土壤中木霉的分离及其对毒死蜱降解特性研究

为挖掘保护地土壤中的能降解毒死蜱的木霉资源,从长期污染的土壤中共分离6个不同木霉菌株,通过形态学特征和ITS r DNA序列对各菌株进行鉴定,6个菌株分别为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、绿色木霉(T.viride)、康宁木霉(T.koningii)、拟康宁木霉(T.koningiopsis)、长枝木霉(T.longibrachiatum)和短密木霉(T.brevicompactum)。选择降解活性最高的长枝木霉TC5菌株,测定各种条件下对毒死蜱的降解特性。结果表明,木霉TC5在中性或偏碱性条件下对毒死蜱具有更好的降解活性;添加碳源或提高木霉的接种浓度,能提高对毒死蜱的降解活性;在50-300 mg/L范围内,随毒死蜱浓度升高,木霉的降解活性也明显提高。盆栽试验中木霉TC5对毒死蜱保持较强的降解活性,但在自然土壤中降解活性显著低于在灭菌土壤中。分离的木霉菌株在土壤农药污染修复方面具有应用开发潜力。     

作物根围土壤木霉菌物种多样性及其体外拮抗病原菌效应

对采自我国西北地区青海、宁夏、甘肃、陕西和新疆农作物根围土壤中的木霉菌进行分离纯化后,采用形态与分子生物学技术进行菌种鉴定,获得14个木霉种属346个菌株。其中哈茨木霉(Trichoderma harzianum)和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)为优势菌种,分别占总数的35%和30%;其次为长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)占12%;绿木霉(Trichoderma virens)、深绿木霉(Trichoderma atroviride)、拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)和平菇木霉(Trichoderma pleurotum)分别占8%,5%,2%和1%;绿色木霉(Trichoderma viride)/钩状木霉(Trichoderma hamatum)和短密木霉(Trichoderma brevicompactum)/矩孢木霉(Trichoderma oblongisporum)分别皆占2%和1%;渐绿木霉(Trichoderma viridescens)、侧耳木霉(Trichoderma pleuroticola)和康宁木霉(Trichoderma koningii)为我国西北地区农作物根围土壤中最小的木霉种群,各仅占0.3%。将纯化的菌株分别与5个靶标病原真菌在马铃薯葡萄糖培养基(PDA)平板上进行拮抗测试,研究结果表明各木霉菌株对病原菌的拮抗效果有明显差异,且其平均拮抗指数均60%。将2株短密木霉(TR1294TR1295)进行液体发酵培养,并用稀释5倍的发酵液配制PDA平板,对靶标病原真菌进行抑菌测试。结果显示,这5个病原真菌在含有TR1294和TR1295发酵液PDA平板上的生长抑制率可达72%,表明TR1294和TR1295在液体发酵过程中能产生抑菌次级代谢物。     

桃儿七和南山荷叶内生真菌的生物活性研究

通过研究桃儿七(Sinopodophyllum hexandrum)与南方山荷叶(Diphylleia sinensis)的内生真菌的生物活性,探讨内生真菌作为生物活性物质资源开发利用的价值。测定内生真菌发酵液的抗细菌、抗真菌、抗卤虫活性后,发现大多数菌株的发酵液都具有不同的生物活性。高活性菌株集中于镰孢霉属、柱孢属、木霉属、色串孢属。桃儿七内生真菌抗真菌活性较强,南方山荷叶内生真菌抗细菌和抗卤虫活性较强。桃儿七和南方山荷叶内生真菌是寻找有价值的活性成分的良好资源。     

家蝇幼虫血淋巴中抗真菌肽的诱导方法比较及抗真菌活性

以未诱导组作为空白对照研究比较真菌诱导、超声诱导和热诱导家蝇Musca domestica 幼虫血淋巴初提液的抗真菌肽效果,比较各种诱导方法诱导后的幼虫存活率;用凝胶层析法和高效液相分离纯化热诱导家蝇3龄幼虫抗真菌肽,检测其抗白假丝酵母菌Candida albicans和新生隐球菌Cryptococcus neoformans活性;SDS-PAGE分析抗真菌肽的蛋白分子量范围。结果表明：3种诱导方法诱导后家蝇幼虫均产生具有明显抗真菌作用的抗真菌肽,其初提液抑菌圈大小没有明显差别;真菌诱导组和热诱导组幼虫存活率低于对照组,而超声诱导组与对照组相比则无明显差别。经分离纯化后,抗真菌肽仍具有较好的抗真菌活性;SDS-PAGE分析表明该抗真菌肽有效成分的蛋白分子量在14.4 kD以下。结果提示热诱导家蝇幼虫产生抗真菌肽是一种方便、有效的诱导方式。     

设施番茄根围土样中木霉菌多样性及功能活性分析

为探索设施栽培条件下蔬菜根围土壤中木霉种群多样性特征及其抗常见植物病原真菌及有机磷农药降解活性,从连续20多年种植番茄的设施大棚根围土样中以及番茄根系内部分离木霉菌,并以tef1-α序列和系统发育分析进行种类鉴定,估算各菌株的相对种群密度;对其生防和农残降解活性进行了测定。结果共分离不同木霉菌株27株,结合形态学特征和tef1-α序列分析,鉴定出分属6个不同的木霉种,即绿色木霉(Trichoderma virens)、深褐木霉(T.atrobrunneum)、西蒙斯木霉(T.simmonsii)、深绿木霉(T.atroviride)、厚木霉(T.crassum)和1个疑似木霉新种(T.sp.nov.);木霉各菌株产孢簇常呈鲜绿色到暗绿色,分布不均匀,常形成同心圆结构。对峙条件下这些木霉对土壤中常见土传病原菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)均有普遍的不同程度的抑菌活性;除深褐木霉两个菌株对毒死蜱的降解效果不明显外,其它种类的木霉均有菌株能有效降解毒死蜱,木霉菌株在根围土壤中的相对种群密度仅为104 cfu/g,且菌株间差异较大。研究结果表明设施农业土壤中木霉菌具有丰富的种质资源多样性,在形态特征及功能活性方面表现明显的菌株差异;木霉对3种常见植物病原真菌有普遍的抑菌作用,少数菌株对常用有机磷农药降解作用明显,可以发挥生防和农化残留降解方面的协同效应。该结果对于研究设施农业土壤中木霉的多样性,指导功能菌株筛选及应用,更好挖掘利用木霉菌资源有着较好的借鉴意义。     

高产纤维素酶的拟康宁木霉菌株8985固态发酵条件优化

木霉是重要的产纤维素酶真菌,在其可利用性评价筛选过程中,获得了一株在实验室条件下高产纤维素酶的拟康宁木霉菌株8985.采用响应面法对8985产纤维素酶的固态发酵条件进行了研究,以滤纸酶活为响应值,通过Plackett-Burman设计对11个因素进行了筛选,包括温度、湿度、发酵时间、K2HPO4、(NH4)2SO4、T...     

絮凝活性产紫青霉EL-02的分离鉴定及其絮凝活性初探

【目的】分离鉴定有絮凝活性真菌,同时对其絮凝活性进行初步研究。【方法】采用梯度稀释、平板划线、18SrDNA检测等方法分离鉴定絮凝活性菌株。通过高速离心、超声破碎、乙醇沉淀、定性试验等方法确定絮凝活性物质性质。【结果】从渤海湾海岸土壤样品中分离筛选出一株有较高絮凝活性的真菌,经鉴定为产紫青霉(Penicillium purpurogenum),命名为产紫青霉EL-02(P.purpurogenum EL-02)。超声破碎试验证实其絮凝活性主要存在于发酵上清液。根据絮凝活性曲线,确定4d为积累絮凝活性产物的最佳发酵时间。乙醇沉淀法获得该菌株絮凝活性物质。经鉴定该菌株所产絮凝活性物质为糖类,且其活性在pH2-11,温度-70℃-100℃范围内保持稳定。【结论】分离筛选到一株有絮凝活性的产紫青霉EL-02,经鉴定其产生糖类絮凝活性物质。     

无机盐、激素与真菌联合诱导土沉香抗逆能力的研究

为了探究无机盐、激素与真菌联合诱导土沉香(Aquilaria sinensis)抗逆性及其与结香前期木芯变色长度之间的相关关系,以10年生土沉香为材料,采用均匀试验设计,开展了3种无机盐、3种激素及3种真菌组合试验。结果表明:(1)土沉香树体POD和SOD活性和MDA含量呈先升高后降低趋势,CAT活性在诱导后1天最高,随后呈下降趋势;(2)无机盐与真菌处理下土沉香的抗逆能力大于激素与真菌处理,其中无机盐与真菌组合试验的处理4(1.0%CaCl2+0.5%FeSO4+2.0%NaCl+黑绿木霉∶腐皮镰孢∶龙眼焦腐(1∶1∶1))和激素与真菌组合试验的处理2(0.01%茉莉酸甲酯+0.1%乙烯利+0.2%水杨酸钠+黑绿木霉∶腐皮镰孢∶龙眼焦腐(1∶1∶1))分别为同类处理最高;(3)土沉香抗逆能力高低与木芯变色长度存在显著正相关性;(4)理论上,土沉香抗逆能力最强诱导组合分别为0.93%CaCl2+0.53%FeSO4+2.5%NaCl+黑绿木霉∶腐皮镰孢∶龙眼焦腐(1∶1∶1)和0.005%茉莉酸甲酯+0.006%乙烯利+0.2%水杨酸钠+黑绿木霉∶腐皮镰孢∶龙眼焦腐(1∶1∶1)。     

天麻中抗真菌蛋白质的诱导和积累

前曾报告从天麻（Ｇａｔｒｏｄｉａ ｅｌａｔａ Ｂｌ）中分离出一种对木霉丝生长有强抑制作用的蛋白质,命名为天麻抗真菌蛋白,简称ＧＡＦＰ,也称为Ｇａｓｔｒｏｄｉａｎｉｎ。对不同天麻材料来源的ＧＡＦＰ分析表明：ＧＡＦＰ的相对分量为１４ｋＤ,等电点可能不同,变动范围８．１－９．３。体外抑菌试验证明ＧＡＦＰ对腐生性真菌如木霉如木霉和密环菌等有强抑制活性,半抑制浓度ＩＣ０．５为０．０８ｍｇ／ｍＬ;对寄生免疫荧     

漳江口红树林沉积物真菌多样性分析及抗茶叶致病真菌生物活性筛选

以福建漳江口红树林国家级自然保护区红树林沉积物分离的真菌为对象,研究红树林沉积物真菌的多样性和筛选抗茶叶病原真菌活性的菌株。将分离纯化的135株真菌通过形态学和Ribosomal DNA-Internal Transcribed Spacer(rDNAITS)序列测定进行鉴定及多样性分析,归为40个种类型,分别属于17个属,其中青霉属(25%)为优势菌,木霉属(15%)、曲霉属(10%)和镰刀属(10%)次之,表明红树林沉积物真菌具有丰富的多样性;利用平板对峙法对真菌的发酵粗提物抗茶叶病原真菌生物活性研究,结果发现,共有17株(占42.5%)真菌具有抗茶叶病原真菌活性,其中15株能够抑制茶叶轮斑病(Pestalotiopsis theae)LH13,12株能够抑制茶叶炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)LH30,8株能够抑制茶叶溃疡病(Neofusicoccumsp.)LH107,有两株对这三种茶叶致病菌均有较强活性。这些活性菌株分布在6个属中,分别是青霉属(7株)、木霉属(3株)、镰孢属(2株)、枝孢属(2株)、白地霉属(2株)和球腔菌属(1株)。由此可见,红树林沉积物真菌抗菌活性菌株的种属分布具有多样性。     

一株具有拮抗作用的解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及生物学特性研究

本研究以樱桃番茄成熟红果为样本,以极细链格孢菌为指示菌筛选得到一株对番茄采后病原菌有抑制作用的菌株KL-1。通过平板拮抗试验研究了菌株KL-1对番茄采后常见病原真菌极细链格孢菌、黑曲霉、青霉菌、尖侧多隔孢霉、拟康宁木霉、盐生枝孢霉、子囊菌、胶孢炭疽菌等八种病原菌的抑制作用,同时通过形态学、生理生化及16S rDNA分子生物学特征对菌株进行了鉴定,并对其基本生物学特性进行了研究。结果表明:菌株KL-1对于七种病原菌极细链格孢菌、黑曲霉、青霉菌、拟康宁木霉、盐生枝孢霉、子囊菌和胶孢炭疽菌均有明显的抑制作用,其中对黑曲霉的抑制率最大为81%,对其他六种病原菌抑制率也均高于70%,对尖侧多隔孢霉的抑制率为0,说明菌株KL-1可以抑制番茄多种常见病原真菌,具有开发为生防制剂的潜力。经鉴定KL-1为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);该菌培养9 h内生长最旺盛,最适生长pH为7.0,最适生长温度为37℃。     

一株野大豆内生真菌YD02菌株的鉴定及抗逆性研究

从野大豆组织中分离筛选出1株内生真菌菌株YD02,通过形态学观察和分子生物学方法对该菌株进行鉴定;用单因素实验和正交试验确定菌株的最佳发酵条件;采用菌丝干重法和对峙培养法分别测定菌株的抗重金属镉胁迫的能力以及对植物病原菌的影响。结果表明:YD02菌落黑色或墨绿色,菌丝分支且产孢;为链格孢属(Alternaria Nees)菌株;其最佳发酵条件是以PDB培养基为基础,蔗糖4%,氯化铵0.6%,磷酸氢二钾0.4%,硫酸镁0.05%,p H5或p H9,培养温度28℃,装液量为60%,120 r/min发酵60 h;当镉浓度为140 mg/L时,YD02正常生长几乎停止。YD02菌株对瓜果腐霉病和苹果霉心病的病原菌具明显拮抗作用,抑菌率分别达到64.15%和71.68%。     

青蒿内生真菌分离、分子鉴定及深绿木霉对青蒿的促生作用研究

为从青蒿(Artemisia annua L.)内生真菌中筛选有促生作用的菌株,用组织分离法从青蒿侧枝中分离内生真菌并进行分子鉴定,对其中1株真菌深绿木霉对青蒿幼苗的促生作用进行了研究。结果表明,从青蒿侧枝中获得23株内生真菌,鉴定出16种,以炭疽菌属占优势。深绿木霉发酵液对青蒿种子发芽和幼苗生长具有显著抑制作用;深绿木霉液体发酵菌丝体在4-5月对青蒿幼苗生长具有显著的促进作用,但7月以后没有明显促进作用。因此,深绿木霉可作为青蒿苗肥,与化肥配合可施用于成株。     

三株植物促生木霉的固体发酵工艺优化

【背景】木霉是广泛分布于自然界中的一类真菌,能产生多种酶类和次生代谢产物,具有促进植物生长、提高土壤肥力、拮抗多种土传病原菌等作用。【目的】优化3株植物根际促生真菌(长枝木霉MD30、桔绿木霉JS84及贵州木霉NJAU4742)的固体发酵条件,探究不同发酵条件对木霉产孢量的影响,为木霉菌的生产提供参考。【方法】采用单因素试验和响应面法,对3种木霉在不同发酵条件下的产孢量进行测定并优化,分析了氮源添加、初始pH、物料厚度、接种量、温度等因子对固体发酵的影响。【结果】单因素试验表明,长枝木霉MD30、桔绿木霉JS84与贵州木霉NJAU4742固体发酵时,最佳发酵温度均为28℃、最优木霉菌液接种量均为10%、物料发酵厚度均为3.0 cm,但最佳的初始物料pH与氨基酸水解液添加量有所不同,其中,长枝木霉MD30与贵州木霉NJAU4742发酵最佳的初始pH值为5.0,而桔绿木霉JS84为3.0;长枝木霉MD30与贵州木霉NJAU4742发酵最佳的氨基酸水解液添加量为10%,而桔绿木霉JS84为5%。通过试验分析,确定初始pH、物料厚度、温度为影响产孢量的3个重要因素。响应面分析得到最佳发酵条件：...     

毒死蜱降解木霉菌对几种重要植物病原真菌的生防活性

木霉菌既是广泛应用的防治植物病害的生防菌,又是一类很有应用潜力的环境污染修复菌。针对分离筛选出的6株高效降解毒死蜱的木霉菌株,进行了土传植物真菌病害的生防活性试验。结果表明,在对峙培养条件下,供试木霉菌株对几种病原真菌均具有较为显著的抑制率,发酵滤液对多数病原真菌具有明显的抑菌作用。所有供试木霉菌株能在立枯丝核菌、灰霉、终极腐霉菌落上着生,并逐渐覆盖全部菌落;但不能在茄腐镰孢菌、尖孢镰孢菌、大丽轮枝菌上生长。真菌重寄生现象观察结果表明,供试木霉菌仅对立枯丝核菌具有明显的重寄生现象。研究结果表明,筛选出的高效降解毒死蜱的木霉菌菌株可对多种土传植物病原真菌具有良好的生防潜力。     

Screening and identification of a fungal strain affecting hydroxylation of naringin

柚皮苷是中草药枳实、橘红的主要有效成分,用于心血管疾病的防治.为了开发生物法生产柚皮苷的羟基化衍生物,从土壤中分离筛选到一株能转化柚皮苷为3'-羟基柚皮苷和3',5'-二羟基柚皮苷的真菌菌株NT-02.通过对菌株NT-02的形态学观察和ITS序列系统发育分析,构建了系统发育树,NT-02菌株与哈茨木霉(Trichoderma harzianum/Hypocreaum lixii)形成一个类群,且有99％的同源性,初步鉴定真菌NT-02为木霉属(Trichoderma)菌株.     

一株抗肿瘤活性的粗榧内生真菌的鉴定及其产物特性初步研究

利用传统分类学方法、电子显微镜观察、18S rDNA和ITS序列的测定以及系统发育分析对一株分离自粗榧抗肿瘤活性内生真菌HCCB1621进行分类鉴定,并对其产物抗肿瘤活性进行了初步研究．各种指标鉴定其为木霉属真菌绿色木霉（Trichoderma viride Pers．ex Fr）．该菌株经发酵培养120h,抗瘤活性达最强;活性在pH4～9范围内稳定：60℃处理1h,活性稳定,这些特性为活性产物的分离纯化和稳定性研究提供了必要的参考．     

组成型表达chi基因的Bt工程菌株构建及其特性

【目的】通过构建能够组成型高效表达几丁质酶的苏云金芽胞杆菌工程菌株,以提高其抑真菌活性。【方法】首先通过PCR扩增获得Bti75菌株chiB全长及系列缺失启动子片段,与本室构建的启动子探测型载体pCB连接,转化Bti75菌株,通过β-半乳糖苷酶活性检测及β-半乳糖苷酶mRNA的Real time-PCR检测,确定了一段长度为190 bp的组成型高效表达启动子。将这一启动子分别与Bti75自身几丁质酶基因chiA以及地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)的几丁质酶基因chiMY连接构建了组成型高效表达的工程菌株Bti75(pDA)和Bti75(pDM)。应用几丁质酶酶活检测、SDS-PAGE及酶谱分析检测了工程菌几丁质酶的表达情况。最后,通过检测工程菌发酵粗酶液对真菌孢子萌发和菌丝生长的影响,评估了工程菌对3种植物病原真菌的抗真菌活性。【结果】在没有诱导物存在的情况下,Bti75(pBPΔ7)菌株表达的β-半乳糖苷酶酶活和β-半乳糖苷酶mRNA的转录量分别是Bti75(pBP)菌株的7倍和2.5倍左右。在没有几丁质诱导的情况下,与野生株Bti75相比,工程菌株Bti75(pDA)和Bti75(pDM)的几丁质酶活性均提高了3.5倍左右。SDS-PAGE及酶谱分析证明目的几丁质酶在非诱导条件下达到组成型高效表达,抑真菌实验显示工程菌Bti75(pDA)和Bti75(pDM)抑制3种植物病原真菌的活性明显提高。【结论】发现190 bp的缺失启动子能够组成型高效表达不同来源的几丁质酶,无需诱导物的诱导,工程菌株就能展现良好的抗真菌能力。     

霉克舒对致病性浅部真菌的体外抑菌作用研究

从湛江地区 15 4例癣病患者分离真菌 ,评价一种新的抗真菌药—霉克舒对上述真菌菌株的体外抑菌活性。应用琼脂稀释法测定霉克舒对浅部真菌的最小抑菌浓度 (MIC) ,同时以兰美抒作为对照药物。从 15 4例癣病患者中分离出 14 1株真菌 ,其中以红色毛癣菌和须癣毛癣菌为主 ,分别占 6 6 .7%和 14 .2 %。霉克舒的抑菌作用与兰美抒相比略强或相当 ;对霉克舒各单一成分的初步抑菌效果进行比较 ,复合物的抑菌作用明显强于水杨酸或特比萘芬等单一成分。上述结果显示 ,霉克舒在体外对常见致病性浅部真菌具有较强的抗菌活性。     

产紫青霉EL-02的分离鉴定及其絮凝活性

摘要：【目的】分离鉴定有絮凝活性真菌,同时对其絮凝活性进行初步研究。【方法】采用梯度稀释、平板划线、18S rDNA检测等方法分离鉴定絮凝活性菌株。通过高速离心、超声破碎、乙醇沉淀、定性试验等方法确定絮凝活性物质性质。【结果】从渤海湾海岸土壤样品中分离筛选出一株有较高絮凝活性的真菌,经鉴定为产紫青霉（Penicillium purpurogenum）,命名为产紫青霉EL-02（P. purpurogenum EL-02）。超声破碎试验证实其絮凝活性主要存在于发酵上清液。根据絮凝活性曲线,确定4 d为积累絮