PTEN通过抑制PI3K-AKT信号通路上调Rad51基因的表达

前期研究发现pten缺陷细胞的自发DNA双链断裂损伤水平显著增加.本研究探讨了抑癌基因pten对参与DNA同源重组修复的rad51基因表达的影响和机制．用实时定量PCR技术检测了PTEN野生型和缺陷型细胞rad51的表达水平.结果发现,PTEN缺失会导致rad51的表达降低．PI3K激酶为PTEN的下游负调节靶分子,使用PI3K激酶抑制剂LY294002处理缺陷型细胞后,其rad51表达升高．在PTEN野生型细胞中分别转染Flag-Akt WT（野生型）和Flag-Akt AC（组成型激活）,或在PTEN缺陷型细胞中分别转染野生型PTEN和Akt-DN（失去激酶活性的Akt）. 利用RT-PCR技术检测上述细胞rad51的表达水平,同时利用Western印迹检测上述细胞RAD51蛋白的表达水平.结果发现,转染Flag-Akt WT和Flag-Akt AC后,均能促使PTEN野生型细胞中rad51在mRNA和蛋白水平降低;在PTEN缺陷型细胞中转染野生型PTEN或Akt-DN后,rad51在mRNA和蛋白水平均升高．在PTEN缺陷型细胞中使用siRNA沉默akt后,同样导致RAD51表达升高．结果提示,PTEN可以正向调节RAD51基因表达,PI3K/Akt是其信号通路机制之一．     

miR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控胶质瘤细胞的增殖

探讨miR-21对胶质瘤细胞U87中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路相关影响作用研究。脂质体Lipofectamine~(TM)2000将miR-21 inhibitor和miR-21 NC转入U87细胞中,48 h后,RT-PCR检测miR-21表达,MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡情况,Western blotting检测PTEN/PI3K/AKT激活情况及程序性细胞死亡因子4(PDCD4),Bax及Bcl-2的表达。与miR-21 NC组比较,miR-21 inhibitor组miR-21表达量显著降低,U87细胞活力下降,细胞凋亡率提高,PI3K、Bcl-2及p-AKT表达量下调,PTEN、PDCD4及Bax表达量上调,差异均具有统计学意义(p0.01)。miR-21inhibitor能显著的抑制U87细胞的增殖,与PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。     

NEAT1通过PI3K/AKT/Bcl-2信号通路抑制骨质疏松

为探讨NEAT1在骨质疏松症中的作用以及可能的病理机制,本研究通过建立卵巢去势和鼠尾悬挂2种骨质疏松的小鼠模型,将C57BL/6分为假手术组(Sham组)、OVX组和TS组;经过PCR测定小鼠NEAT1的表达;Elisa法检测小鼠E2、ALP和TRACP水平;Western blotting检测细胞凋亡因子PI3K/AKT/Bcl-2的蛋白水平。结果显示,建模4周后,3组小鼠体重没有显著变化;与Sham组相比,OVX组和TS组小鼠的骨密度值显著降低,骨生化指标ALP和TRACR水平明显升高;OVX组小鼠的E2水平与Sham组相比明显降低;与Sham组相比,OVX组和TS组小鼠的NEAT1表达显著下调;与Sham组相比,OVX组和TS组小鼠p-AKT和Bcl-2蛋白水平明显降低。本研究结果表明,NEAT1可能通过抑制PI3K/AKT/Bcl-2细胞凋亡途径诱导骨质疏松。     

RP4 通过miR-183-5p.1上调FOXO1抑制乳腺癌细胞增殖

近年来,越来越多的证据表明,长非编码RNAs在肿瘤发生发展中发挥重要作用。位于12号染色体的长非编码RNA RP4-816N1.7（简称RP4）在乳腺癌细胞中的作用未见报道。我们通过实时荧光定量PCR证实,RP4在乳腺癌细胞中的表达量普遍低于其在正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达量。RP4在MCF-7和MDA-MB-231中表达量分别比其在MCF-10A中的表达量下调21.57%和91.33%。过表达RP4可明显抑制乳腺癌细胞增殖。敲低RP4可显著增加乳腺癌细胞的增殖能力。生物信息学预测,RP4可能与miR-183-5p.1结合,且叉头蛋白O1(FOXO1)可能是miR-183-5p.1的潜在靶标。实时荧光定量PCR结果提示,RP4可下调miR-183-5p.1,而miR-183-5p.1也可下调RP4和FOXO1的表达。双荧光素酶报告基因结果证实,miR-183-5p.1可与RP4结合,下调其表达,也能与FOXO1 3′UTR结合,抑制其mRNA和蛋白质水平的表达量。最后,本文通过BrdU实验证实,RP4通过FOXO1抑制乳腺癌细胞的增殖。总之,RP4通过内源性结合miR-183-5p.1,上调FOXO1表达,进而抑制乳腺癌细胞增殖。     

lncRNA BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移

目的:研究长链非编码RNA BLACAT1在非小细胞肺癌发生和转移过程中的作用机制。方法:starBase软件分析TCGA数据库中肺腺癌及肺鳞癌与癌旁组织之间BLACAT1表达差异;qRT-PCR检测人非小细胞肺癌细胞A549、HCC827、NCI-H1299、NCI-H23和正常肺上皮细胞BEAS-2B中BLACAT1的转录水平差异,筛选BLACAT1高表达非小细胞肺癌细胞系;CCK-8检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;starBase软件预测BLACAT1作用的miRNA,采用qRT-PCR验证敲低BLACAT1对预测miRNA表达的影响,筛选与BLACAT1相互作用的miRNA,双萤光素酶报告基因实验验证结果;CCK-8检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western印迹检测非小细胞肺癌细胞转移相关基因的蛋白表达水平。结果:肺腺癌及肺鳞癌组织中BLACAT1表达量显著高于癌旁组织;非小细胞肺癌细胞A549的BLACAT1表达量最高;敲低BLACAT1降低A549细胞活力、迁移和侵袭能力;BLACAT1作为海绵吸附miR-374b-5p;敲低BLACAT1增加miR-374b-5p的表达,抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论:BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移。     

长非编码 RNA ILF3-AS1 通过调控 miR-130a-3p/PTEN轴抑制宫颈癌细胞的增殖

ILF3反义 RNA 1(ILF3 antisense RNA 1,ILF3-AS1)是一条定位于染色体 19p13.2的lncRNA,它是白介素增强子结合因子3(interleukin enhancer binding factor 3,ILF3)的反义 RNA.ILF3-AS1在多种肿瘤发生发展中发挥关键作用,但其...     

上调miR-200c通过抑制TGF-β1/Smad3通路减轻单侧输尿管梗阻小鼠肾纤维化

目的观察mi R-200c在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾组织中的表达变化及其对UUO小鼠肾间质纤维化和TGF-β1/Smad3通路的影响。方法 45只C57BL/6J小鼠,随机数字表法分为假UUO组、UUO组、UUO+agomi R-200c组,每组15只。假UUO组仅游离左侧输尿管但不结扎;UUO组和UUO+agomi R-200c组通过结扎左侧输尿管建立的肾纤维化模型,手术后第1、7、14d两组小鼠分别给予生理盐水和agomir-200c尾静脉注射。第21d后处死全部小鼠,取血测定血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)。取小鼠梗阻侧肾脏组织,HE染色和Masson染色评价肾小管间质损伤和肾间质纤维化损伤程度,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测肾组织mi R-200c的表达,Western blotting检测肾组织TGF-β1、Smad3及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达。结果与假UUO组比较,UUO组小鼠肾组织mi R-200c的表达水平明显降低,血清Scr、BUN水平明显升高,肾小管间质损伤病理评分升高,肾胶原容积分数(c VF)增加,肾组织中TGF-β1、Smad3及α-SMA水平明显升高。与UUO组比较,UUO+agomi R-200c组小鼠肾组织mi R-200c的表达明显增高,血清Scr、BUN水平明显降低,肾小管间质损伤病理评分下降,肾胶原容积分数减少,肾组织中TGF-β1、Smad3及α-SMA水平明显降低。结论上调mi R-200c能够通过抑制TGF-β1/Smad3通路减轻UUO小鼠肾间质纤维化。     

姜黄素对食管癌Ec109细胞增殖和PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的:观察姜黄素对食管癌Ec109细胞增殖的抑制作用及肿瘤抑制基因/磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:体外培养人食管癌Ec109细胞,不同浓度姜黄素作用后,MTT法检测其对Ec109细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法分析肿瘤抑制基因(PTEN)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶-3(GSK3β)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)蛋白的表达情况。结果:MTT检测结果显示姜黄素能显著抑制Ec109细胞的增殖,且呈明显的剂量和时间效应关系;透射电镜观察发现姜黄素能诱导Ec109细胞发生凋亡;流式细胞仪分析显示随药物浓度的增加,Ec109细胞凋亡率明显升高;Western blot结果表明姜黄素可增强细胞中PTEN、GSK3β和Caspase 3的表达,抑制Akt的表达。结论:姜黄素通过上调PTEN、GSK3β和Caspase 3的表达,抑制PI3K/Akt信号通路,从而抑制食管癌Ec109细胞增殖。     

羽扇豆醇通过抑制RhoA-ROCK1信号通路抑制结肠癌细胞增殖

该文探讨了羽扇豆醇(Lupeol)对人结肠癌HCT116和SW620细胞增殖的影响及相关作用机制。使用不同浓度的Lupeol处理HCT116和SW620细胞后,用MTT法检测细胞活性,CCK8法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blot检测相应mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光检测β-Catenin蛋白细胞内分布情况。通过构建shRNA敲低两种结肠癌细胞中RhoA,进一步研究Lupeol影响细胞增殖的分子机制。结果显示,Lupeol处理后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显下降,克隆形成能力受到抑制,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞内RhoA、ROCK1、β-Catenin、Cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平均显著下降,β-Catenin蛋白胞质和胞膜上分布减少。敲低RhoA后抑制了细胞增殖,同时使得RhoA-ROCK1-β-Catenin信号通路蛋白受到抑制,β-Catenin蛋白胞质和胞膜上分布减少。综上所述,Lupeol可通过抑制RhoA-ROCK1信号通路,抑制β-Catenin蛋白表达,进而抑制HCT116和SW620细胞增殖,Lupeol有望成为临床结肠癌治疗的新药物。     

PI3K/p110β和PTEN在前列腺癌中的表达及意义

[目的]探讨磷脂酰肌醇3-激酶亚单位p110β(PI3K/p110β)和PTEN基因在前列腺癌中的表达.[方法]收集绵阳市中心医院2016年1月～2020年1月经手术切除的前列腺癌标本80例,取新鲜癌组织及癌旁组织作为实验样本.用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测癌及癌旁组织PI3K/p110β及PTEN基因相对...     

促卵泡激素结合片段通过PI3K/Akt-cyclinD1通路抑制卵巢癌细胞增殖活性

目的:研究促卵泡激素（FSH）结合片段对卵巢上皮性细胞癌细胞株hey增殖活性的影响。方法:应用卵巢上皮性细胞癌细胞株hey作为实验对象,分别加入FSH、FSH结合片段、FSH+FSH结合片段。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测卵巢癌hey细胞的生长状况,Western blot检测cyclinD1、Akt、pAkt分子的表达。结果:FSH对卵巢癌hey细胞的生长有明显的促进作用,细胞生长活性提高21%。FSH结合片段对卵巢癌细胞的生长有明显抑制作用,对细胞平均抑制率为22%,且能下调cyclinDI的表达,在2.5×10^-9Mol/L达70%。FSH结合片段对FSH有竞争抑制作用,细胞抑制率为18%,能抑制FSH上调cyclinD1的作用,抑制率为61%。FSH能上调pAkt的表达,对Akt的表达没有明显影响,在40mIU/ml的浓度时pAkt/Akt上调率达224%。FSH结合片段对Akt的表达没有明显影响,但能明显下调pAkt的表达,且呈时间依赖性（在1 5分钟时达66%）和剂量依赖性(在2.5×10^-9Mol/L达31%)。FSH结合片段能抑制FSH上调pAkt的作用,抑制率为80%。结论:FSH结合片段可通过抑制FSH诱导的PI3K/Akt-cycl-inD1信号通路进而抑制上皮性卵巢癌hey细胞的增殖活性。     

木犀草素通过抑制PTEN PI3K-AKT信号通路以及对免疫功能的调节作用介导对肺癌模型大鼠的干预研究

探讨木犀草素对肺癌模型大鼠的干预作用及其对PTEN-PI3K-AKT信号通路的抑制作用和对免疫功能的影响。采用灌注致癌碘油液制备大鼠肺癌模型,分别给予木犀草素高、中、低剂量和环磷酰胺治疗16周后进行大鼠的一般情况、肺组织病理形态学和肺脏指数、脾脏指数变化的评价。酶联免疫吸附法检测各组大鼠EGF、TGF-β、VEGF的表达。流式细胞术检测各组大鼠T淋巴细胞群(CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+)水平。实时荧光定量PCR法检测各组大鼠AKT-1、CyclinD1、NF-κB mRNA的表达。Western blot法检测各组大鼠PTEN、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达。结果表明木犀草素可显著改善肺癌大鼠肺组织病理情况,提高脾指数,降低肺指数,提高血CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平,降低CD8~+水平,显著降低肺组织中EGF、TGF-β、VEGF的表达及AKT-1、CyclinD1、NF-κB mRNA的表达水平,提高肺组织中PTEN蛋白的表达,降低P-PI3K、p-AKT蛋白表达水平。木犀草素可显著抑制肺癌的增殖和转移,其机制可能与促进免疫器官的发育和分化,促进T淋巴细胞亚群的功能,提高机体免疫功能和下调PI3K/AKT信号通路的活性来发挥作用的。     

脂肪酸合酶与PTEN/PI3K/AKT信号通路

脂肪酸从头合成的增加是肿瘤脂代谢改变的一个重要方面,脂肪酸合酶(FASN)是脂肪酸从头合成的关键酶,该酶在众多类型肿瘤中均有异常的高表达,但其原因尚不是十分清楚。PTEN/PI3K/AKT信号通路是研究较多的信号通路之一,我们对其有较多认识。本文通过综述PTEN/PI3K/AKT信号通路与脂肪酸合酶的调节关系,为探究肿瘤脂代谢的机制以及寻找抗癌药物提供线索。     

SHIP2通过抑制PI3-K/Akt信号通路降低胰岛素敏感性

含SH2结构域的肌醇多磷酸5'-磷酸酶-2(Srchomology 2 domain containing insitol polyphos-phate5'-phosphatase2,SHIP2)负向调节磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B依赖的胰岛素信号通路,降低胰岛素敏感性。SHIP2基因的变异能显著改变胰岛素敏感性。抑制内源性SHIP2蛋白或其基因表达,能够提高胰岛素敏感性,从而改善胰岛素抵抗,有可能成为研究胰岛素抵抗相关疾病发病机制和治疗药物开发的新途径。     

miR-191靶向BDNF基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进猪未成熟支持细胞增殖

睾丸支持细胞数量是影响精子生成能力的主要因素之一,micro RNA (miRNA)参与调控猪未成熟支持细胞的发育过程,然而,大多数被鉴定出的miRNA对支持细胞的作用及其机制尚不明确。基于本课题组前期高内涵筛选结果,本文进一步通过流式细胞术、蛋白免疫印迹和双荧光素酶报告基因等方法,研究了miR-191调控猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的作用机理。结果表明:过表达miR-191显著促进细胞周期由G1期进入S期和G2期,细胞增殖能力显著增强,细胞凋亡率显著降低;而抑制表达miR-191则与之相反。双荧光素酶报告基因系统验证miR-191直接靶向BDNF基因3′-UTR。抑制表达BDNF基因促进细胞周期进入S期,并促进细胞增殖而抑制细胞凋亡,与过表达miR-191的作用一致。共转染试验结果显示,BDNF基因可以拮抗miR-191对细胞增殖和凋亡的调控作用。此外,过表达miR-191和抑制表达BDNF基因均可显著促进PI3K/AKT信号通路中关键蛋白PI3K和AKT的磷酸化水平,且BDNF基因同样拮抗miR-191对PI3K和AKT蛋白的调控作用。本研究结果证实miR-191靶向BDNF基因,通过激活PI3K/AKT信号通路促进猪未成熟支持细胞增殖且抑制其凋亡,为进一步解析miR-191调控猪精子生成的生物学功能提供了理论基础。     

HepaCAM通过Wnt/β-catenin信号通路抑制膀胱癌细胞T24的增殖

该研究探讨了肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,Hepa CAM)对膀胱癌细胞T24增殖的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。T24细胞做空白处理、空载腺病毒(Ad-GFP)处理和Hepa CAM过表达腺病毒(Ad-GFP-Hepa CAM)处理,CCK-8法检测Hepa CAM对细胞增殖的影响,q RT-PCR和Western blot法检测Hepa CAM对β-catenin、c-Myc和cyclin D1的m RNA和蛋白表达水平的影响。采用Wnt/β-catenin信号通路激活剂Li Cl处理T24细胞,MTT法检测细胞增殖能力,Western blot检测GSK3β(try216)磷酸化水平及β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白水平,克隆形成试验检测细胞的克隆形成能力。结果显示,过表达Hepa CAM后,能够抑制T24细胞的生长,下调β-catenin、c-Myc及cyclin D1的m RNA和蛋白的表达水平。5,10,20μmol/L的Li Cl作用细胞2 h后,均可促进T24细胞的增殖。10μmol/L的Li Cl作用2 h后能够降低GSK3β的磷酸化水平,促进Wnt信号通路的活化。10μmol/L的Li Cl与Ad-GFP-Hepa CAM联合处理细胞后,能够逆转Hepa CAM对β-catenin、c-Myc及cyclin D1蛋白水平和细胞增殖的抑制作用。该研究表明,Hepa CAM可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制膀胱癌细胞T24的增殖。     

miR-199a-3p/Nme2在TGF-β1信号通路中的作用分析

通过microRNA芯片技术在小鼠GC-1 spg细胞中筛选发现microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)受转化生长因子TGF-β1调节。为了进一步探讨二者的关系,通过基因克隆与载体构建技术、双荧光素酶报告基因检测及定量PCR实验,发现miR-199a-3p靶向识别肿瘤转移抑制基因2(Nme2)的3'非编码区(UTR)序列,且正向调控Nme2的表达。利用TGF-β1处理GC-1 spg细胞后,结果显示Nme2和miR-199a-3p在mRNA水平的表达均显著上调;进一步将miR-199a-3p和TGF-β1双重作用于GC-1 spg细胞后,结果表明Nme2的表达会明显增强,而且在TGF-β1通路中,miR-199a-3p被抑制的部分功能可能会被Nme2补偿。综上,miR-199a-3p对Nme2基因具有直接靶向识别和调控作用,且在参与TGF-β1信号通路的生物学效应中,二者在功能上相互关联。     

miR-26a通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制食管癌发生发展

目的 探讨miR-26a在裸鼠体内对食管癌发生发展以及调控Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 在45对手术切除并经病理检查证实食管鳞癌组织和正常癌旁组织配对样本中,用RT-PCR检测miR-26a的表达,通过慢病毒干扰技术在食管癌细胞株中干扰miR-26a和过表达miR-26a,并将在裸鼠荷瘤实验中观察肿瘤...     

miR-27b通过靶向FZD7和Wnt信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖

为了揭示microRNA-27b (miR-27b)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)细胞增殖中的作用及其潜在的分子机制。本研究通过MTT测定检测细胞增殖,通过qRT-PCR检测miR-27b和Frizzled7 (FZD7)的mRNA表达水平,通过蛋白质印迹分析检测FZD7的蛋白表达水平,使用荧光素酶报告基因测定法测定miR-27b和FZD7之间的关系以及Wnt信号通路的活性。研究显示,与对照相比,OSCC细胞系中miR-27b的表达显著降低(p0.05)。miR-27b的过表达显著抑制OSCC细胞增殖(p0.05)。miR-27b可以靶向和抑制FZD7的表达(p0.05)并降低Wnt信号通路的活性。miR-27b可通过抑制FZD7和Wnt信号通路来抑制OSCC细胞增殖。因此,我们的研究结论初步表明,miR-27b的低表达可能有助于OSCC的肿瘤发生,其有望成为OSCC的新型分子治疗靶标。     

5-氟尿嘧啶通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制骨髓基质细胞增殖

该研究探讨了5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)抑制人骨髓基质细胞HS-5增殖的可能机制,寻找改善化疗药物对骨髓基质细胞损伤的治疗靶点。实验分3组,对照组:常规培养; 5-FU组:常规培养基础上加入25μg/mL 5-FU;氯化锂(LiCl)+5-FU组:10 mmol/L LiCl预处理细胞, 6 h后加入25μg/mL 5-FU,各组培养48 h。EdU检测HS-5细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期, Western blot检测β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达, DCFH-DA荧光法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平, Western blot检测缝隙连接蛋白Cx43表达。与对照组相比, 5-FU组HS-5细胞增殖能力下降,细胞阻滞在G0/G1期,胞内ROS水平显著升高,β-catenin、 Cyclin D1、C-myc、Cx43蛋白表达下调。与5-FU组相比, LiCl+5-FU组HS-5细胞增殖能力回升,细胞G1期阻滞减轻,胞内ROS水平降低,β-catenin、Cyclin D1、C-myc、Cx43蛋白表达上调。5-FU可通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制HS-5细胞增殖,其作用机制可能与5-FU诱导细胞发生氧化应激,下调细胞间隙连接蛋白Cx43表达有关。