阴沟肠杆菌固氮生理的研究

由谷子根表分离到一株阴沟肠杆菌。该菌振荡培养于诱导培养液中,在30℃下21—24小时,其最高乙炔还原速率为576n tool C2H4／mg蛋白／b。而在厌氧条件下则可达1479n motC2H4／mg蛋白／h。在正常氧浓度下,该菌培养4—96小时之间皆可检测出固氮活性。不同浓度的NH+4明显抑制其固氮活性。在碱性条件下固氮活性较高。     

一株阴沟肠杆菌致病性的调查研究

近年,在一次暴发不常见疾病的调查中,从公共生活水源中分离到一株阴沟肠杆菌。经试验认为与该疾病病因有关,但阴沟肠杆菌的致病性目前尚未完全了解。     

外排泵抑制剂对阴沟肠杆菌耐药表型影响

目的探讨主动外排泵在临床分离阴沟肠杆菌多重耐药的作用。方法收集、分离及鉴定阴沟肠杆菌,采用琼脂稀释法测定多重耐药泵抑制剂氰氯苯腙(carbonyl cyanldem-chlorophenylhydrazone,CCCP)应用前后,阴沟肠杆菌对头孢他啶、阿米卡星、阿奇霉素、左氧氟沙星和四环素5种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)的变化。结果以上述5种抗生素为底物8,3株阴沟肠杆菌中,分别有303、61、9、32和28株在10μg/mL CCCP条件下MIC值降低4倍或4倍以上,其中有19株同时对3种及以上抗生素有明显外排作用。外排泵存在于耐药株和非耐药株中,但对耐药株的影响较大。结论主动外排系统广泛存在于临床分离阴沟肠杆菌中,是引起阴沟肠杆菌多重耐药的重要机制。外排泵抑制剂CCCP可增加阴沟肠杆菌对抗菌药物的敏感性。     

CTX-M型阴沟肠杆菌插入序列的检测

目的研究插入序列ISEcp1B及超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamase,ESBLs)、AmpC酶基因在CTX-M型阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae,ECL)中的分布,并分析其与耐药的关系。方法用MIC法分析2株含CTX-M基因的阴沟肠杆菌的耐药性;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增ESBLs、AmpC、ISEcp1B基因及I类整合子,对PCR产物进行DNA测序。结果 2株阴沟肠杆菌对青霉素类、四代头孢菌素、喹诺酮类和呋喃类抗生素耐药,对氨基糖苷类和碳青霉烯类表现为敏感。在ECL15同时检出TEM、CTX-M-G1、ACT-1、I类整合子及ISEcp1B基因;在ECL45同时检出SHV、CTX-M-G1及ISEcp1B基因。ECL45(400 bp)ISEcp1B的右端均连接一个反向重复序列,有-35及-10两个启动子,与CTX-M型ESBLs编码起始距离不相同,与ECL15序列一致,GenBank登录号:EF437434;ECL45(500 bp)无反向重复序列,只有一个-35启动子,与CTX-M型ESBLs编码起始距离不相同,与ECL15序列不相同,GenBank登录号:EF441350。结论在CTX-M型阴沟肠杆菌中检出2种新的插入序列ISEcp1B,其对CTX-M的高水平表达和传播可能起重要的调控作用。     

阴沟肠杆菌对β—内酰胺类抗生素耐药的机制

阴沟肠杆菌对β－内酰胺类抗生素日益严重的耐药引起人们的重视,其耐药机制主要有：外膜微孔蛋白的缺失或减少;细菌产生β－内酰胺酶（ｂｌａ）;细菌的青霉素结合蛋白（ＰＢＰｓ）改变导致其对β－内酰胺类抗生素亲和力下降,其中以细菌产生ｂｌａ为最主要的机制。近年来的研究在阴沟肠杆菌Ｉ型ｂｌａ（即可诱导的染色体介导的ｂｌａ）的基因调控方面取得了突破性进展。     

219株阴沟肠杆菌对16种抗菌药物耐药性的研究

目的：了解阴沟肠杆菌的耐药状况;方法：测定近三年分离的２１９株阴沟肠杆菌对１６种抗生素的耐药率;结果：阴沟肠杆菌具有较高的耐药率及多重耐药性且有耐药率逐年上升趋势,其机制可能与细菌产生β内酰胺酶、外膜微孔蛋白改变及青霉素结合蛋白改变三方面有关     

葛根异黄酮对唾液淀粉酶及阴沟肠杆菌的抑制作用初探

目的：揭示葛根异黄酮降血糖与减肥作用的机理。方法：以乙醇回流提取法分离提取不同地域的野葛和粉葛葛根异黄酮类;AOAC法和高效液相色谱法分析营养成分;以唾液淀粉酶和阴沟肠杆菌构建试验评价体系,用比色法测定葛根提取物（PREE）添加的抑制活性。结果：野葛与粉葛的基本营养没有显著的差异,但异黄酮成分的含量和组成差异显著;PREE对唾液淀粉酶的半抑制浓度（IC50）是031～114mg/mL、对阴沟肠杆菌的IC50为049～056mg/mL。随着PREE浓度的增加,唾液淀粉酶活性减弱,阴沟肠杆菌的增殖速率降低。结论：葛根异黄酮对唾液淀粉酶活性和阴沟肠杆菌的增殖均具有抑制效果,直接影响糖代谢的初始阶段而发挥降血糖、减肥作用。     

阴沟肠杆菌和大肠杆菌的生物化工发酵能力比较研究

本研究通过对Escherichia coli JM109菌株和E.cloacae gxas菌株的碳源利用能力、菌株的生长优势以及胞内发酵产物组成进行了研究。实验结果表明:在碳源利用测试中E.coli JM109结果表现阳性(+)只有8种,阴性(-)有32种,而E.cloacae gxas阳性(+)有38种,阴性(-)只有18种,具有广泛的碳源谱。比较2株菌株的生长曲线发现E.cloacae gxas比E.coli JM109生长快,稳定期具有更高的生物量。GC-MS分析结果显示两个菌株的发酵产物的差异极大,在多尺度面上没有重合点。以大肠杆菌为对照菌株,阴沟肠杆菌的发酵产物中有14 776个化合物的产量比大肠杆菌高,只有7 725个化合物的产量比大肠杆菌低。因而,阴沟肠杆菌在生物化工发酵应用中比大肠杆菌更具潜力优势。     

NDM-1对阴沟肠杆菌的致病性及适应性的影响

产生新德里金属β-内酰胺酶-1 (New delhi metallol-β-lactamase 1,NDM-1)的肠杆菌科细菌对大部分β-内酰胺抗生素耐药,其导致的感染难以治疗。细菌中编码NDM-1基因的获得可能会影响它的致病性和适应性,这可能使产NDM-1的细菌的感染治疗和传播更加复杂。产NDM-1阴沟肠杆菌流行率高,现对阴沟肠杆菌的致病过程以及NDM-1对其致病性和适应性的影响作一概述,为产NDM-1阴沟肠杆菌的感染治疗和传播控制提供应对策略。     

164株阴沟肠杆菌的药物敏感性分析

目的了解阴沟肠杆菌的药物敏感性情况以指导临床合理用药。方法对中山大学附属第一医院近3年分离出的阴沟肠杆菌的标本分布及耐药情况进行回顾性分析。结果共分离出164株阴沟肠杆菌,其对亚胺培南、头孢吡肟、阿米卡星和氧氟沙星的敏感性较高。结论阴沟肠杆菌对3代头孢菌素耐药严重,呈多重耐药性,亚胺培南仍为治疗阴沟肠杆菌严重感染的首选用药。     

阴沟肠杆菌nirL对nirA蛋白激活固氮基因表达的影响

通过基因定位突变的方法,构建色肠杆菌Ｅ２６染色体上基因ｎｉｒＬ突变菌Ｅ１１和Ｅ１２,并对其固氮特性进行分析。结果显示,当细菌在有ＮＡ＾＋４的条件下,ｎｉｒＬ作为固氮基因的负调节因子,可能是通过ｎｉｆＬ蛋白与ｎｉｆＡ蛋白之间的相互作用。形成某种复合物,导致ＮｉｒＡ的失活,从而关闭ｎｉｆ基因的表达。高温条件下（３７℃）,ｎｉｒＬ并不参与对ｎｉｆ基因表达的阻遏作用,但是ｎｉｆＬ的突变影响ＮｉｆＡ激活ｎｉ     

阴沟肠杆菌nifL对nifA蛋白激活固氮基因表达的影响

通过基因定位突变的方法 ,构建了阴沟肠杆菌E2 6染色体上基因nifL突变菌E11和E12 ,并对其固氮特性进行分析。结果显示 ,当细菌在有NH 4 的条件下 ,nifL作为固氮基因的负调节因子 ,可能是通过nifL蛋白与nifA蛋白之间的相互作用 ,形成某种复合物 ,导致NifA的失活 ,从而关闭nif基因的表达。高温条件下 (37℃ ) ,nifL并不参与对nif基因表达的阻遏作用 ,但是nifL的突变影响NifA激活nif基因表达对热的稳定性     

庆大霉素耐药阴沟肠杆菌16S rRNA甲基化酶基因的研究

目的了解庆大霉素耐药阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的分布情况。方法筛选临床分离的庆大霉素耐药的阴沟肠杆菌30株。采用聚合酶链反应（PCR）方法扩增16S rRNA甲基化酶五种相关耐药基因armA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD,PCR产物进行电泳分析和测序,抗菌药物的药物敏感性试验采用纸片扩散法进行,Whonet 5.4软件进行数据分析。结果 30株庆大霉素耐药阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的检出率为56.7%（17/30）,其中30.0%（9/30）检出armA基因、26.7%（8/30）检出rmtB基因,未检出rmtA、rmtC和rmtD基因。30株庆大霉素耐药阴沟肠杆菌对妥布霉素、阿米卡星耐药率分别为93.3%,83.3%;对其他抗菌药物除亚胺培南较敏感外,其余抗菌药物耐药率大于60.0%。结论庆大霉素耐药阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因主要是armA和rmtB基因,碳青霉烯类对该菌有较好体外抗菌活性。     

医院感染阴沟肠杆菌的耐药性及基因型分析

了解中南大学湘雅三医院重症监护病房(ICU)医院感染阴沟肠杆菌的耐药谱及分子流行病学特征,指导临床合理用药。基因分型采用优化反应体系的随机扩增多态性DNA(RAPD)法,耐药分析选用K-B法。RAPD分型将28株阴沟肠杆菌分为11种株型,耐药谱则将其分为12种不同的耐药型。基因分型和耐药分析显示ICU有多重耐药的阴沟肠杆菌株爆发流行现象,它为控制阴沟肠杆菌的医院内感染、追踪传染原、切断传播途径提供遗传学信息,指导临床医生选用敏感有效的抗生素。     

院内感染阴沟肠杆菌的分布及耐药性分析

随着抗生素的广泛使用,带来了严重的细菌耐药性问题。阴沟肠杆菌作为一种条件致病菌可致人体多部位感染,由于其感染率高和耐药率高,越来越引起人们的重视。我们从１９９４年６月～１９９７年６月院内感染的患者的各种标本中分离出３１０株阴沟肠杆菌,测定了对１７种抗...     

阴沟肠杆菌感染的临床分布及耐药性变迁

目的:分析阴沟肠杆菌感染的临床分布及耐药性变迁,为临床合理用药提供指导。方法:采用临床微生物指南中的常规方法对医院各类标本进行分离培养,对医院近3年阴沟肠杆菌感染的临床分布及耐药性变迁情况进行总结分析。结果:2009年12月~2011年12月,从临床标本中共分离出165株阴沟肠杆菌,菌株的主要来源为痰液、尿液和其他分泌物,分别占50.3%、32.7%和27%;临床药物敏感试验结果显示,阴沟肠杆菌对头孢菌素类、青霉素类、氯霉素和氨基糖苷类的抗菌药物呈现较高的耐药率,对亚胺培南、头孢吡肟比较敏感,而头孢西丁、氨苄西林及头孢唑林对阴沟肠杆菌无效。结论:阴沟肠杆菌主要导致呼吸道和尿路感染,是一种对多种抗菌素耐药的高耐药性细菌,临床医生应结合临床药敏结果合理地选用抗菌药物,以减少耐药菌株的产生和蔓延。     

产AmpC酶阴沟肠杆菌的基因分析及其耐药性

探讨昆明地区阴沟肠杆菌的耐药性及与结构基因ampC和调节基因ampD的相关性。通过K-B法检测阴沟肠杆菌的药敏情况,头孢西丁三维试验检测AmpC酶,PCR法扩增ampC和ampD基因。结果显示74株阴沟肠杆菌经头孢西丁三维试验检测,产AmpC酶的有17株,检出率为22.3%,而且产酶菌株抗生素敏感率低于非产酶菌株。ampC基因扩增阳性率为89.2%(66/74);64株ampD基因阳性率为86.5%(64/74)。实验证实昆明地区产酶阴沟肠杆菌耐药状况严重,与结构基因ampC和调节基因ampD密切相关。     

路德维希肠杆菌噬菌体的分离及生物学特性

【背景】噬菌体能够特异性杀死宿主细菌,特别是耐药性细菌,可以作为新型杀菌剂,而关于路德维希肠杆菌噬菌体的研究尚属空白。【目的】分离路德维希肠杆菌噬菌体,并对其生物学特性进行研究。【方法】通过双层平板法分离、纯化、鉴定噬菌体;通过SDS-PAGE电泳分析结构蛋白;通过透射电子显微镜分析噬菌体的形态;通过结晶紫染色法和刚果红平板法分析生物被膜。【结果】以路德维希肠杆菌X20为指示菌从环境样品中分离获得了噬菌体GM20,噬菌斑透明且有较小晕环,直径大小平均为0.47 mm。透射电镜观察显示,噬菌体GM20具有可伸缩尾部,属于肌尾噬菌体科(Myoviridae)。GM20的滴度为7.65×10~9PFU/mL,为烈性噬菌体。一步生长曲线结果显示,噬菌体的潜伏期约为15 min,释放量约为164.3 PFU/infection center。进一步分析显示,GM20具有较好的抑菌效果,耐噬菌体菌株突变株平均突变率为1.06×10~(-5)。【结论】烈性噬菌体GM20能够杀死路德维希肠杆菌X20,有可能应用于路德维希肠杆菌感染的预防与控制。     

阴沟肠杆菌临床分离与耐药性的6年监测

目的了解2000年至2005年阴沟肠杆菌在临床标本中的分离情况及其耐药趋势,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法回顾分析2000年至2005年间所有标本中阴沟肠杆菌的分离率,菌株在标本和病区的分布及对13种抗菌药物的耐药率。结果阴沟肠杆菌的分离率有逐年升高的趋势,从2000年的0.47%增至2005的0.69%;其在呼吸道标本的分离率最高(67.80%),其次是尿液(14.39%)、血液(9.28%);病区以重症监护室最高(29.92%),阴沟肠杆菌对13种抗菌药物的耐药率,2000年仅氨苄西林、妥布霉素、庆大霉素>50%,而到2005年13种抗菌药物除亚胺培南外的耐药率均>50%;其耐药率均呈递增的趋势,以2003年的耐药率最高。耐药率增幅列前3位分别为:头孢他啶33.8%~72.8%、氨曲南41.9%~80.2%、哌拉西林/他唑巴坦48.4%~81.5%。结论阴沟肠杆菌的临床分离率在逐年增加,对多数抗菌药物有较高的耐药性,且耐药率呈整体上升趋势,尤其出现耐亚胺培南的耐药株,应引起重视,合理使用抗菌药物以降低耐药性已经非常重要。