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兔出血症病毒体外复制的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
在几种动物细胞上,采用同步感染的方法研究了兔出血症病毒(RHDV)的复制特性。病毒感染细胞后(PI)48—72小时可观察到明显的细胞病变,血凝效价可增高5—10倍。病毒对细胞传代代数不同,敏感性也不同。在兔婴肾(RK)和兔婴肺(RL)细胞上以4—8代最为敏感。采用免疫荧光染色法,经病毒感染48—72小时的细胞中可观察到特异性荧光。细胞增殖的病毒经PEG-DS浓缩,Sepharose 4B柱层析提纯后,在电镜下可观察到完整的病毒粒子,将此病毒回接健康实验兔可致100%死亡。免疫双扩散和免疫电泳试验表明,细胞增殖的病毒抗原与来自病兔肝的RHDV抗血清之间产生明显的沉淀带。SDS-PAGE分析病毒获得四条多肽,其分子量大小与病兔肝组织提取的病毒蛋白多肽分子量相比略有差异。 相似文献
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用对流电泳提纯兔出血症病毒 总被引:2,自引:0,他引:2
兔出血症病毒(RHDV)在pH8.6的琼脂糖凝胶上电泳,在负极侧有一血凝峰,免疫电镜观察有大硅RHDV颗粒,证实RHDV病毒粒子带正电荷。利用这一特性可用对流电泳提纯病毒。将抗体与病毒颗粒形成的沉淀带切下,作SDS-PAGE,经免疫转印出现6条区带,其中60kD的VP_1为主要结构多肽。用免疫复合物提取核酸,以狄高辛标记制成探针,能与病毒核酸和克隆的RHDVcDNA2.2kb片段和4.8kb片段杂交,探针灵敏度达pg水平。能用病毒核酸作模板制备探针,证实RHDV的核酸为DNA。 相似文献
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1984年,江苏无锡地区家兔暴发流行一种新的急性传染病。病死率高于90%,抗菌素治疗无效。随后国内其它一些地区也相继发生。 对病兔的肝、肺悬液做电镜检查,发现了许多近球形的病毒颗粒。用此悬液接种易感 相似文献
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兔出血症病毒结构多肽分析 总被引:3,自引:0,他引:3
粗提病毒经Sepharose4B层析后,获得纯化的兔出血症病毒(RHDV)。提纯病毒经过SDS-PAGE经考马斯亮蓝染色显示A、B、C、D、E、F和G7条多肽,凝胶扫描显示A为RHDV主要结构多肽。用多抗和单抗作免疫转印分析,证实A、B、C、D、E、和G为结构多肽,此6条结构多肽间的抗原关系十分密切。 相似文献
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兔出血症病毒与细小病毒抗原相关性试验 总被引:1,自引:0,他引:1
用间接ELISA、ELISA交叉阻断法和交叉血凝抑制试验对兔出血症病毒(RHDV)与6种细小病毒进行抗原相关性试验。用间接ELISA证实,RFIDV与它们有轻度交叉关系,其抗原相关值分别为:小鼠细小病毒(MVM)5.59%;鹅细小病毒(GPV)3.54%;猪细小病毒(PPV)1.76%;水貂肠炎病毒0.7%。细小病毒间的抗原相关值:MEV与PPV为31.6%,MEV与MVM为35.36%;而CPV与MEM、PPV、MVM的相关值均为零,即无相关性。在ELISA交叉阻断法中证实:犬细小病毒(CPV)、猫泛白细胞减少症病毒(FPV)和MEV均不能阻断RHDV与其抗体结合,仅GPV有轻度阻断作用,其最大阻断率为40%。在血凝交叉抑制试验中,未发现RHDV与细小病毒及其相应抗体间存在交叉抑制现象。以上结果表明RHDV与细小病毒在血清学方面有轻度相关性。 相似文献
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兔的一种新病毒:Ⅱ.一株兔出血症... 总被引:4,自引:1,他引:3
In this paper a strain of Rabbit Hemorrhagic Disease Virus (RHDV) was isolated and purified from the diseased rabbit livers with a method of using chloroform, two-phase of polyethylene-glycol-dextran sulfate sodium and sucrose density gradient centrifugation. Purified virus was nonenveloped, icosahedeal symmetry with a triangulation number of 3, and 33-37 nm in diameter. The capsid was composed of 32 capsomeres with central holes in an outer diameter of about 9nm. Two types of viral particles having different sedimentation coefficient, 130s and 166s could be identified after sucrose density gradient centrifugation. Probably no less than four virion proteins with molecular weight of 66.4, 65.0, 63.5, 41.0 x 10(3) dalton were detected by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Viral nucleic acid was extracted from purified virus by using SDS-proteinase K-phenol. Tests with diphenylamine, formaldehyde, and staining with acridine orange as well as the curves of thermal denaturation showed that this kind of virus had a single-stranded DNA. The molecular weight of the ssDNA was approx 2.1 x 10(6) dalton as determined by electron microscopy. Data indicate that the RHDV may like the parvovirus of the family Parvoviridae. 相似文献
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使用PEG-DS两相系统和超离心提纯的兔出血症病毒(RHDV)四个分离株病毒,再经Sepharose 4B柱层析进一步提纯后,得到较纯的病毒粒子,回收率可达70%以上。应用常规双向免疫扩散试验,交叉血凝抑制试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)对四个不同地区分离株间的血清学关系进行了比较研究。结果表明实验中的四个分离株病毒均属同一血清型。SDS-PAGE结果表明,这四个分离株病毒均含有四条多肽,分子量为28—64KD。各株病毒多肽的分子量和各多肽在病毒粒子总蛋白中所占比例略有差异。因此四个分离株的RHDV在蛋白结构上可能存在地区差异。 相似文献
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兔出血症病毒核酸的某些理化性质的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对我国无锡分离的兔出血症病毒A_2R-3毒株核酸的某些理化性质进行了研究。采用孚尔根染色、二苯胺反应和核酸酶解实验证实病毒核酸为DNA类型。吖啶橙染色、甲醛反应、核酸酶S_1消化和核酸热变性实验表明病毒核酸为单链型。核酸电泳呈单一组分。电境观察显示核酸分子链呈线状,平均长度约为2.15μ。计算分子量约为2.1—2.5×10~6d。核酸碱基组盛为A25.34、T29.37、G23.85、C21.43、(G C)克分子百分比值为45.28。结合以前的报道、我们认为:兔出血症病毒可以归类于细小病毒科。 相似文献
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采用氯仿、聚乙二醇。硫酸葡聚糖钠盐二相系统和蔗糖密度梯度离心法,从患病兔肝组织中提取、纯化病毒。该病毒粒子无囊膜,呈20面体对称,直径一般为33—37 nm。其三角剖分数T=3,共有32个子粒,每一子粒为中空的、外径为9 nm左右的圆形轮廓。经蔗糖密度梯度离心后,可获得沉降系数为166s的病毒颗粒,这种颗拉具有很强的感染性。经SDS—PAGE测得病毒粒子有四种多肽,分子量分别为66.4k、65.Ok、63.5k、41.Ok。二苯胺试验,吖啶橙染色、甲醛试验及热变性曲线表明,该病毒是单链DNA病毒。电镜下经甲酰胺法展层的病毒核酸呈单链线状,分子量平均为2.1×106道尔顿。此病毒的上述性质类似于细小病毒。 53s中空的圆形子粒,有很强的血凝性,而对照组铁蛋白和同一条件下所制备正常兔肝
成份无凝血特性,说明53s的9nm粒子应为病毒外壳蛋白子粒。 相似文献
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1986年春,武汉市第二制药厂(WSPMM)试验用家兔突然口鼻渗出鲜血,几乎全部猝死。作者观察了罹病死亡的症状,认为此病例与黄印尧等所报道的相同。湖北省中医药研究院(HTCMI)也发生此病的流行。作者对这两种不同来源的病料,进行相同的处理,提取病毒粗纯物,回接同种动物,可引起同样典型的发病症状。进一步将死亡兔的肝、睥等脏器组织匀浆。经低速、高速、超速和蔗糖密度梯度离心后制样,电镜观察可见典型的病毒柱子。以上两种病毒粒子制备的抗血清和南京农业大学的兔出血症病毒抗原在双扩散沉淀中,产生典型的沉淀反应,说明三种病毒抗原的一致性。但是湖北株、南京农业大学病毒株抗原和日本细小病毒的抗血清,在双扩散反应时均无沉淀反应。湖北株病毒的形态大小、超微结构、外壳蛋白的
多肽和血清学特性,均不同于标准兔细小病毒,可能是一新的病毒。 相似文献
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兔出血症病毒主要结构多肽的氨基酸分析 总被引:1,自引:0,他引:1
兔出血症病毒主要结构多肽的氨基酸分析王恒安,杜念兴,徐为燕(南京农业大学,南京210095)关键词兔出血症病毒,结构多肽,氨基酸分析有关兔出血症病毒(RHDV)结构多肽的报道很多,有认为只有1条,有报道4条的,也有报道多达6条的。但其主要结构多肽为分... 相似文献
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兔出血症细小病毒血清学的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用免疫双扩散和酶联免疫吸附分析(ELISA)对七个不同地区兔出血症病原分离物进行了血清学比较研究。本试验用免疫双扩散和ELISA,证明七个兔出血症病毒分离物之间存在着基本相同的血清学关系,其中A_2R—3和H.E.二株抗原之间存在较大差异.证实我国流行的兔出血症病毒属于一个血清型,但不同地区的分离株可能出现亚型。 相似文献