植物弹状病毒提纯技术的研究进展

弹状病毒(Rhabdoviruses)是一类由单分子负链单股RNA和蛋白质外壳组成的子弹形病毒,它包含一大批寄主范围不同的病毒成员,分类上属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)。它们可分别侵染哺乳动物、鱼类、昆虫和植物。其中侵染植物的成员归为植物弹状病毒组,它们的颗粒呈棒状或子弹状,以棒状为主。到目前为止,对植物弹状病毒的研究与其他病毒相比是很不深入的,最主要的限制因素就是病毒本身的提纯。因此研究弹状病毒的提纯技术具有重要的意义。     

在琼脂双向扩散中植物病毒非特异带的产生和消除

检测植物病毒,通常采用琼脂双向扩散、对流免疫电泳和酶联免疫吸附测定(ELIsA)等三种方法,而在研究一些植物病毒之间的亲缘关系方面,琼脂双向扩散则能提供其他方法所不能提供的免疫学图谱。我们在做琼脂双向扩散时发现,植物病毒的某些寄主与提纯病毒时所用磷酸盐缓冲液之间常能形成非特异带。本文报道非特异带的干扰现象及其消除方法。     

烟草花叶病毒提纯的改良程序

植物病毒的分离和提纯是研究植物病毒病不可缺少的步骤。病毒粒体的纯化一般有三个要求:一是纯度高,二是产量高,三是方法简便易行。烟草花叶病毒(TMV)的侵染寄主广泛,是农作物的要病原毒。因此,它在植物病毒病研究中,占有相当重要的地位。超离心机的问世,对提高 TMV 的纯化程度和产量提供了有利的条件。但在不具备超     

我国发生的一种香石竹斑驳病毒株系研究 Ⅰ 寄主范围、提纯及血清学特性

北京、上海栽培香石竹上发生的一种香石竹斑驳病毒BS株系(Carnation Mottle Virus-BS Strain),人工接种可局部侵染苋色藜,墙生藜,千日红及番杏,有时可系统侵染昆诺阿藜,分别造成坏死斑或褪绿斑,不侵染所试其它2科5种植物。单斑分离接种昆诺阿黎做为提纯材料,经PEG(分子量6,000)沉淀,差速离心及蔗糖密度梯度离心,病毒提纯量约140毫克/公斤鲜组织。病毒颗粒呈等轴多面体,直径为33毫微米。提纯物紫外扫描呈典型病毒核蛋白吸收曲线,A260/A280值为1.54,核酸含量约20％。提纯病毒免疫家兔所得抗血清试管沉淀效价为1:4096,琼脂糖双扩散效价可达1:1024。此株系血清学反应与英国香石竹斑驳病毒B-362株系呈部分同源性。     

河南小麦梭条斑花叶病病原鉴定、病毒提纯及其特性

经鉴定,我国河南邓县冬小麦上发生的一种病毒病的病原,是小麦梭条斑花叶病毒。 对病毒的分离纯化进行了研究,提出了一个简单可靠的病毒纯化程序,获得了较为理想的提纯病毒制品,提纯病毒具有典型的、核酸含量约为5～6％的线状病毒紫外吸收曲线,病毒粒体宽约12nm,长度分布从200～2000nm以上,平均粒体长度约为1000nm,在300nm、600nm及1000nm处有3个分布高峰,用提纯病毒免疫兔子获得效价为1/1024的抗血清,提纯病毒的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可检测到多条蛋白带,分子量从36.6kd至28.6kd,其中36.6kd的蛋白为病毒的外壳蛋白,其余的为外壳蛋白的降解产物。     

油菜花叶病毒的提纯及其理化性质的研究

在浙江省油菜产区分离到的对油菜作物造成危害的油菜花叶病毒6号(YMV_6),从病毒形态、血清学、沉降常数和其他性质的研究都说明它是一种新的球形病毒,并具有较高的稳定性。为了对油菜病毒病的诊断和防治积累一些资料,进一步研究了其提纯和理化性质。前已用琼脂凝胶过滤法部分提纯了YMV_6,此法虽简而易行,但由此获得供理化性质研究用的提纯样品仍有困难。本文报导用聚乙二醇浓缩和差速离心法提纯YMV_6及其若干理化性质的研究结果。     

小麦黄矮病毒GPV株系的提纯及血清学研究

小麦黄矮病是危害我国小麦生产的一种重要病毒病害。国内对此病毒的形态结构和提纯方法方面的研究工作已有报道。但对广为应用的蔗糖密度梯度离心法纯化该病毒、提纯病毒的产量估算以及血清学检测技术的研究报告却极少。本文报道我们有关这方面的研究     

间接酶联免疫吸附试验快速检测无毒唐菖蒲试管苗

本文利用间接酶联免疫吸附试验检测了从北京地区栽种的唐菖蒲上分离到的一株病毒的提纯制品和唐菖蒲试管苗的病叶粗提液。用提纯的病毒免疫家兔,抗血清的滴度为1：62500。提纯病毒的最适包被浓度为2．5μg/ml。能检测提纯病毒的最低浓度为4ng／ml。侵染性试验检测提纯病毒的最低浓度为30Ⅱg／mI。在间接酶联免疫吸附试验中,该病毒与烟草花叶病毒普通株有血清学相关性。     

人精液对RAJI细胞中EPSTEIN-BARR病毒早期抗原的诱导

在大戟科、瑞香科、豆科和其它科植物中,发现有些植物含有能诱导人伯基特淋巴瘤细胞——Raji细胞中EB病毒早期抗原的物质,并已证明其中有的是很强的促癌物质,如12-0-十四烷酰巴豆醇-13乙酸酯(TPA)、桐油提纯的HHPA、芫花和黄芫花等。某些人的精液也含有能激活EB病毒的物质。本文报告中国人的精液,以及人精液与从宫颈癌病人分离的细菌培养液,对EB病毒早期抗原的诱导作用和协同诱导作用。     

我国水稻条纹叶枯病病原性质的研究

病样经提纯后,在电镜下获得3nm丝状和8nm分枝丝状结构,病毒样在蔗糖密度梯度离心后产生三条沉降带。经过电泳分析表明:病毒外壳蛋白为单一组分,分子量约为3.69×10~4dalton;病毒核酸有三种大小不同的组分,分子量为0.9,1.0,1.4×100dalton(混合样)。用提纯的抗原制备抗血清。提纯病毒抗原与所制备抗血清、与我国过去研究制备的抗血清及与日本制备的条纹叶枯病单克隆抗体都有血清学反应。     

侵染天南星科植物病毒的分子鉴定及其生态学研究

通过病毒粒子部分提纯和形态学观察,发现侵染我国南方天南星科植物的病毒主要有线状和球状两种形态．经病毒基因组序列分析确定线状病毒为芋花叶病毒(DsMV);经血清学反应和序列分析确定球状病毒为黄瓜花叶病毒(CMV)．CMV CP基因序列同源性分析的结果表明,侵染天南星科的CMV是相对独立的种内变异类型,归属于亚组L同时,CMV存在对天南星科植物的适应性变异．对采自我国海南、湖南、浙江、上海等地的126个天南星科植物样品进行RNA核酸斑点杂交检测,获得病毒检测结果。海南省样品DsMV的检出率为73．3％,CMV的检出率为46．7％;湖南省样品DsMV的检出率为100％,CMV的检出率为38.5％;浙江省样品DsMV的检出率为93．0％,CMV的检出率为7．0％;上海市样品DsMV的检出率为100％,尚没有检测到CMV,首次证实了自然条件下CMV作为天南星科植物主要病毒的存在,在我国南方地区,该病毒对天南星科植物的自然侵染受到气候、季节和寄主等生态因子的影响。DsMV则在天南星科植物上普遍存在。     

苜蓿花叶病毒提纯方法的改进*

用来自于白车根草（Trifolium repens）上的一个苜蓿花叶病毒分离物AMV－SY为材料,比较了3种以差速离心为主结合PEG沉淀和超速离心提纯病毒的方法,对提纯病毒进行紫外吸收测定、电镜检查和SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的结果显示：以交替使用含有0.1mol/LEDTA和0.1mol/L MgSO4的磷酸缓冲液作为病毒悬浮介质的提纯程度最为理想,该方法提取苜蓿花叶病毒的得率为47.6mg/100g昆诺藜鲜病叶,该病毒分离物的外壳蛋白分子量为29kD。该方法的病毒得率较高、杂蛋白较少、病毒粒子完整,是比较理想的提纯方法。     

植物病毒侵染对生态系统中生物因子及其相互作用的影响

植物病毒可以对寄主植物造成危害,也可以对寄主植物增益;植物病毒的侵染可以对节肢动物及其天敌造成生态适应性、生长发育特性和行为特征的改变;植物病毒与介体节肢动物、非介体节肢动物、介体天敌及其他病原微生物间也存在相互作用。对外来物种进行风险评估是预防生物入侵的重要手段,明晰植物病毒侵染对寄主所在生态系统造成影响的各类生物因子及其相互作用关系,是开展植物病毒侵染所造成生态风险评估的研究基础。对植物病毒侵染寄主植株后,对寄主及寄主周边的介体节肢动物、非介体节肢动物、介体天敌,以及病原微生物等各类生物因子的影响及相互作用关系进行了综述,并从入侵生态学及植物病毒生态学的角度,探讨了植物病毒生态学未来的研究方向。以期为植物病毒入侵某一生态系统后所产生的生态风险评估奠定研究基础,并为植物病毒病的防控提供科学依据。     

黄地老虎颗粒体病毒的研究II. 包含体和病毒粒子的分离提纯与形态结构

本文介绍了AsGV-XJ包含体、病毒粒子的提纯方法及其形态结构。提纯的AsGV-XJ包含体在弱碱(0.05M Na2CO3,0.05M NaCl,pH10．8)中,20℃水解2小时,释放出完整的病毒粒子,再经超离心和10—70％蔗糖密度梯度离心可得提纯的病毒。完整的病毒粒子具有双层膜结构,平均大小为310×70nm,核衣壳平均大小为325×45nm。病毒沉降系数为1,400S。并对病毒的紫外吸收特性和保存过程中的形态变化进行了讨论。     

用琼脂双扩散法检测马铃薯卷叶病毒(PLRV)

马铃薯卷叶病毒(PLRV)早已在1916年发现,但由于植株体内病毒的浓度极低,提纯十分困难,使得血清学检测的研究进展很慢。1974年日本Murayama等首次制备了高效价的抗血清,也仅能与提纯的病毒制剂起反应。以后瑞士GugerIi、荷兰Maat等、美国Clarke和Hepp等以及张鹤龄等虽也相继制备出抗血清,但均不能用琼脂双扩散法进行检测,必须将病毒进行提纯或半提纯后才能见到反应沉淀线,使得这种     

植物源病毒抑制剂的研究进展

天然植物提取的活性物质对植物病毒有明显的抑制作用,已经成为当今植物病毒防治的重点。对植物源病毒抑制的活性物质及作用机理的研究现状进行了综述,并将外来入侵生物用以提取病毒抑制剂的相关生物技术提出了展望。     

侵染菠菜的芜菁花叶病毒鉴定

菠菜病毒分离物Ta-1可侵染甘蓝等8科25种植物,但不侵染心叶烟。病汁液和芜菁花叶病毒抗血清呈阳性反应。光学显微镜下观察到受病毒侵染的细胞内有不定形内含体。从超薄切片见到细胞质中有风轮状内含体存在。电镜观察其粒子形态为均一的线状病毒,大小为700—760×10—12.5nm。部分提纯病毒紫外吸收呈典型核蛋白吸收曲线。SDS—PAGE法测得病毒外壳蛋白亚基分子量为35,500。     

流行性乙型脑炎猪肾组织培养疫苗的研究 Ⅰ.病毒的培养和疫苗的制备

为了改进流行性乙型脑炎疫苗的质量,在国内曾进行了乙醚提纯脑炎疫苗,白陶土和硫酸铵提纯病毒及疫苗以及鸡胚组织培养疫苗的研究。我系曾证明以流行性乙型脑炎病毒感染猪后能引起毒血症,其病毒滴度可达10-3.5。因此,在1958年我们开始用猪肾单层细胞来培养流行性乙型脑炎病毒,并进行了猪肾组织培养疫苗的研究。应用这种方法有可能制备出一种安全。     

侵染莜麦的大麦黄矮病毒的分离及提纯

用液氮或低温冷冻染病组织及差速离心和葡聚糖凝胶过滤的方法,提纯了自然侵染莜麦的大麦黄矮病毒(BYDV)。电镜照片中病毒呈多面体结构,大小均一,平均直径为23.66±1.2nm,且聚集较多。将提纯的病毒以三种无毒蚜为介体,经薄膜饲毒法回接到华北二号莜麦上,表明提纯的病毒能引起类似田间病株的症状。     

富含半胱氨酸病毒蛋白的研究进展

病毒编码的富含半胱氨酸的小分子量蛋白(CRPs)在植物和动物病毒中均有发现。动物病毒中研究较多的是反转录病毒的核蛋白(NC)。在植物病毒中由hordei,tobra,furoandcarlaviruses编码的CRPs的分子生物学研究近年来才开展起来。动物和植物病毒的CRPs共有的典型特征是均有锌指结构和碱性氨基酸丰富区,这使它们在核酸结合特性上有共同特征。动物病毒CRPs的结构和功能方面的研究已有很好的进展。相反,植物病毒的CRPs的研究进展较为缓慢。本文对病毒的CRPs的最新进展进行了综述。对动物和植物病毒的CRPs的比较分析有助于将来这类蛋白功能的阐明。