窖蛋白-1、基质金属蛋白酶-2与乳腺肿瘤的侵袭和转移

窖蛋白(caveolin)是分子量为21～24 kD的整合膜蛋白,是胞膜窖(caveolae)的标志性结构分子,其家族成员窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)参与细胞内许多重要的生命活动.近来研究发现,窖蛋白-1与乳腺上皮细胞转化及乳腺癌的发生密切相关.基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是基质降解代谢的主要酶类,几乎能降解细胞外基质和基底膜的所有成分,其家族成员明胶酶A(MMP-2)在乳腺癌的浸润和转移过程中起重要作用.新近发现,窖蛋白-1与基质金属蛋白酶-2在胞膜窖中共定位,窖蛋白-1通过抑制基质金属蛋白酶-2的激活来抑制乳腺癌的侵袭和转移,起到肿瘤抑制因子的作用.本文对窖蛋白-1与基质金属蛋白酶-2各自在乳腺肿瘤侵袭转移中的作用及两者关系的研究进行综述.     

锌转运蛋白ZIP8 在骨关节炎中的表达及其机制研究

目的:探讨锌转运蛋白ZIP8在骨关节炎患者中的表达及其对软骨细胞生长及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法:收集20例骨关节炎患者(OA组)和20例非骨关节炎患者(对照组)血清和软骨组织;采用原子吸收分光光度计测定患者血清和软骨组织中锌离子的表达水平;MTT方法检测软骨细胞的生长活力;采用小RNA干扰沉默ZIP8基因的表达;实时荧光定量PCR方法检测ZIP8及金属基质蛋白酶MMP3、MMP9、MMP12和MMP13等基因的m RNA表达水平;蛋白免疫印迹检测ZIP8及MMP3、MMP9、MMP12和MMP13等蛋白的表达水平。结果:OA组的血清和软骨组织中的锌离子浓度明显高于对照组(P0.01)。OA组软骨组织中ZIP8的m RNA(P0.05)和蛋白(P0.01)表达水平显著高于对照组。ZIP8小RNA干扰片段可以有效的沉默ZIP的基因表达(P0.01);沉默ZIP8的表达促进骨关节炎患者来源的软骨细胞的生长(P0.05),并且降低基质金属蛋白酶包括MMP3,MMP9,MMP12和MMP13的表达水平(P0.05)。结论:ZIP8与骨关节炎密切相关,沉默ZIP8的表达可以提高软骨细胞的生长活力,并且抑制基质金属蛋白酶的表达,为骨关节炎的治疗提供了新的靶点。     

SMAD3介导TGF-β1抑制MMP9在COS7细胞中的表达

用明胶酶谱的方法检查了野生型和Smad3ex8 ex8纯合突变小鼠血清中基质金属蛋白酶(MMP9)的活性 .发现突变小鼠血清中MMP9的含量较正常小鼠的明显增高 ,提示SMAD3有抑制MMP9表达的功能 .通过细胞转染实验证实 ,TGF β1和野生型的SMAD3可以抑制COS7细胞分泌MMP9,而C端缺失的突变型Smad3基因过表达可以解除这种抑制作用 ,说明SMAD3介导TGF β1信号抑制MMP9在COS7细胞中的表达 .     

肿瘤转移相关蛋白ST14的表达、纯化及活性鉴定

细胞外基质包括基底膜和间隙基质 ,主要由胶原、糖蛋白和蛋白多糖等一些物质组成 ,具有维持细胞组织形态的作用 ,是细胞间相互作用的重要场所 .在肿瘤细胞的浸润和转移过程中 ,必须有细胞外基质的降解过程 ,研究发现多种蛋白酶与该过程有关 ,包括丝氨酸蛋白酶家族中的纤维蛋白溶酶原和纤维蛋白溶酶系统 ,金属蛋白酶系统中的MMP 2和MMP 9,组织蛋白酶B ,组织蛋白酶D ,以及透明质酸酶 ,胶原酶等[1] .Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶 (TypeⅡtransmembraneserineprotease ,TTSP)ST14具有降解细胞外基质的能力 ,并能激活uPA前体及HGF SF前体 ,参与…     

基质金属蛋白酶在乳腺癌上皮间质转化中的作用

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)能够分解并修饰细胞外基质及细胞连接,促进上皮细胞从周围组织中分离出来。在乳腺癌中MMP表达量升高,刺激肿瘤发生,引起癌症细胞的入侵和转移。上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的激活与肿瘤的发生也有关。最近的研究表明MMP在乳腺的发育和致病的EMT过程中充当促进因子和介质的角色。本文主要概括最新的关于MMP是如何调节乳腺癌细胞的运动、入侵和EMT所驱动的乳腺癌发育的研究,为更好地理解MMP在乳腺癌发病过程中的作用提供依据。     

NS398抑制宫颈癌Hela细胞增殖及MMP2的表达

目的：NS398是非甾体类抗炎药物的一种,它可以抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,但其在肿瘤发展中的作用机制尚不清楚。宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤,其侵袭转移是患者死亡的主要原因。基质金属蛋白酶几乎能降解细胞外基质中的各种蛋白质成分,在肿瘤侵袭转移中起着十分关键的作用。本文则以宫颈癌Hela细胞为研究对象,观察NS398对Hela细胞的增殖及其基质金属蛋白酶2表达的影响,探讨NS398在宫颈癌侵袭转移过程中的作用及可能机制。方法：用不同浓度的NS398（O、25、50、75、100μmol／L）处理宫颈癌Hela细胞48小时,以噻唑蓝（MTT）比色法分析细胞生长抑制率,酶联免疫吸附实验（EuSA）与蛋白免疫印迹技术分别检测MMP2活性及蛋白表达的变化。结果：不同浓度的NS398处理Hela细胞后,MTT法分析显示,NS398可明显降低细胞代谢MTT的能力（P〈0．05）;ELISA检测发现,NS398可减少细胞培养液中活性MMP2含量（P〈0．05）;Western免疫印迹检测显示,NS398可下调细胞MMP2蛋白的表达（P〈0．05）,这些效应均呈剂量依赖性。结论：Ns398呈剂量依赖性抑制Hela细胞的增殖,抑制细胞中MMP2的活性,并下调细胞MMP2的表达。结果提示,NS398可通过抑制肿瘤细胞的增殖而抑制宫颈癌的生长,通过抑制MMP2的活性和下调MMP2蛋白的表达而抑制宫颈癌的侵袭转移,这为NS398在宫颈癌防治中的应用提供了新的实验依据。     

SHEEC食管癌细胞中NGAL基因的功能

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)是脂质运载蛋白(lipocalin)家族的一个新成员 ,可能是人类的一种新的癌基因 ,但是在肿瘤中的功能不清楚。以往研究发现NGAL基因在SHEEC食管癌细胞中显著过表达 ,表明该细胞是一种用来揭示NGAL基因在肿瘤中功能的良好模型。采用反义封闭技术 ,同时结合裸鼠成瘤实验等研究了反义封闭NGAL基因转录对SHEEC食管癌细胞的浸润和分裂增殖等行为的影响。结果发现 ,反义封闭NGAL基因转录不但可以有效地降低SHEEC细胞分泌的基质金属蛋白酶 9和基质金属蛋白酶 2的活性 ,而与此同时裸鼠成瘤细胞的浸润行为也相应地受到了明显抑制 ,然而SHEEC细胞端粒的长度、拓扑异构酶II的含量以及细胞增殖指数等未发生明显变化。表明NGAL基因在食管癌细胞SHEEC中的功能可能主要是通过明胶酶在促进肿瘤细胞的浸润中发挥作用 ,而可能与肿瘤细胞分裂增殖的相关性不明显     

恒河猴细菌感染性子宫出血模型内膜组织基质金属蛋白酶1、9及其抑制剂的表达

目的　探讨基质金属蛋白酶 1、9在炎性子宫出血中的作用。方法　运用免疫组化链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶染色法 (SP)检测细菌感染性子宫出血恒河猴模型组子宫内膜组织中基质金属蛋白酶 1、9(MMP 1、MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)的表达 ,用正常恒河猴子宫内膜作对照。结果　模型组子宫内膜组织间质、腺上皮中MMP 1、9的表达明显高于正常对照组 ,而TIMP 1的表达与正常组水平相似。结论　基质金属蛋白酶 1、9的高度表达可能与炎症导致的异常子宫出血有关。     

四周尾部悬吊大鼠颈总动脉MMP9和TIMP1的表达及活性改变

目的:探讨四周尾部悬吊模拟失重大鼠颈总动脉基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein9,MMP9)和金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase1,TIMP1)的基因、蛋白表达及酶活性变化。方法:采用4周(week,wk)尾部悬吊大鼠模拟失重影响,通过透射电镜检测颈总动脉壁基质含量,实时定量聚合酶链式反应检测MMP9和TIMP1的mRNA表达,Western blot和免疫组织化学染色检测其蛋白表达和分布,明胶酶谱法测定MMP9活性水平。结果:与对照组相比,悬吊组大鼠细胞外基质面积较对照组显著增加(P0.05),胶原蛋白含量显著增加(P0.05);悬吊组大鼠颈总动脉MMP9的m RNA表达量无明显改变,而其蛋白表达量和酶活性均显著降低(P0.05);TIMP1 mRNA和蛋白表达量则显著升高(P0.05)。结论:模拟失重使大鼠颈总动脉MMP9水平降低,TIMP1水平升高,可能与其管壁基质增生和胶原蛋白含量增加有关。     

人巨细胞病毒感染通过Wnt/β-catenin通路抑制滋养细胞的增殖及侵袭

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染能够影响胎盘绒毛外滋养细胞的增殖、侵袭,进而参与病理妊娠的发生,但具体的机制尚未阐明.在真皮成纤维细胞中的研究表明,HCMV能够抑制Wnt/β-catenin通路.因此,为了观察HCMV感染通过Wnt/β-catenin通路抑制滋养细胞增殖及侵袭的作用,本研究培养了人绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo.研究分为对照组、HCMV组、HCMV+LiCl组细胞.对照组细胞用培养液处理,HCMV组细胞用含有3个感染复数(Multiplicity of infection,MOI)HCMV的培养液处理,HCMV+LiCl组细胞用含有3MOI HCMV及50mmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl的培养液处理.48小时后,采用MTS法检测细胞增殖,采用Transwell检测细胞侵袭,采用western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9,MMP9)、β-连环蛋白(β-catenin)和磷酸型糖原合酶激酶-3β(p-GSK-3β)的表达量.结果显示,与对照组细胞相比,HCMV组细胞的O.D490水平、侵袭数目及cyyclinD1、MMP2、MMP9、β-catenin、p-GSK-3β的表达量均降低(P＜0.05);与HCMV组细胞比较,HCMV+LiCl组细胞的O.D490水平、侵袭数目及cyclinD1、MMP2、MMP9、β-catenin、p-GSK-3β的表达量均增加(P＜0.05).以上结果表明,HCMV感染抑制人绒毛外滋养细胞的增殖和侵袭,且该作用与抑制Wnt/β-catenin通路有关.本研究阐明了HCMV感染通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而抑制滋养细胞增殖及侵袭的分子机制,为最终阐明HCMV先天感染的致病机理积累了有价值的研究资料.     

Cell Rep:科学家成功解析乳腺癌和卵巢癌风险相关蛋白复合体的精细结构

正近日,来自英国弗朗西斯-克里克研究所(Francis Crick Institute)的研究人员通过研究描述了一种关键肿瘤抑制蛋白的分子结构,或为后期阐明该蛋白在细胞中的关键角色提供新的思路,相关研究刊登于国际杂志Cell Reports上。BRCA1是一种人类机体基因,其能够产生名为BRCA1的肿瘤抑制蛋白,该基因突变会导致个体在一生中出现65%-75%患乳腺癌的可能     

以MMP酶切位点为连接臂构建Vasostatin和TRAIL的融合蛋白及其生物学活性分析

以基质金属蛋白酶(MMP)酶切位点（PLGLWA）为连接臂,采用重组PCR技术获得血管形成抑制素(vasostatin,V）和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL,T）的融合蛋白质编码序列,将该融合编码序列插入原核表达载体pMAL-c2中,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,分别得到MBP-VT和MBP-TV融合蛋白,Amylose Resin亲和层析柱纯化.初步纯化的融合蛋白MBP-VT在体外内皮细胞增殖抑制实验、肿瘤细胞凋亡诱导实验中显示了明显的活性,而MBP-TV的作用不明显;体外酶切实验和培养肿瘤细胞上清酶切融合蛋白的免疫印迹分析,证实融合蛋白MBP-VT皆能被正确酶切.上述结果表明成功表达了融合蛋白VT,该融合蛋白具有双重抗肿瘤活性,并可在肿瘤高表达的MMP作用下裂解为V和T.     

肌动蛋白结合蛋白对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响及其机制研究

该文旨在探讨肌动蛋白结合蛋白(actin-binding protein,ANLN)对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响。应用荧光定量PCR(q RT-PCR)检测ANLN在肝癌组织和癌旁组织中的表达差异,运用慢病毒介导sh RNA干扰技术靶向敲低肝癌细胞Huh-7中ANLN的表达,并通过q RT-PCR和Western blot方法验证敲低效率;通过细胞迁移实验和侵袭实验检测肝癌细胞的迁移与侵袭能力。进一步通过q RT-PCR和Western blot检测ANLN基因敲低对基质金属蛋白酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP9)m RNA和蛋白质水平的影响。最后,分析MMP9在ANLN敲低调控的肝癌细胞迁移侵袭过程中的作用。结果显示,在20例肝癌组织样本和癌旁组织中,ANLN在肝癌组织中m RNA水平较癌旁组织显著增高(P0.001)。其中,在发生转移的肝癌组织中,ANLN m RNA水平较无转移的肝癌组织显著增高(P0.001)。慢病毒介导sh RNA能显著抑制肝癌细胞中ANLN的表达,ANLN基因敲低能抑制肝癌细胞的迁移能力,并能显著抑制肝癌细胞的侵袭能力。机制研究发现,ANLN的基因敲低能显著抑制MMP9的表达,MMP9的过表达能逆转ANLN基因敲低对肝癌细胞迁移侵袭能力的抑制作用。该研究结果提示,在肝癌组织中,ANLN m RNA水平明显增高,ANLN的表达水平与迁移侵袭能力密切相关。ANLN基因敲低可能通过调节MMP9的表达,从而抑制肝癌细胞的迁移侵袭能力。     

白血病抑制因子对胚泡金属蛋白酶表达的影响

为了探讨白血病抑制因子 (LIF) 对胚泡着床作用的机理,胚泡经与LIF及其特异性抗体培养后,通过RT-PCR及免疫印迹技术,分析了LIF与着床前小鼠胚泡的基质金属蛋白酶9(MMP9)表达和分泌之间的关系.结果显示：LIF可明显诱导胚泡MMP9的分泌和基因表达; 经LIF特异性抗体封闭后,胚泡MMP9的分泌及基因表达下降,且下降趋势随着LIF被封闭时间延长而减弱,对MMPs组织抑制因子1(TIMP1)的影响则不明显.说明LIF可能通过诱导MMP9的分泌及基因表达来影响胚泡对子宫内膜细胞外基质的水解,促进着床.     

基质金属蛋白酶抑制剂在抗肿瘤治疗中的研究现状

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)是一类依赖锌离子的内肽酶,在细胞外基质(ECM)的降解和重建中起重要作用。已经证明MMP在肿瘤生长、侵袭、转移和癌组织的血管生成中发挥着关键作用,其中以明胶酶(MMP-2,MMP-9)与恶性肿瘤密切相关。因而MMP已成为抗肿瘤治疗的一个有吸引力的靶点,基质金属蛋白酶抑制剂(matrix metalloproteinase inhibitor,MMPI)有望发展成为一类新型的抗癌药物,但临床试验的结果至今仍然令人失望,其主要原因可能是缺乏选择性。因此,寻找高选择性、高亲和性以及高生物利用度的：MMPI意义重大。     

大鼠视网膜色素上皮细胞分离的改良及其MMP表达

目的探索和优化大鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞分离培养的方法,评价RPE细胞的存活状态及细胞基质金属蛋白酶(MMP)的表达,为相关眼底疾病的研究提供细胞来源。方法采用改良的三步酶消化法分离大鼠RPE细胞,并进行细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态,细胞生长曲线评价不同培养代数的RPE细胞的增殖活力。免疫荧光检测CRALBP和角蛋白表达鉴定RPE细胞,并观察不同培养代数RPE细胞中多种基质金属蛋白酶的表达。结果分离培养的RPE细胞可呈梭形、六角形,并维持RPE细胞特征性蛋白CRALBP和角蛋白表达,但细胞内色素成分随着细胞分裂和传代次数的增多逐渐减少。基质金属蛋白酶MMP2、MMP3、MMP9和MMP10在第1代和第3代RPE细胞中均表达阳性,且表达强度未见明显改变。结论应用改良的三步酶消化法可以成功的分离培养大鼠RPE细胞,并在第1代和第3代RPE细胞维持基质金属蛋白酶MMP2、MMP3、MMP9和MMP10的阳性表达。体外培养的大鼠RPE细胞为研究视网膜相关疾病提供了细胞模型。     

Le^Y寡糖单克隆抗体对小鼠胚泡基质金属蛋白酶表达和分泌的影响

以LeY 寡糖特异性单克隆抗体AH6为工具中和胚泡表面LeY 寡糖后 ,通过RT PCR、明胶酶谱法、免疫印迹法等方法 ,在体外研究了着床前小鼠胚泡表面LeY 寡糖抗原与其基质金属蛋白酶 (MMP)、金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP1)的表达和分泌之间的关系。结果显示 :胚泡表面LeY 寡糖抗原被中和后仅 1.5h ,胚泡MMP2和MMP9基因转录表达明显下降、而TIMP1基因转录表达则略有升高 ;随后抗体中和引起胚泡MMP2、MMP9的分泌减少 ,而TIMP1的分泌则未见明显变化。结果表明胚泡表面的LeY 寡糖抗原对着床前胚泡的MMP的合成和分泌具有调节作用 ,而且这种作用可能主要是通过调节相应的MMP2和MMP9基因的表达而引起的     

基质金属蛋白酶-26与肿瘤关系

基质金属蛋白酶-26(matrix metalloproteinase-26,MMP-26),也称为内膜基质酶(endometase)或溶基质蛋白酶-2(matrilysin-2),是MMP家族的成员之一,于2001年首次从人子宫内膜肿瘤cDNA文库中发现并成功克隆。从空间结构上看,MMP-26与MMP-7最为相似。研究证明,MMP-26与多种肿瘤密切相关。本文就其结构、基因定位、调节以及其与肿瘤的关系等作综述。     

FGF-21抑制HSC-T6细胞活化的抗肝纤维化作用及其机制的研究

目的:探索成纤维细胞生长因子21(FGF-21)对肝星形细胞T6(HSC-T6)活化的作用及其作用机制。方法:1640+10%胎牛血清的培养基培养HSC-T6细胞,实验分为5组:正常对照组(Control)、模型组(Model 20 m M乙醇处理细胞12 h)、低剂量FGF-21组(LFGF-21,0.5μmol/L)、中剂量FGF-21组(MFGF-21,1.0μmol/L)和高剂量FGF-21组(HFGF-21,2.0μmol/L)。Real-time PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)和Notch2的m RNA水平,Western blot检测CollagenⅠ、α-SMA、MMP2、MMP9和Notch2的蛋白水平,ELISA检测IL-1β、TNF-α的蛋白水平。结果:模型组α-SMA、CollagenⅠ、MMP2、MMP9、IL-1β、TNF-α、Notch2的水平高于对照组(P0.05),HFGF-21组α-SMA、CollagenⅠ、MMP2、MMP9、IL-1β、TNF-α、Notch2的水平均低于模型组(P0.05)。结论:FGF-21可抑制Notch2的表达,抑制炎症反应,从而抑制HSC的活化,发挥抗肝纤维化作用。     

LKB1抑制人巨细胞肺癌细胞的增殖和迁移侵袭、mTOR磷酸化与VEGF和MMP9表达

目的分析肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)对人巨细胞肺癌(the people giant cell lung cancer,PGCL3)细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法构建真核表达载体p CMV-LKB1,转染人巨细胞肺癌细胞。转染后48h,用免疫印迹法检测各组细胞LKB1蛋白表达水平,明确转染PGCL3效率。转染后每隔12h、连续72h检测LKB1对细胞增殖能力的影响;Transwell小室检测转染后各组细胞迁移、侵袭力。提取各组细胞蛋白检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平。结果 p CMV-LKB1经PCR、双酶切及DNA测序鉴定后,证实目的基因片段插入方向正确,核酸序列与NCBI公布的LKB1的核酸序列一致;免疫印迹分析显示,转染p CMV-LKB1的PGCL3细胞中LKB1表达水平明显增高,表明p CMV-LKB1构建成功。增殖曲线分析和5-乙炔基-2,脱氧嘧啶核苷(5-ethynyl-2,-deoxyuridine,Ed U)检测显示,转染p CMV-LKB1能显著抑制PGCL3细胞的增殖;Transwell小室检测显示,过表达LKB1可显著抑制PGCL3细胞的迁移与侵袭;免疫印迹分析显示,过表达LKB1的PGCL3细胞其LKB1下游分子中总m TOR表达量不变,磷酸化m TOR(p-m TOR)水平降低,m TOR下游分子VEGF表达量也显著降低,迁移侵袭相关蛋白MMP2表达无变化,但MMP9水平显著降低。结论 LKB1可能通过下调PGCL3细胞p-m TOR水平,降低VEGF表达,从而抑制巨细胞肺癌细胞增殖,并可能通过下调金属基质蛋白酶MMP9的表达,降低巨细胞肺癌细胞迁移侵袭能力。