、细胞核蛋白质组的表达差异。通过超离心分离纯化细胞器,双向电泳分离蛋白质,图像分析筛选差异表达蛋白,MALDI-TOF-MS分析鉴定蛋白质。从线粒体、细胞核两个亚细胞组分中一个鉴定了15种差异表达蛋白,其中5种在表阿霉素干预后的肝癌细胞中表达上调,10种干预后表达下调。这些差异表达蛋白质涉及到细胞的能量代谢、蛋白质合成、细胞骨架的改变、mRNA的加工成熟、细胞应急状态的形成及凋亡调控等许多方面。     

HAI-1过表达对SW620细胞体外生长和运动能力的影响

肝细胞生长因子激活因子抑制因子1(hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1, HAI-1)能有效抑制肝细胞生长因子激活因子(hepatocyte growth factor activator,HGFA)和丝氨酸蛋白酶Matriptase的活性,并可通过对HGFA和Matriptase活性的调控参与HGF/c-Met信号传导途径。为了解HAL-1在肿瘤细胞的生长和运动中的作用,本研究将人HAI-1基因全长cDNA克隆至pcDNA3.1( )表达载体,并转染人肠癌SW620细胞,用Western blot验证了转染细胞中HAI-1的表达情况,并分别利用生长曲线、软琼脂集落形成、穿膜运动和扩散运动测定等方法检测了HAI-1 过表达对SW620细胞生长和运动能力的影响。生长曲线和软琼脂集落形成测定都显示出HAI-1 转染细胞与对照组相比差异不十分明显。穿膜运动和扩散运动测定则均显示了HAI-1过表达对细胞运动能力有明显的抑制。因此,HAI-1的过表达虽然在体外对肿瘤细胞生长影响较小,但可以抑制肿瘤细胞的运动迁移能力。     

瘦素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖和移行的影响

目的本实验旨在研究瘦素(Leptin)对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和移行的影响。方法采用原代细胞培养方法建立VSMC细胞模型;以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、免疫细胞化学染色等方法观察瘦素对VSMC增殖的影响;采用细胞移行实验观察瘦素对VSMC移行的影响;采用MAPK的抑制剂SB203580观察瘦素对VSMC增殖的抑制作用以探讨MAPK在瘦素促VSMC增殖中的信号转导机理。结果瘦素能显著促进VSMC增殖和移行,而MAPK的抑制剂SB203580可显著抑制瘦素对VSMC的增殖效应。结论瘦素具有明显的促VSMC增殖和移行的作用,其作用机制与激活MAPK信号途径有关。     

纤维蛋白原、神经氨酸酶对红细胞与内皮细胞粘附的影响

采用流室系统,研究了不同切应力作用,纤维蛋白原（Ｆｇ）、神经氨酸酶对红细胞（ＲＢＣ）与内皮细胞（ＥＣ）粘附的影响。结果表明：Ｆｇ可以增加ＲＢＣ与ＥＣ的粘附且存在明显的剂量依赖关系;加入Ｆｇ后,随切应力增大,ＲＢＣ与ＥＣ相对粘附数按指数曲线减少并且趋于一大于零的值,而对照组却趋于零。提示这种由Ｆｇ介质的粘附可能存在于体内正常生理切应力范围内,并与对照组的粘附有着本质的不同。实验还表明：在０．１Ｐａ和     

氧胁迫对人肝癌细胞生长分化和凋亡的影响

采用不同浓度的抗坏血酸(50—800μmol/L)和硫酸亚铁(2.5—40μmol/L)系统生成以羟自由基为主的各种程度氧胁迫,使之作用于人肝癌细胞。本文所采用的不同程度的氧胁迫均能抑制癌细胞的生长。低水平氧胁迫可使肝癌细胞失去某些恶性特征,趋向分化,表现为细胞表面对Con-A的凝集力、甲胎蛋白含量、γ-谷氨酰转肽酶和酪氨酸-α-酮戊二酸转氨基酶活性都朝着分化方向变化,差异显著。分化后的细胞克隆形成能力显著降低。在分化过程中,出现一定量的凋亡细胞。随着氧胁迫程度的增高,凋亡细胞增多,表现为非贴壁细胞增多,细胞体积变小,染色质凝缩在核膜边缘,呈新月形,核碎裂,但质膜完整。细胞核中DNA降解成大约21.2kbp大小的大片段DNA。有望通过严格控制氧胁迫程度来减慢肝癌细胞增殖,促进分化和凋亡,使恶性细胞逆转成良性细胞。     

红细胞血影介导7sRNA对大鼠肝癌细胞(CBRH-7919)DNA复制、转录和甲胎蛋白合成的影响

本文总结了用红细胞血影介导正常肝7sRNA进入肝癌细胞的定位及其对细胞DNA复制、转录和蛋白合成的影响。装载~(125)I-78RNA的血影与肝癌细胞融合后,放射自显影标本显示7sRNA在细胞内的分布,主要定位于细胞质,也有见于细胞核内。7sRNA进入细胞后对细胞的DNA复制、转录和蛋白合成有抑制作用。免疫荧光和免疫沉淀法检测肝癌细胞甲胎蛋白合成的结果表明,7sRNA导入晚G_1期同步细胞后继续培养4小时,甲胎蛋白合成减少。由于细胞DNA复制和转录被抑制,在一定程度上影响了甲胎蛋白基因的表达。     

铜绿假单胞菌体外对肠上皮细胞骨架的影响

为探索铜绿假单胞菌粘附肠上皮细胞后,细胞骨架特性的变化规律及可能的机制。采用微管吸吮实验技术并结合细胞ELISA、图像分析等方法研究体外绿脓杆菌粘附肠上皮细胞后细胞骨架的变化。结果显示细菌粘附后1h肠上皮细胞活力即开始下降,3h后IEC面积明显减小,而细胞周长无明显变化;胞内骨架蛋白减少,且随孵育时间的延长愈趋明显;细胞弹性系数K1、K2在粘附后3h明显降低,同时伴有粘性系数μ也明显下降。以上结果表明绿脓杆菌粘附肠上皮细胞后,细胞骨架成分改变,细胞骨架功能受损害,最终导致细胞损伤。