灰树花多糖对乳腺癌细胞MCF-7的凋亡作用

采用MTT法测定不同给药浓度的灰树花多糖(PGF) (1、10、20、50、100和200 μg/mL)在24、48和72 h对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制率,并采用Hoechst染色与流式细胞技术观察20、50和100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7的凋亡情况,同时采用Western blotting对20、50、100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7细胞中Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平进行检测。研究发现PGF给药24、48和72 h后对MCF-7的增殖均有显著的抑制作用。随着PGF给药浓度增加,MCF-7细胞核裂解增多,细胞凋亡数量增多。PGF 20、50和100 μg/mL给药对MCF-7细胞Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平可见显著性差异。     

miR-421促进人结肠癌HCT-8细胞恶性生物学行为和顺铂耐药机制探究

[目的]探讨miR-421促进人结肠癌HCT-8细胞恶性生物学行为和顺铂耐药的机制。[方法]RT-PCR法检测18例结肠癌和癌旁组织中miR-421和HIF-1αmRNA水平;体外培养HCT-8细胞,对照组细胞不进行处理,miR-421 inhibitor组将miR-421 inhibitor转染到HCT-8细胞,顺铂组用终浓度5 mg/L的顺铂干预HCT-8细胞,联合组将miR-421 inhibitor转染到HCT-8细胞后用终浓度5 mg/L的顺铂干预HCT-8细胞。48 h后采用MTT法、流式细胞法和Transwell法分别检测HCT-8细胞增殖率、细胞凋亡率和侵袭细胞数,采用RT-PCR法检测HCT-8细胞中miR-421和HIF-1αmRNA水平,同时应用Western Blot法检测HCT-8细胞中HIF-1α、E-cadherin、N-cadherin和Caspase-3蛋白水平。[结果]结肠癌组织miR-421和HIF-1αmRNA表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);转染miR-421 inhibitor或用顺铂干预细胞后均能降低细胞中miR-421和HIF...     

臭椿酮抑制急性骨髓性白血病细胞恶性生物学行为的研究

为了探讨臭椿酮(ailanthone,AIL)对急性骨髓性白血病(acute myelogenous leukemia,AML)细胞恶性生物学行为的影响,用不同浓度(0.2、0.4、0.8、1.6、3.2μmol·L^-1)的AIL处理对数生长期的HL-60细胞,将miR-449a mimic质粒、mimic对照质粒、miR-449a inhibitor质粒、inhibitor对照质粒分别转染至未经任何处理的HL-60细胞,并用1.0μmol·L^-1浓度的AIL处理细胞24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖水平,细胞划痕实验检测细胞迁移水平,Transwell小室法检测细胞侵袭水平,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平,qRT-PCR法检测miR-449a mRNA表达水平,Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达水平。结果显示,AIL干预后HL-60细胞增殖抑制率、凋亡率升高,细胞迁移率及细胞侵袭数降低(P<...     

IFITM3在脓毒症模型及胆碱能抗炎模型中的表达

目的:探讨干扰素诱导的跨膜转运蛋白3(IFITM3)在LPS刺激的RAW264.7细胞系的脓毒症模型中的表达以及胆碱能抗炎模型中的表达。方法:用1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞24、48、72 h后,用Western-Blot法检测各组细胞IFITM3蛋白表达水平。用1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞后,给予50μM胆碱能受体激动剂GTS-21以及同时给予100 n M胆碱能受体拮抗剂α-BGT刺激细胞24 h后,用Western-Blot法检测各组细胞IFITM3蛋白表达水平。用ELISA法检测IL-1β的方法验证脓毒症模型和胆碱能抗炎模型的建立。结果:(1)1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞后,IFITM3蛋白表达明显降低(P0.01)。(2)1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞后再给予50μM GTS-21,IFITM3蛋白表达明显升高(P0.001);而给予100 nMα-BGT后,IFITM3蛋白表达明显降低(P0.001)。结论:LPS刺激的RAW264.7细胞IFITM3蛋白表达降低。给予胆碱能激动剂GTS-21后能够逆转LPS诱导的IFITM3表达的降低,给予胆碱能受体拮抗剂α-BGT则能阻断这种现象。IFITM3有可能在脓毒症中发挥保护作用,并且参与了胆碱能抗炎通路抗炎过程的调节。     

脱氧胆酸钠对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨脱氧胆酸钠(SD)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。方法:(1)以不同终浓度(0、0.015mg/mL、0.05 mg/mL、0.15 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL)的脱氧胆酸钠分别作用于人脐静脉血管内皮细胞,使用CCK-8检测细胞活力、TUNEL荧光染色检测细胞凋亡;(2)以终浓度为0.15 mg/mL的SD作用于HUVEC4、8、12 h后用Western blot检测Caspase-3、7、9蛋白及PARP活化情况;(3)观察Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对0.15 mg/mL脱氧胆酸钠组的影响。结果:CCK8结果显示随SD浓度(0~1.0 mg/mL)及作用时间(0~12 h)增加,HUVEC活力降低,0.15 mg/mL时活力为80%,1.0 mg/mL时细胞活力仅不到10%;Tunel检测示随着SD浓度的增加HUVEC凋亡明显增多;Western Blot结果示SD作用于HUVEC后Caspase-3、7、9蛋白及PARP活化明显增加;Z-DEVD-FMK明显抑制了0.15 mg/mLSD引起的PARP活化。结论:脱氧胆酸钠(SD)通过启动Caspase级联反应介导了人脐静脉内皮细胞的凋亡。     

丙丁酚对oxLDL诱导血管内皮细胞增殖抑制的保护作用

目的:探讨丙丁酚(普罗布考)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用,以及时NF-κB和Iκ B-α表达的调节作用.方法:MTT法分别检测oxLDL不同浓度(1 g/ml、10 g/ml、100 g/ml)处理HUVEC不同时间(12h、24h、48h)细胞增殖情况;5 g/mL丙丁酚预处理HUVEC 24小时,MTT检测细胞增殖情况;western blot检测oxLDL处理细胞及丙丁酚预处理后NF-κB和Iκ B-α蛋白表达水平.结果:oxLDL处理HUVEC细胞24小时后,对细胞增殖具有抑制作用,Western blot结果显示NF-κB表达显著上调,Iκ B-α蛋白表达下调.而用5ug/mL丙丁酚预处理可以明显缓解细胞增殖抑制,NF-K B和Ig B-a蛋白的表达也恢复至正常水平.结论:丙丁酚可显著缓解oxLDL诱导的HUVEC细胞增殖抑制,并且NF-κ B和Iκ B-α表达的改变可能参与此过程.     

小檗碱通过抑制经典的NLRP3炎症小体活化通路来下调LPS诱导的HUVEC炎症反应*

目的:探讨小檗碱(Berberine, Ber)对脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(Human Umbilical VeinEndothelial Cells, HUVEC)炎症反应的抑制作用及相关机制。方法:MTT法检测不同浓度的Ber对HUVEC存活率的影响。以0.05μg/mL LPS刺激HUVEC建立炎症反应模型,并分别给予1.25、2.5、5μM Ber干预,Elisa检测Ber对炎症因子TNF-α、IL-1β分泌的影响,免疫印迹法检测Ber对NLRP3炎症小体信号通路中NLRP3、My D88、IL-1β、TLR4、ASC和Caspase-1蛋白表达的影响。结果:不同浓度的Ber对HUVEC增殖均具有抑制作用,且基本呈现浓度梯度,IC50值接近5μM;与LPS组相比,不同浓度Ber(1.25、2.5、5μM)均可以显著下调HUVEC中TNF-α、IL-1β炎症因子的分泌(P0.005及P0.01),并可以显著抑制细胞中NLRP3、My D88、IL-1β、TLR4、ASC和Caspase-1蛋白的表达(P0.05),其抑制作用基本呈剂量关系,以5μM Ber的抑制效果最佳。结论:Ber可以通过抑制经典的NLRP3炎症小体活化通路来下调LPS诱导的HUVEC炎症反应。     

葛根素上调miR-155-3p降低内脏脂肪素诱导人脐静脉内皮细胞损伤

目的 研究葛根素对内脏脂肪素(visfatin)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症因子及miR-155-3p表达的影响。方法 采用visfatin干预HUVEC建立细胞损伤模型,不同浓度(0.5,1.0,2.0 g/L葛根素分别干预细胞24 h,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,ELISA法检测细胞内CRP和NF-κB的水平,RT-PCR法检测细胞内miR-155-3p水平,western blotting测髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,My D88)蛋白水平。结果 Visfatin能显著抑制HUVEC增殖,并且诱导其凋亡,与对照组相比差异有显著性(P0.01),葛根素中、高浓度组可明显抑制visfatin对HUVEC细胞损伤作用;此外,葛根素中、高浓度组能显著降低细胞上清CRP和NF-κB水平,增加细胞内miR-155-3p基因表达,与模型组相比差异有显著性(P0.01)。增加miR-155-3p水平可显著降低下游My D88蛋白表达,抑制HUVEC分泌CRP与NF-κB,与模型组相比差异有显著性(P0.05)。结论 葛根素能显著减轻visfatin诱导HUVEC炎症损伤效应,其机制可能与葛根素上调miR-155-3p水平抑制靶基因My D88蛋白表达,从而降低细胞内CRP与NF-κB水平有关。     

LncRNA SNHG3/miR-423-5p对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞损伤的影响

该文旨在探讨lncRNA SNHG3/miR-423-5p轴对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎软骨细胞损伤的影响。IL-1β诱导软骨细胞建立细胞损伤模型,将si-NC、si-SNHG3、miR-NC、miR-423-5p mimics分别转染至软骨细胞后加入10μg/L IL-1β处理24 h,将si-SNHG3和anti-miR-NC、si-SNHG3和anti-miR-423-5p分别共转染至软骨细胞后加入10μg/L IL-1β处理24 h; MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡情况; ELISA法检测IL-6、IL-8、IL-10的水平;双荧光素酶报告实验检测SNHG3与miR-423-5p的靶向关系; Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。IL-1β诱导的软骨细胞中SNHG3的表达量升高(P<0.05), miR-423-5p的表达量降低(P<0.05);转染si-SNHG3或转染miR-423-5p mimics后细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平降低(P<0.05), IL-6、IL-8的水平降低(P<...     

miR-28-5p通过靶向MTSS1调控非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

[目的]探讨miR-28-5p通过靶向MTSS1调控非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为。[方法]用双萤光素酶检测试剂分析荧光素酶活性,同时应用RT-PCR检测MRC5细胞和A549细胞中miR-28-5p和MTSS1 mRNA水平;用Lipofectamine法将miR-NC、miR-28-5p inhibitor和miR-28-5p mimic转染到A549细胞,培养48h后分别采用MTT法、流式细胞术和Transwell法检测细胞增殖、凋亡和迁移情况,同时蛋白印迹法法检测A549细胞中MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3表达。[结果] miR-28-5p与MTSS1有潜在的结合位点;转染miR-28-5p mimic可明显降低MTSS1-WT的荧光素酶活性,对MTSS1-MUT没有影响,而miR-28-5p inhibitor则表现出相反作用,表明miR-28-5p与MTSS1存在靶向调节作用;A549细胞中miR-28-5p mRNA的相对表达量高于MRC5细胞(P<0.05),A549细胞中MTSS1 mRNA的相对表达量低于MRC5细胞(P<0.05);通过miR-28-5p inhibitor降低miR-28-5p后,A549细胞凋亡、MTSS1、MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3的表达增加,细胞增殖和迁移降低(P<0.05);通过miR-28-5p mimic增加miR-28-5p后,A549细胞凋亡、MTSS1、MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3的表达降低,细胞增殖和迁移增加(P<0.05)。[结论] miR-28-5p在A549细胞中高表达,通过基因干预降低miR-28-5p表达后,miR-28-5p通过靶向MTSS1的3’端非编码区,提高MTSS1的翻译水平,抑制A549细胞的恶性生物学行为。     

白藜芦醇抑制肠癌细胞焦亡的作用*

目的: 研究白藜芦醇(Res)对肠癌细胞焦亡的影响。方法: ①葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发小鼠结肠癌(CRC)实验:30只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(Contro组),氧化偶氮甲烷(AOM)组,AOM/DSS组,AOM/DSS+Res组和Res组,每组6只,造模周期共70 d。第1周第1日对AOM组、AOM/DSS组和AOM/DSS+Res组小鼠AOM(10 mg/kg)腹腔注射一次,无菌水饮水,1% DSS水供AOM/DSS组和AOM/DSS+Res组饮用,对AOM/DSS+Res组和Res组小鼠灌胃给予Res(50 mg/kg),造模结束后,取小鼠结肠组织固定、包埋、切片; IHC和Western blot检测小鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达情况。②离体实验:HCT 116细胞给予Res(2.4 μg/L)以及转染miR-31,加Res实验分为4组,分别标记0 h、12 h、24 h、48 h组;细胞转染分组为5组,即control组、miR-31 mimic组、miR-31 mimic+Res组、miR-31inhibitor组、miR-31inhibitor+Res组,48 h后收集细胞,每组设置三个复孔,并通过Western blot检测细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达情况。结果: 动物实验:与control组相比较,AOM/DSS组NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达显著升高(P<0.01),AOM/DSS+Res组NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达水平相较于AOM/DSS组有显著下降(P<0.01);细胞实验:与control组相比,miR-31 mimic组NLRP3(P<0.01)、GSDMD-N(P<0.05)、IL-18(P<0.01)蛋白表达显著升高, miR-31 inhibitor组NLRP3、GSDMD-N、IL-18蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论: Res可通过细胞焦亡抑制结肠癌。     

Down-Regulation of miR-126 Is Associated with Colorectal Cancer Cells Proliferation,Migration and Invasion by Targeting IRS-1 via the AKT and ERK1/2 Signaling Pathways

Background

Colorectal carcinoma (CRC) is one of the leading causes of cancer-related mortality worldwide. MicroRNAs (miRNAs, miRs) play important roles in carcinogenesis. MiR-126 has been shown to be down-regulated in CRC. In this study, we identified the potential effects of miR-126 on some important biological properties of CRC cells and clarified the regulation of insulin receptor substrate 1 (IRS-1) and its possible signaling pathway by miR-126.

Methods

The effect of miR-126 on IRS-1, AKT, and ERK1/2 expression was assessed in the CRC cell lines HT-29 and HCT-116 with a miR-126 mimic or inhibitor to increase or decrease miR-126 expression. Furthermore, the roles of miR-126 in regulation of the biological properties of CRC cells were analyzed with miR-126 mimic or inhibitor-transfected cells. The 3′-untranslated region (3′-UTR) of IRS-1 regulated by miR-126 was analyzed by using a dual-luciferase reporter assay.

Results

We found that IRS-1 is the functional downstream target of miR-126 by directly targeting the 3′-UTR of IRS-1. Endogenous miR-126 and exogenous miR-126 mimic inhibited IRS-1 expression. Furthermore, gain-of-function or loss-of-function studies showed that over-expression of miR-126 down-regulated IRS-1, suppressed AKT and ERK1/2 activation, CRC cells proliferation, migration, invasion, and caused cell cycle arrest, but had no effect on cell apoptosis. Knockdown of miR-126 promoted these processes in HCT-116 cells and promoted AKT and ERK1/2 activation by up-regulating the expression of the IRS-1 protein.

Conclusions

MiR-126 may play roles in regulation of the biological behavior of CRC cells, at least in part, by targeting IRS-1 via AKT and ERK1/2 signaling pathways.     

LncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-124-3p/HMGB1轴对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖、凋亡及纤维化的影响

摘要 目的：探讨长链非编码核糖核酸（LncRNA）KCNQ1OT1靶向调控miR-124-3p/高迁移率族蛋白B1（HMGB1）轴对高糖诱导肾小球系膜细胞（HMC）增殖、凋亡及纤维化的影响。方法：将人HMC分为对照组（NC组）、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、阴性序列（si-NC）组、KCNQ1OT1小干扰核糖核酸（RNA）（si-KCNQ1OT1）组、si-KCNQ1OT1+模拟对照序列（miR-NC）组、si-KCNQ1OT1+miR-124-3p抑制剂（miR-124-3p inhibitor）组,各组在转染后进行高糖处理。实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测LncRNA KCNQ1OT1信使核糖核酸（mRNA）、miR-124-3p mRNA、HMGB1 mRNA表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白印迹法（Western blot）检测HMGB1蛋白、增殖相关蛋白[细胞周期蛋白1（CyclinD1）]、细胞凋亡蛋白[半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶蛋白9（caspase-9）]、细胞纤维化蛋白[纤维连接蛋白（FN）、细胞黏附分子-1（ICAM-1）]表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA KCNQ1OT1与miR-124-3p与HMGB1之间的靶向关系。结果：与NC组比较,高糖组KCNQ1OT1 mRNA、HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白、CyclinD1蛋白、FN蛋白、ICAM-1蛋白表达、HMC活性（24 h、48 h和72 h）明显上升,miR-124-3p mRNA、caspase-3蛋白及caspase-9蛋白表达、HMC凋亡率明显下降（P<0.05）;与高糖组、si-NC组比较,si-KCNQ1OT1组KCNQ1OT1 mRNA、HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白、CyclinD1蛋白、FN蛋白、ICAM-1蛋白表达、HMC活性（24 h、48 h和72 h）明显下降,miR-124-3p mRNA、caspase-3蛋白及caspase-9蛋白表达、HMC凋亡率明显上升（P<0.05）;与si-KCNQ1OT1组、si-KCNQ1OT1+miR-NC组比较,si-KCNQ1OT1+miR-124-3p inhibitor组HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白、CyclinD1蛋白、FN蛋白、ICAM-1蛋白表达、HMC活性（24 h、48 h和72 h）明显上升,miR-124-3p mRNA、caspase-3蛋白及caspase-9蛋白表达、HMC凋亡率明显下降（P<0.05）。较miR-NC组与KCNQ1OT1-WT共转染组而言,miR-124-3p mimic组与KCNQ1OT1-WT共转染组细胞荧光素酶活性明显降低（P<0.05）;较miR-NC组与HMGB1-WT共转染组而言,miR-124-3p mimic组与HMGB1-WT共转染组细胞荧光素酶活性明显降低（P<0.05）。结论：LncRNA KCNQ1OT1可以靶向下调miR-124-3p mRNA表达,上调HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白表达,促进高糖诱导HMC增殖,抑制凋亡,促进细胞纤维化发展。     

miR-126调控脑缺血大鼠细胞凋亡机制的研究

摘要 目的：探讨脑缺血大鼠microRNA-126（MiR-126）在脑组织和血浆中表达的动态变化及与细胞凋亡的关系。方法：健康雄性SD大鼠45只随机分为3组,其中3只大鼠不作任何处理,用于检测正常大鼠中MiR-126在脑组织和血浆的表达,剩余大鼠随机分为假手术组和模型组,模型组用线栓法造脑缺血大鼠模型。TTC法检测模型组大鼠脑组织梗死病变用以确定造模是否成功;RT-qPCR检测大鼠造模后1、3、6、9、12、24和48小时脑组织和血浆中MiR-126的动态表达变化;采用苏木精-伊红染色法检测脑组织形态学变化;采用Western blot 方法分析相关凋亡蛋白表达的变化。结果：TTC法和H-E染色结果表明,大鼠脑缺血造模成功,模型组大鼠出现脑组织大面积梗死病变;MiR-126和Caspase-3表达在模型组大鼠脑组织和血浆中随着脑缺血时间的延长其表达水平逐渐提高,24 h到达高峰后,在48 h Mi-R126表达强度又降低,但仍然高于假手术组大鼠水平;Caspase-3在正常对照组和假手术组表达量都较少（P>0.05）,其他凋亡蛋白Bax和 STAT3相对表达水平趋势同 Caspase-3相似;而Bcl-2表达水平明显降低,趋势与其他凋亡蛋白相反。结论：MiR-126在脑缺血大鼠脑组织和血浆中表达水平明显升高,而且细胞凋亡明显增加,因此MiR-126可能通过促进细胞凋亡对脑缺血大鼠有保护作用,此研究为脑缺血发病机制和诊断提供更多依据。     

miR-382-3p靶向RASA1基因调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡

目的:探讨mi R-382-3p对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:用100 ng/mL的脂多糖(LPS)处理软骨细胞,记为LPS组,以正常培养的软骨细胞作为正常对照(NC)组。mi R-NC、mi R-382-3p、anti-miR-NC、anti-miR-382-3p转染至软骨细胞中,记为mi R-NC组、mi R-382-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-382-3p组;将mi R-NC、mi R-382-3p、si-NC、si-RASA1转染至软骨细胞后再用100 ng/mL的LPS处理,记为mi R-NC+LPS组、mi R-382-3p+LPS组、si-NC+LPS组、si-RASA1+LPS组;将mi R-382-3p分别与pcDNA-NC、pcDNA-RASA1共转染至软骨细胞后再用100 ng/mL的LPS处理,记为mi R-382-3p+pcDNA-NC+LPS组、mi R-382-3p+pcDNA-RASA1+LPS组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测mi R-382-3p和Ras p21蛋白活化因子1(RASA1)m RNA表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测RASA1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶报告实验检测mi R-382-3p和RASA1的靶向关系。结果:LPS诱导的软骨细胞中mi R-382-3p表达水平显著降低,RASA1表达水平显著升高,CyclinD1表达水平显著降低,Cleaved-caspase-3表达水平显著升高,细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高(P0.05)。过表达mi R-382-3p和敲减RASA1,LPS诱导的软骨细胞中CyclinD1表达水平显著升高,Cleaved-caspase-3表达水平显著降低,细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。mi R-382-3p靶向调控RASA1,高表达RASA1部分逆转了mi R-382-3p高表达对LPS处理的软骨细胞增殖和凋亡的影响。结论:过表达mi R-382-3p促进软骨细胞增殖,抑制LPS诱导的软骨细胞凋亡,其机制可能与RASA1有关。     

miR-142-3p通过调控ELAVL1表达影响过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的分子机制

目的探讨微小RNA-142-3p（miR-142-3p）对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。 方法构建氧化应激损伤模型,以H9C2心肌细胞为研究对象,实验将心肌细胞转染后分为正常对照组、H₂O₂组、H₂O₂+miR-142-3p组、H₂O₂+miR阴性对照组、H₂O₂+?si-?ELAVL1组、H₂O₂+siRNA对照组、H₂O₂+miR-142-3p+pcDNA-ELAVL1组、H₂O₂+miR-?142-3p+pcDNA组。分别采用qRT-PCR与Western Blot检测细胞中miR-142-3p与ELAVL1表达;检测各组活性氧（ROS）生成水平;MTT检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡。双荧光素酶报告实验验证miR-142-3p与ELAVL1的靶向作用。Western Blot检测细胞中Cleaved Caspase-3、STAT3、Caspase-3、p-STAT3蛋白表达。两组间比较采用两样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。 结果H₂O₂组心肌细胞中miR-142-?3p（0.26±0.06）、p-STAT3表达水平（0.36±0.04）、细胞存活率（61.73±6.48）﹪与正常对照组相比下降（P均< 0.01）,而ROS水平（1?566.38±121.57）、细胞凋亡率（27.46±1.73）﹪、Cleaved Caspase-3（0.68±0.08）及ELAVL1表达水平（4.23±0.31）均升高（P均< 0.01）;双荧光素酶报告实验证实ELAVL1是miR-142-3p的靶基因;miR-142-3p过表达或沉默ELAVL1表达可明显促进心肌细胞存活、上调p-STAT3表达,而抑制细胞凋亡及Cleaved Caspase-3表达;ELAVL1过表达可逆转miR-142-3p对过氧化氢处理H9C2细胞的保护作用。 结论miR-142-?3p可通过抑制ELAVL1表达进而减轻过氧化氢诱导的心肌细胞损伤,其可能通过影响STAT3信号通路而保护心肌细胞。     

甘草提取物通过调控miR-212-5p/BCL2L2 基因抑制甲状腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨甘草提取物GL-1对甲状腺肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法以10、20、30 μg/mL GL-1处理甲状腺肿瘤细胞CAL-62,或在CAL-62细胞中转染miR-212-5p mimics、anti-miR-212-5p、si-BCL2L2、pcDNA-BCL2L2。其中转染pcDNA-BCL2L2细胞并以30 μg/mL GL-1处理。噻唑蓝比色法 (MTT)检测CAL-62细胞增殖,Transwell小室法检测CAL-62细胞迁移和侵袭,实时定量PCR (qPCR)检测CAL-62细胞中miR-212-5p表达,Western blot检测相关蛋白Bcl-2样蛋白2 (BCL2L2)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)表达。生物学信息预测miR-212-5p的下游靶基因,双荧光素酶基因报告实验进一步验证。数据采用单因素方差分析、Tukey’s事后检验和t检验。结果与对照组相比,10、20、30 μg/mL浓度GL-1降低CAL-62细胞24、48、72 h的细胞活性 (P < 0.05),并呈剂量、时间依赖性。与对照组相比,10、20、30 μg/mL浓度GL-1干预后,CAL-62细胞侵袭数[(143.56±14.22)个、(100.32±10.23)个、(68.23±6.49)个比(189.65±15.23)个]、迁移数[(198.56±14.35)个、(141.35±12.58)个、(89.56±8.95)个比 (295.36±17.56)个]和BCL2L2蛋白表达量 (0.76±0.08、0.51±0.06、0.24±0.02比1.00±0.12)均降低 (P 均< 0.05),而miR-212-5p水平 (1.61±0.11、1.99±0.13、2.28±0.15比1.00±0.07)升高(P < 0.05),并呈剂量依赖性。过表达miR-212-5p和沉默BCL2L2表达在24、48、72 h时CAL-62细胞活性、细胞迁移数、侵袭数和Cyclin D1、MMP-2蛋白表达量降低 (P < 0.05)。生物学信息预测和双荧光素酶基因报告实验证实BCL2L2是miR-212-5p的靶基因。过表达miR-212-5p抑制BCL2L2蛋白水平,沉默miR-212-5p促进BCL2L2蛋白表达 (P < 0.05)。过表达BCL2L2可逆转GL-1对CAL-62细胞增殖、迁移、侵袭及Cyclin D1、MMP-2蛋白表达的抑制作用。结论 GL-1通过miR-212-5p/BCL2L2抑制甲状腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

VEGFA Expression Is Inhibited by Arsenic Trioxide in HUVECs through the Upregulation of Ets-2 and miRNA-126

Arsenic trioxide (ATO) has been used to treat patients with acute promyelocytic leukemia. Recently, studies have shown that ATO can induce apoptosis in leukemic cells and blood vessel endothelial cells in a time- and dose-dependent manner through the inhibition of vascular endothelial growth factor A (VEGFA) production. VEGFA is a key factor in angiogenesis initiation. Targeted inhibition of VEGF or VEGFA expression can suppress angiogenesis; however, little is known about the mechanism by which ATO inhibits VEGFA expression. In this study, we investigated the role of miRNA-126 in the mechanism of action of ATO in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). ATO significantly decreased the viability and proliferation of HUVECs and decreased their migration at 48 h. Cell proliferation was inhibited by 50% (IC50) when 5.0 μmol/L ATO was used. ATO treatment induced miR-126 upregulation and HUVEC apoptosis. Transfection with a miR-126 mimic significantly downregulated VEGFA mRNA levels, and transfection with a miR-126 inhibitor significantly upregulated VEGFA mRNA levels. Finally, we showed that ATO treatment upregulated Ets-2 and miR-126 expression in HUVECs. These results demonstrate that ATO inhibits the growth of HUVECs and induces apoptosis by downregulating VEGFA. One mechanism by which this occurs is Ets-2 upregulation, which results in an increase in miR-126 levels and downregulation of VEGFA expression.