野蚕黑卵蜂寄主识别利它素的纯化及氨基酸组成分析

针对利它素特殊的物理及化学性质,采用特定的温度分离方法,成功地从野蚕Theophila mandarina和家蚕Bombyx mori的雌蛾性附腺中分别获得了纯度较高的野蚕黑卵蜂Telenomus theophilae寄主识别利它素。对这两种利它素氨基酸组成的分析表明,来自家蚕和野蚕雌蛾性附腺的利它素在氨基酸的组成和含量方面非常相似,在检测到的15种氨基酸中,甘氨酸、谷氨酸和天冬氨酸的克分子百分数在10%以上。从家蚕得到的分别为28.1%、18.5%和12.6%。从野蚕得到的分别为24.4%、18.1%和10.1%。这3种氨基酸之和在家蚕和野蚕中均超过50%以上。用凝胰乳蛋白酶对这两种利它素进行水解时发现溶液中均产生非水溶性沉淀,电泳表明沉淀的多肽蛋白分子量在10 Kd左右。这显示在野蚕和家蚕利它素结构中,有着与家蚕丝蛋白相类似的结构,存在着结晶区域（沉淀）和无定形区域（上清）。     

野蚕黑卵蜂寄主识别利它素的cDNA文库构建

根据家蚕性附腺中含有的利它素能诱导野蚕黑卵蜂寄生涂有该利它素的人造卵及能用家蚕卵繁育野蚕黑卵蜂的特性 ,用化蛹 9天的家蚕雌蛹性附腺分泌部的高丰度的mRNA构建了富含利它素基因的cDNA文库。构建成的未扩增文库的滴度为 3.2 9× 10 4 pfu μL ,重组率为 90 .0 5 % ,扩增后的文库总滴度为 1.5 6× 10 7pfu μL。用PCR方法对总文库和随机挑取的噬菌斑进行扩增 ,表明λZiplox载体中已含有大小为 0 .5～ 8.0kb的cDNA插入片段 ,并在 2 .5kb、1.1kb和 0 .75kb处cDNA插入片段相对集中。所有分析结果表明 ,采用特定的发育时期和特定的组织提取的mRNA构建而成的cDNA表达文库具有较高频率的利它素基因片段和合适的滴度 ,定向插入技术并结合λZiplox噬菌体的表达功能 ,使构建的cDNA文库具有表达外源DNA的功能 ,有利于进行利它素基因的免疫筛选。     

温度对野蚕黑卵蜂寄主利它素的影响

利它素粗提液或涂利它素粗提液的人造卵经不同温度(25℃、60℃或100℃)处理30 min后进行生物活性测定,发现各温度下利它素仍对野蚕黑卵蜂有很强的引诱活性,其平均反应级数与常温(25℃)相比无明显差异,表现出一般蛋白质所没有的热稳定特性。低温 (4℃、0℃、-20℃或-70℃)同样也能保存粗提液中利它素的生物活性,但发现能引起粗提液发生凝集, 且0℃以下比4℃能产生更多的凝集, 使粗提液中利它素活性组分含量减少,-20℃时,其活性组分的峰面积仅为对照的13.1%,表现出一般蛋白质所没有的低温敏感性,这一发现对利它素的快速、简捷、有效分离具有重要的指导意义。     

家蚕性附腺发育与核酸及利它素蛋白变化的关系

对不同发育时期家蚕Bombyx mori雌性性附腺核酸和蛋白质含量测定的结果表明, 从家蚕化蛹后第6天到成虫羽化当天的性附腺内总蛋白质含量不断增加,至羽化当天为最高,达860±70 μg/对。不同时期内能引诱野蚕黑卵蜂识别寄主的利它素在总蛋白中所占的比例差异明显,从化蛹后第6天的10%增加到羽化后的58%。性附腺的总RNA含量从化蛹第6天到成虫羽化前1天几乎是直线增加,但羽化后下降很快。不同时期分泌部中总RNA含量变化与贮存部明显不同。含量最高时,分泌部RNA可占整个性附腺RNA的90%以上,而贮存部总RNA含量则远少于分泌部,羽化当天约为分泌部的十分之一。分泌部总RNA中的18S亚基含量远高于28S亚基,明显不同于贮存部的。从分泌部总RNA中分离的mRNA存在明显的条带分布,这预示着高丰度的mRNA的存在与总蛋白中高含量利它素的存在有着特殊对应关系。     

野蚕黑卵蜂雌性内生殖器官的结构及其发育

报道了野蚕黑卵蜂成虫雌性内生殖器官的结构及其发育的系统观察结果.雌性成虫内生殖器官包括一对卵巢、两条侧输卵管、中输卵管、受精囊和附腺.成虫期卵巢生长速度随日龄是先增大后减小,但卵子随日龄是增大后并不下降,而且卵子成熟量一直保持较高水平,显示该蜂具有较强的生殖力.成虫期内其它生殖器官一般随日龄的增长而增大,达到一定程度后基本保持稳定.     

温度对野蚕黑卵蜂卵巢发育和卵子发生的影响

分别在19、22、25、28和31℃条件下,观察不同温度对野蚕黑卵蜂Telenomus theophilae Wu et Chen(Hymenoptera:Scelionidae)雌蜂卵巢发育和卵子发生的影响.结果表明,在19～28℃之间,雌蜂卵巢生长,基端卵子生长和卵巢中卵子发生的速度随温度上升而逐步加快.在31℃下,羽化1d后雌蜂卵巢长宽显著短于25℃和28℃下同日龄的的雌蜂,卵巢中成熟卵也显著减少,但从羽化后第2d开始,各项指标均与25℃和28℃下的接近.这说明该蜂对温度的适应范围较广,在19～31℃之间,虽然野蚕黑卵蜂的卵巢发育速度不同,但所能达到的最大卵量没有明显差异,说明这5个温度对于该蜂的卵子形成均较为适宜.     

不同食料对野蚕黑卵蜂卵巢发育和卵子发生的影响

以20%浓度蜂蜜、蔗糖、葡萄糖、果糖、甘露糖为食料,研究了它们对野蚕黑卵卵巢发育和卵子发生的影响。结果表明,与对照相比(蒸馏水),蜂蜜、蔗糖、葡萄糖和果糖能促进野蚕黑卵蜂雌蜂卵巢发育和卵子发生,可使其卵巢管中较高的成熟卵量维持较长时间,即可延缓该蜂的卵子重吸收。甘露糖对野蚕黑卵蜂的卵子形成有一定的促进作用,但其所起的作用显然不如蜂蜜及其它3种糖类,并且也不能延缓该蜂的卵子重吸收。     

中国黑卵蜂属一新记录种——东方蝗卵蜂

记述黑卵蜂属Scelio中国1新记录种:东方蝗卵蜂Scelio orientalis Dodd,并报道该寄生蜂的新寄主:越北腹露蝗Fruhstorferiola tonkinensis Will.。     

寄主卵龄和接触时间对夜蛾黑卵蜂寄生能力的影响

在温度(26±1)℃、RH70%±5%、光暗比L:D=12:12的条件下,研究了在接触时间为6、12、24、36h情况下,夜蛾黑卵蜂Telenomus remus Nixon对卵龄为0、6、12、24、36h的甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)第1天和第2天所产卵的寄生率、子代羽化率和性比。结果表明,夜蛾黑卵蜂寄生第1天卵龄为6h的寄主卵24h后,寄生率、子代羽化率和性比显著高于其他条件,分别为56.97%、89.11%和87.63%;寄生第2天相同条件的卵,寄生率、子代羽化率和性比也显著高于其他条件,分别为54.47%、95.37%和88.72%;寄生第1天和第2天的卵,其寄生率和子代性比差异不显著,但寄生第2天卵的子代羽化率显著高于寄生第1天卵的子代羽化率。因此,在室内以甜菜夜蛾为寄主繁育夜蛾黑卵蜂,最好以甜菜夜蛾第2天卵龄为6h的卵为寄主,接触时间以24h最适。该结果对夜蛾黑卵蜂应用于田间防治甜菜夜蛾具有指导意义。     

基于RAPD分析的中国野桑蚕和家蚕遗传多样性和系统发育关系研究

对具代表性的中国11个地区的野桑蚕Bombyx mandarina进行了随机引物扩增多态性DNA(RAPD)分析,结果表明：不同地区的野桑蚕的遗传距离较大,最大为0.465(安康-镇江),最小的也有0.209(武汉-合肥);同一地区不同个体野桑蚕的遗传距离也较大,最大为0.318,最小的为0.144。它们均远大于家蚕B.mori品种内个体间的遗传距离(最大为0.068、最小为0.015),甚至超过了家蚕品种间的遗传距离(最大为0.258、最小为0.197)。这表明中国野桑蚕是一个十分混杂的、遗传多样性非常丰富的群体。另外,在大多数情况下野桑蚕的遗传距离表现出与空间距离正相关。遗传距离和系统发育分析结果显示陕西一带的野桑蚕成分复杂,有重要的演化意义。     

Source and characterization of an egg recognition kairomone of Telenomus heliothidis, a parasitoid of Heliothis virescens

ABSTRACT. The ability of Telenomus heliothidis Ashmead (Hymenoptera; Scelionidae) to recognize its host, the eggs of Heliothis virescens (F.) (Lepidoptera; Noctuidae), was determined in laboratory studies. The material present in the accessory gland of female H. virescens adults acted as an egg recognition kairomone for T. heliothidis. Host eggs which lacked the kairomone were not attacked, while glass beads the size of H. virescens eggs and coated with the accessory gland material were. The parasitoid failed to respond to the kairomone unless it was associated with a target the size and shape of normal hosts. The kairomone is heat stable, but was deactivated by proteolytic enzymes. The accessory gland contained 200 mg/ml protein which suggests that the kairomone is proteinaceous.     

Gene analysis of an antiviral protein SP-2 from Chinese wild silkworm, Bombyx mandarina Moore and its bioactivity assay

The cDNA encoding an antiviral protein SP-2 against BmNPV was cloned from the midgut of Chinese wild silkworm, Bombyx mandarina Moore (GenBank access AY945210) based on the available informa- tion of the domesticated silkworm. Its cDNA was 855 bp encoding 284 amino acids with predicted mo- lecular weight of 29.6 kDa. Its full length in genomics was 1376 bp, including 5 exons and 4 introns. The expression analysis indicated that it was only expressed in midgut, and its expression level was higher during feeding stage of larval instars while very lower during the moltism and mature stages. The de- duced amino acid sequence of this protein showed eight-amino-acid variation compared with the counterpart of domesticated silkworm. Its antiviral activity was assayed through in vitro test. The re- sults indicated that it showed strong bioactivity against BmNPV, and its activity was 1.6 fold higher that the counterpart of domesticated silkworm.     

野桑蚕、蓖麻蚕及家蚕基因组的RFLP分析

以家蚕Bombyx mori丝素重链基因、丝胶基因1和胰凝乳蛋白酶抑制因子13基因为探针,对野桑蚕B.mandarina、蓖麻蚕Philosamia cynthia ricini和家蚕B.mori基因组DNA进行限制性片段长度多态性分析。结果发现,在野桑蚕、蓖麻蚕基因组中存在着家蚕丝素重链基因、丝胶基因1的同源序列,而在中日野桑蚕以及蓖麻蚕品种间存在着限制性酶切位点差异;丝胶基因1在中国野桑蚕基因组的EcoRⅠ酶切图谱较日本野桑蚕与家蚕更为一致,表明家蚕与中国野桑蚕亲缘关系更近。此外,在野桑蚕基因组中发现了家蚕胰凝乳蛋白酶抑制因子13基因的同源序列,并且在家蚕品种间以及中日野桑蚕之间也存在着多态性。这些结果表明不同绢丝昆虫在适应生存环境的进化过程中,基因组发生了结构改变。     

Determination of phosphorylated amino acid residues of Rab8 from Bombyx mori

The Rab family of small GTPases are key regulators of membrane trafficking. Partially purified Rab8 from Bombyx mori (BRab8) was phosphorylated by protein kinase C in mammalian cells in vitro. To determine which of the seven serines and four threonines are phosphorylated, we generated deletion and site-directed mutants of BRab8, inserted them in Escherichia coli, partially purified the encoded fusion proteins by affinity chromatography, and examined their phosphorylation by protein kinase C in vitro. We found that Ser-132 of BRab8 was specifically phosphorylated by protein kinase C. In addition, Western blotting using an antiserum against BRab8 and in-gel staining for phosphorylated proteins revealed that BRab8 is phosphorylated in vivo.