血浆游离DNA在临床应用中的新进展

血浆游离DNA(Plasma cell-free DNA,cf-DNA)是存在于人体血液中一种无细胞状态的胞外DNA。作为细胞死亡的标记物,近年来cf-DNA检测已用于多种急性或慢性疾病的诊断和预后评价中。虽然在健康人群的血浆中也可测量到一定量的cf-DNA,但据相关报道称在癌症,自身免疫性疾病,中风,败血症,先兆子痫和器官移植排斥中cf-DNA呈显著的高水平。本文对cf-DNA在临床工作中应用的新进展做出综述,观察其在肿瘤诊断,产前诊断,脓毒症及老年免疫衰老评估作用中的新进展,发现其相较其他生物标记物敏感性并无太大差别,但特异性更高,还可能与肿瘤的转移机制相关。对于老年个体衰老的机制尚未明确,炎症学说也尚未得到证实,如何评定衰老以及明确衰老的标记物已成为全世界研究的难点,而cf-DNA浓度可能代表了一种全身炎症反应和老年人死亡率新的生物标志物。这些研究都使得cf-DNA应用于临床工作中的前途更加光明。     

血浆游离DNA检测在心血管系统疾病诊断中的应用

心血管疾病发病率和病死率居高不下,寻求敏感性高的生物学指标帮助早期诊断和改善预后意义重大.血浆游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)是一类存在于血浆、尿液及其他体液中游离于细胞之外的双链DNA片段.血浆cfDNA水平在心血管疾病的早期明显升高,提示其可能是心血管疾病的潜在生物标志物.为了更深入理解cfDN...     

血浆游离DNA全基因组甲基化测序的实用稳定性评估

随着液体活检技术的发展,血浆游离DNA成为当前的研究热点之一。血浆游离DNA的全基因组甲基化测序被认为在癌症检测等医学应用拥有巨大潜力,但目前尚缺乏针对该实验流程的实用稳定性评估。文中利用两名志愿者在不同时间采样的血浆游离DNA,在不同实验平台分别进行DNA甲基化的重亚硫酸盐转化前建库(Pre-BS)、转化后建库(Post-BS)和常规DNA建库,获取多因素影响下的测序数据样本。在此基础上,建立了一套血浆游离DNA测序数据分析的质量控制参考流程,综合评估了血液采集提取、游离DNA建库测序过程的实用稳定性,为血浆游离DNA全基因组甲基化测序应用于临床液体活检提供实用性的基础参考。     

检测大鼠血浆游离DNA的定量PCR方法的建立及意义

目的:过度训练是体育界非常重要的问题,目前用多个指标的综合评定来判断是否有过度训练,尚无灵敏、特异的监控指标和简便的评价方法。本文建立检测大鼠血浆游离DNA(cell free DNA,cf DNA)的实时荧光定量PCR方法,并探讨血浆cf DNA水平能否成为反映大鼠过度训练的新监控指标。方法:12只雄性SD大鼠随机分为2组(n=6):安静组和过度训练组。过度训练组进行5周递增负荷的过度训练,每周运动6 d,运动的最后一天运动至力竭。力竭运动后36 h采集静脉血,检测大鼠血浆cf DNA、睾酮(T)和皮质酮(Cort)、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)和肌酸激酶(CK)的水平以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果:1所建立的方法能特异扩增大鼠血浆cf DNA;2与对照组相比,过度训练大鼠的血浆cf DNA水平显著增加(约为安静组的5.43倍);3血浆cf DNA与血浆T、Cort、T/C比值和MDA显著相关(相关系数分别为-0.729,0.854,-0.655和0.720);与T-AOC、GSH-Px、SOD和CK无相关性。结论:1建立检测大鼠血浆cf DNA的定量PCR方法;2过度训练大鼠的血浆cf DNA显著增加,且cf DNA与血浆T、Cort和T/C比值高度相关,提示血浆cf DNA是过度训练的新监控指标;3过度训练大鼠血浆cf DNA的增加可能与过度训练所致的氧化应激增强有关,可能与骨骼肌损伤关系不大。     

晚期胃肠道肿瘤患者血浆游离DNA片段的检测、定量

目的探讨肿瘤患者循环血液中DNA改变,及对提高肿瘤患者治愈率和生存率的临床实际意义。方法随机采集了2004年10月~12月大连医科大学附属二院经病理确诊的初治晚期胃、大肠癌患者的血标本18份,门诊健康体检者血标本16份,通过酚/氯仿提取法定量检测两组的血浆DNA片段,进行对照比较,分析健康人与晚期胃肠道肿瘤患者血浆游离DNA片段水平的差异、晚期胃肠道肿瘤患者血浆游离DNA片段水平与预后相关指标的相关性。结果晚期胃肠道肿瘤组血浆游离DNA片段水平高于正常健康对照组,其血浆游离DNA片段的均值分别为(346.3±81.62)μg/m l与(27.6±6.91)μg/m l,差异有显著性;胃癌、大肠癌患者两组间的血浆游离DNA片段差异无显著性,均值分别为:(350.8±110.92)μg/m l与(357.1±126.26)μg/m l;在预后相关指标的各因素中,晚期胃肠道肿瘤患者的血浆游离DNA片段水平与免疫状态、是否存在远处转移有明显相关性,其中与免疫状态呈负相关,与远处转移呈正相关。结论晚期胃肠道肿瘤患者血中的游离DNA片段水平较健康人高,可能与患者自身状态、病理分型、疾病状态有关;游离DNA片段可以作为检测晚期胃肠道肿瘤的特异性指标,还可以替代免疫状态及是否存在远处转移等指标评价远期预后,并有取材方便、检测时间短、可以定量分析的优点,对临床有一定的指导意义和应用价值。     

人体游离循环DNA的研究进展

游离循环DNA是一种细胞外游离状态的DNA, 在动植物及人的体液中都检测到了它的存在。对游离循环DNA的检测已经应用在疾病的监控、胎儿的产前诊断及肿瘤的研究中。文章介绍了循环DNA的生物学特征, 并对近年来游离循环DNA的研究和应用进展做了简单的回顾。     

DNA指纹技术新进展

DNA指纹技术从原理上可以分为两大类:即传统的以Southern杂交为基础的RFLP技术和以聚合酶链式反应(PCR)为基础的一系列分子标记技术。RFLP需要样品DNA的量较大,对微量被测样品无能为力。至于与PCR相结合的RAPD、AP-PCR和DAF等技术则由于引物相对较短,对实验条件非常敏感,每一轮实验都需要筛选最合适的反应体系,增加了实验周期和复杂度。近几年新出现的AFLP(Am-pilified Fragment Length Polymorphism)、LP-RAPD(Long Primer RAPD)和DALP(Direct     

DNA序列分析新进展

自从生物学家发现DNA是生命的遗传物质之后,便迫切地想知道它是如何携带信息及控制遗传的.这取决于对DNA分子中的碱基序列的分析.序列分析对于发现旧的基因,促进基因工程的发展有着重大意义.本世纪七十年代,世界上许多生物实验室相继进行这方面的研究.1977年,英国的Sanger序列测定的末端终止法,随后,Maxam和Gilbert等人提出     

应用二阶微商分光光度法测定血浆游离血红蛋白

用于血浆或组织中游离血红蛋白测定的常规方法,主要包括血红蛋白(Hb)-拟过氧化物酶法和分光光度法两类。但是,经典的酶法其试剂稳定性和方法特异性均不甚满意,且联苯胺或其衍生物又系类致     

蛇毒临床应用的新进展

蛇毒临床应用的新进展沈阳药科大学生物化学教研室陈建智蛇毒是一种非常复杂的动物毒素,科学家们从研究其毒理学入手,到发现其中有可能作为临床医用的药理作用,经历了漫长的岁月。但自从六十年代后期国外抗凝治疗药Ａｎｃｒｏｄ（Ａｒｖｉｎ）问世以后,临床医用的研究...     

慢性肾炎患者血浆游离氨基酸的改变

<正> 近10年来,许多学者从测定血浆游离氨基酸(Free Amino Acid,FAA)来研究某些内科疾病。其中肾脏疾病引起氨基酸代谢的紊乱,虽然比较复杂,但大致可以分三种情况:(1)肾功能损伤时,常引起甘氨酸(Gly)转变为丝氨酸(Ser),瓜氨酸(Cit)转变为精氨酸(Arg)以及苯丙氨酸(Phe)转变为酪氨酸(tyr)均受阻,所以血浆中甘氨酸,瓜氨酸以及苯丙氨酸等氨基酸浓度升高,而丝氨酸,精氨酸以及酪氨酸等氨基酸浓度降低;(2)慢性肾功能衰竭时,常常因维生素B_6缺乏,易引起支链氨基酸(Barnched chaim AminoAcid,BCAA),包括亮氨酸(Leu),异     

游离DNA研究进展及标准化的必要性

游离DNA (cell free DNA,cfDNA)作为一种新型分子标志物在疾病预测、肿瘤防治等方面的作用日益突出.但在实现其广泛的临床应用前仍存在诸多障碍,主要是cfDNA相关的标准较少,导致目前的研究报道缺乏可比性,检测结果缺乏稳定的可重复性,从而降低了临床应用的可靠性.本综述集中阐述了近年来cfDNA的相关研究进展,包括cfDNA的样本来源、样本保存、样本提取、定性定量检测和应用,并分析比较了cfDNA研究的各个环节采用的方法及其优缺点,对其中存在的问题进行了剖析和总结,指明了cfDNA相关标准制定的迫切性.     

古DNA提取技术新进展

古DNA是揭示古代生物生长状态以及生物千百万年来进化情况的最重要的信息载体,在治疗人类遗传性的疑难病症及牲畜饲养和粮食作物种植等方面都有重大的贡献。古DNA提取技术作为获得该重要的信息载体的最重要手段,长久以来受到了世界各地的考古学家以及医学研究学者们的高度重视。随着科学的发展,古DNA提取技术已经形成多种核心方法:Chelex-100法、酚-氯仿抽提法、二氧化硅(硅粒)法、NaOH法、硅离心柱法试剂盒、磁珠法试剂盒等方法。本文将根据最新的研究成果对以上提到的几种方法进行分析比较,以期能够为将来古DNA提取技术的发展创新提供新的思路与方向。     

动物细胞DNA聚合酶的研究新进展

本文主要介绍动物细胞中四种依赖于DNA的DNA聚合酶(简称DNA聚合酶)的结构、功能及其在DNA复制和修复作用中的研究现状。     

鱼类线粒体DNA研究新进展

线粒体DNA是分子生物学研究中的一个热门领域,已成为鱼类进化生物学和群体遗传学研究的重要分子遗传标记。本文对鱼类线粒体DNA分子生物学的最新研究进展进行了较详细的阐述。重点介绍鱼类线粒体DNA全序列的研究进展、组成及特征,鱼类线粒体DNA非编码区结构研究进展,鱼类线粒体DNA多态性及其主要的检测方法;综述了最近有关鱼类线粒体DNA在鱼类系统学、种间杂交渐渗、种群识别、起源和进化、地理分化等研究中的应用情况。     

iPS在临床应用的新进展

诱导性多潜能干细胞,即iPS细胞,是近年来干细胞领域最令人瞩目的一项新的干细胞制造技术,这个技术通过特定的基因组合与转染可以将已分化的体细胞诱导重编程为未分化的多能细胞.与胚胎干细胞(ES)不同,iPS细胞的制造不需要胚胎组织,也不涉及伦理学问题,更重要的是制备iPS细胞可以采用病人自己的体细胞制备,避免免疫排斥反应,并且来源广泛,因此给再生医学实践于临床带来了新的曙光.目前,iPS的研究尚处于初级阶段,本文就iPS的研究现状与已有在临床应用相关的实验报道作以综述.     

古DNA提取技术新进展

古DNA 是揭示古代生物生长状态以及生物千百万年来进化情况的最重要的信息载体,在治疗人类遗传性的疑难病症及牲畜饲养和粮食作物种植等方面都有重大的贡献。古DNA提取技术作为获得该重要的信息载体的最重要手段,长久以来受到了世界各地的考古学家以及医学研究学者们的高度重视。随着科学的发展,古DNA提取技术已经形成多种核心方法：Chelex-100 法、酚-氯仿抽提法、二氧化硅（硅粒）法、NaOH 法、硅离心柱法试剂盒、磁珠法试剂盒等方法。本文将根据最新的研究成果对以上提到的几种方法进行分析比较,以期能够为将来古DNA提取技术的发展创新提供新的思路与方向。