威灵仙多糖对舌鳞癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨威灵仙多糖对人舌鳞癌细胞Tca-8113的体外生长抑制作用。方法:提取分离纯化威灵仙多糖,用噻唑蓝(MTT)法测定在不同浓度威灵仙多糖作用下人舌鳞癌细胞Tca-8113的活力,观察药物对癌细胞的生长抑制作用。结果:威灵仙多糖对Tca-8113的生长具有明显的抑制作用,随着威灵仙多糖浓度的增大或作用时间延长,抑制作用逐渐增强,呈一定的剂量和时间依赖关系。结论:在体外实验中,威灵仙多糖对人舌鳞癌细胞Tca-8113具有明显的杀伤和抑制作用,可进一步研究其作为抗肿瘤药物应用于临床的潜力。     

PI3K/AKT信号转导通路与人舌鳞癌细胞TCA8113顺铂耐药的相关性研究

目的:探讨PI3K特异性抑制剂LY294002逆转顺铂耐药口腔鳞癌细胞TCA8113/CDDP的可行性。方法:采用间歇性加药,逐步递增CDDP药量,体外连续诱导培养TCA8113/CDDP细胞;用不同浓度的LY294002和顺铂处理TCA8113和TCA8113/CDDP细胞;MTT法观察对细胞增殖的影响,Western印迹分析LY294002作用前后p-Akt、Akt、PI3K蛋白的表达。结果:建立了舌鳞癌耐药细胞TCA8113/CDDP,耐药指数为7.7;MTT实验显示LY294002对TCA8113和TCA8113/CDDP细胞的抑制作用与浓度及作用时间呈正相关;LY294002联合顺铂对2种细胞的抑制作用比单用顺铂效果好;PI3K、Akt、p-AKT蛋白表达明显降低,其中TCA8113/CDDP细胞中PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达比TCA8113细胞明显增多(P0.05)。结论:LY294002能增加耐药口腔鳞癌顺铂化疗的敏感性。     

P13K／AKT信号转导通路与人舌鳞癌细胞TCA8113顺铂耐药的相关性研究

目的：探讨P13K特异性抑制剂LY294002逆转顺铂耐药口腔鳞癌细胞TCA8113／CDDP的可行性。方法：采用间歇性加药,逐步递增CDDP药量,体外连续诱导培养TCA8113／CDDP细胞;用不同浓度的LY294002和顺铂处理TCA8113和TCA8113／CDDP细胞;MTT法观察对细胞增殖的影响,Western印迹分析LY294002作用前后p-Akt、Akt、P13K蛋白的表达。结果：建立了舌鳞癌耐药细胞TCA8113／CDDP,耐药指数为7．7;MTT实验显示LY294002对TCA8113和TCA8113／CDDP细胞的抑制作用与浓度及作用时间呈正相关;LY294002联合顺铂对2种细胞的抑制作用比单用顺铂效果好;P13K、Akt、P—AKT蛋白表达明显降低,其中TCA8113／CDDP细胞中P13K、AKT、p-AKT蛋白的表达比TCA8113细胞明显增多（P〈0．05）。结论：LY294002能增加耐药口腔鳞癌顺铂化疗的敏感性。     

Fat-1 基因真核表达载体的构建及其对人口腔鳞癌细胞 脂肪酸含量的影响

目的:构建真核表达载体pcDNA3.1-Fat1,线性化稳定转染人口腔鳞癌细胞株Tca8113,检测其细胞内脂肪酸含量变化。方法:通过重叠延伸PCR方法人工合成利于真核表达的Fat-1基因,用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1-Fat-1,用脂质体转染真核细胞的方法转染人口腔鳞癌细胞株Tca8113,用气相色谱仪检测脂肪酸的变化情况。结果:测序及酶切鉴定成功合成真核偏好表达的Fat-1基因。与对照组相比,转染Fat-1基因的口腔癌细胞的n-3脂肪酸明显增多,n-6/n-3明显下降。结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-Fat1,并对口腔鳞癌细胞内脂肪酸含量产生明显影响,为进一步研究Fat-1基因在口腔鳞癌中的生物学功能奠定了基础。     

circNEIL3靶向miR-218-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

该文旨在探讨circNEIL3对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响及其可能的作用机制。采用qRT-PCR法检测口腔鳞癌组织、癌旁组织、人口腔鳞癌细胞(CAL-27、SCC-25、SCC-9、HSC-3)以及正常口腔角质细胞HOK中circNEIL3、miR-218-5p的表达量;以CAL-27细胞为研究对象,si-circNEIL3、miR-218-5p mimics、si-NC、miR-NC分别转染至CAL-27细胞, si-circNEIL3和antimiR-NC、si-circNEIL3和anti-miR-218-5p分别共转染至CAL-27细胞; MTT法检测CAL-27细胞增殖情况;流式细胞术检测CAL-27细胞凋亡情况; Transwell检测CAL-27细胞侵袭和迁移情况。双荧光素酶报告实验检测circNEIL3与miR-218-5p的靶向关系; Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达量。与癌旁组织相比,口腔鳞癌组织中circNEIL3的表达量升高(P<0.01),miR-218-5p的表达量降低(P...     

喜树碱-氟尿苷纳米颗粒对口腔鳞癌细胞Tca-8113增殖与迁移的影响

目的:探究喜树碱-氟尿苷(CPT-FUDR)纳米颗粒对口腔鳞癌Tca-8113细胞增殖与迁移的影响。方法:制备喜树碱-氟尿苷纳米颗粒,通过丁达尔现象证明已组装完毕。将制备好的纳米颗粒组和喜树碱(CPT)单药组、氟尿苷(FUDR)单药组以及两种单药混合组(CPT/FUDR)作对比,采用MTT实验检测药物对口腔鳞癌细胞Tca-8113增殖的抑制作用,通过划痕实验探究CPT-FUDR纳米颗粒和CPT/FUDR混合药物对细胞迁移能力的影响。结果:MTT结果显示:在药物浓度大于0.1μM时,随着浓度的增加,四组细胞存活率均明显下降(P0.05),而CPT-FUDR纳米颗粒组Tca-8113细胞的存活率明显低于单药CPT、FUDR和CPT/FUDR混合物组(P0.05)。在划痕实验中,培养48 h后,CPT/FUDR混合物组和CPT-FUDR纳米颗粒组均显著低于空白组(P0.05),且CPT-FUDR纳米颗粒组显著低于CPT/FUDR混合物组(P0.05)。结论:在体外,CPT-FUDR纳米颗粒对口腔鳞癌Tca-8113细胞的增殖与迁移有较好的抑制作用,且抑制效果优于CPT/FUDR两种单药混合。     

雌激素受体在人舌鳞癌中的表达及β-雌二醇对其增殖的影响

目的：观察雌激素受体（ER）在人舌鳞癌Tca8113细胞系细胞上的表达,研究β－雌二醇（estrabiol,E2)对培养的舌癌细胞增殖的影响。方法：用免疫细胞化学方法和RT－PCR方法检测雌激素受体在人舌鳞癌细胞上的表达,将β－雌二醇（β－E2）作用于体外培养的人舌鳞癌细胞,测定^3H-TdR掺入量,并用流式细胞仪测定细胞周期。结果：经免疫细胞化学和RT－PCR方法可检测到ER－α和ER－β在人舌鳞癌细胞上均有表达,其中ER－β表哒相对较弱。不同浓度的β－E2可增加^3H-TdR掺入量,并存在着剂量效应。106-6mol/L的β－E2能使人舌鳞癌细胞处于G1期的细胞比例从对照组的76．5％下降至62．3％,而处于S期和G2期的细胞比例从23．5％上升至37．7％,细胞的DNA合成增加,促进细胞的增殖。β－E2对舌癌细胞的促增殖作用可被Tamoxifen阻断。结论：在人舌鳞癌细胞上有雌激素受体的表达,且β－E2在体外能明显促进培养的人舌鳞癌细胞的增殖。     

Fat-1基因真核表达载体的构建及其对人口腔鳞癌细胞脂肪酸含量的影响

目的：构建真核表达载体pcDNA3．1-Fat1,线性化稳定转染人口腔鳞癌细胞株Tca8113,检测其细胞内脂肪酸含量变化。方法：通过重叠延伸PCR方法人工合成利于真核表达的Fat-1基因,用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3．1-Fat—1,用脂质体转染真核细胞的方法转染人1：／腔鳞癌细胞株Tca8113,用气相色谱仪检测脂肪酸的变化情况。结果：测序及酶切鉴定成功合成真核偏好表达的Fat-1基因。与对照组相比,转染Fat—1基N的口腔癌细胞的n-3脂肪酸明显增多,n-6／n-3明显下降。结论：成功构建真核表达载体pcDNA3．1-Fat1,并对口腔鳞癌细胞内脂肪酸含量产生明显影响,为进一步研究Fat-1基因在口腔鳞癌中的生物学功能奠定了基础。     

Rab23 在鳞癌细胞系中的表达及其对鳞癌细胞侵袭的影响*

目的:观察Rab23在鳞癌细胞系中的表达及其对鳞癌细胞侵袭的影响。方法:western blot检测Rab23在四个头颈部鳞癌细胞系中的表达,对鳞癌细胞系HSQ-89用脂质体转染小干扰RNA,对Sa3用脂质体转染Rab23质粒,分别干涉或过表达Rab23,用铺有基质胶的transwell小室检测细胞侵袭能力,细胞划痕试验检测迁移能力。结果:Rab23在四个鳞癌细胞系中均有表达,在Hacat中不表达,HSQ-89细胞经Rab23干涉后细胞侵袭能力减弱,而Sa-3细胞过表达Rab23后细胞侵袭能力增强。干涉或过表达Rab23后,鳞癌细胞的迁移能力无差异。结论:Rab23可促进鳞癌细胞侵袭。     

MS-275联合平阳霉素对Tca-8113细胞生长和凋亡的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)MS-275联合抗生素类化疗药物平阳霉素(PYM)对口腔鳞状癌细胞Tca-8113的生长及凋亡的影响。方法:以体外培养的口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞为研究对象,应用MTT法检测不同浓度(0、1、2、4、8μmol/L)MS-275、(0、0.05、0.1、0.2、0.4μmol/L)平阳霉素(PYM)单独和联合用药对Tca-8113细胞增殖活性的影响;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞术定量检测细胞的凋亡情况。结果:不同浓度(1、2、4、8μmol/L)MS-275和(0.05、0.1、0.2、0.4μmol/L)PYM均可显著抑制Tca-8113细胞的增殖,并促进其凋亡,且呈浓度依赖性(P0.05)。4μmol/L MS-275和0.2μmol/L PYM联合应用时,其抑制Tca-8113细胞增殖和促进其凋亡的作用均显著高于单独应用MS-275或PYM(P0.05)。结论:MS-275能有效增强口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞对平阳霉素(PYM)的敏感性,体外实验中呈现较好的抗肿瘤效应。     

microRNA-21对人舌鳞癌细胞的增殖和凋亡的影响

目的:探讨micro RNA-21(mi R-21)对人舌鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取8例舌鳞癌组织和4例癌旁组织为研究材料,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)法对舌鳞癌及癌旁组织中的mi R-21相对表达量进行检测,利用人工合成的mi R-21mimic对人舌鳞癌Tca8113细胞进行瞬时转染,采用q RT-PCR法对Tca8113细胞中mi R-21相对表达量进行检测,采用四唑盐比色法(MTT)法对Tca8113细胞增殖情况进行检测,采用流式细胞术对Tca8113细胞周期与凋亡情况进行检测。结果:舌鳞癌组织中mi R-21的相对表达量(3.502±0.674),高于癌旁组织(0.998±0.192),差异有统计学意义(P0.05)。mi R-21mimic导致了Tca8113细胞中的mi R-21相对表达量上调(6.864±1.324),明显高于对照scramble组[(0.997±0.187),P0.05],对Tca8113细胞的增殖发挥了促进作用(P0.05)。经mi R-21mimic转染之后,Tca8113细胞进入S期的细胞出现了明显的增加[(27.4±5.1)%vs(48.6±8.7)%,P0.05],处于G1期的细胞出现了显著的减少[(56.3±9.6)%vs(36.2±7.2)%,P0.05],细胞凋亡数量出现了显著减少[(9.4±2.3)%vs(18.6±3.9)%,P0.05]。结论:mi R-21在舌鳞癌组织中高表达,过表达mi R-21有效促进了Tca8113细胞的增殖,抑制细胞的凋亡,mi R-21在舌鳞癌诊断和治疗可能具有一定的新型靶点价值。     

MACC1和C-Met在口腔白斑和口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨分析MACC1和C-Met在正常口腔黏膜、口腔白斑及口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测20例口腔黏膜、20例上皮异常增生白斑、50例口腔鳞癌组织中的MACC1、C-Met蛋白的表达情况,采用X2和spearman等级相关分析对结果进行判定。结果:MACC1、C-Met蛋白在异常增生型白斑和口腔鳞癌中的阳性表达率分别为50%、76%,35%、66%,均明显高于正常口腔黏膜(17.6%,5.0%),差异均有统计学意义(P0.05)。MACC1和C-Met蛋白表达与口腔鳞癌的分期、淋巴结转移及分化程度密切相关(P0.05)。Spearman等级相关分析显示口腔白斑及口腔鳞癌中MACC1和C-Met的表达呈现正相关(P0.05)。结论:MACC1和C-Met在上皮不典型增生性白斑和口腔鳞癌中高表达,二者在口腔黏膜白斑的癌变和口腔鳞癌的发生发展中可能起重要作用。     

Growth suppression induced by Notch1 activation involves Wnt-beta-catenin down-regulation in human tongue carcinoma cells

BACKGROUND INFORMATION: Involvement of Notch1 signalling in several cancers is well known, but its role in human tongue squamous cell carcinoma, one of the most common carcinomas of the human oral cavity, remains poorly characterized. RESULTS: Our studies demonstrated that constitutively over-expressed active Notch1, via stable transfection of exogenous ICN (intracellular fragment of Notch), resulted in growth suppression of the human tongue cancer cell line Tca8113 in vitro and in vivo, accompanied by G(0)-G(1) cell cycle arrest and apoptosis. Moreover, down-regulation of beta-catenin protein expression was observed in Tca8113 cells stably expressing active Notch1. Activated Notch1 also led to dramatic increase in p21(WAF1/CIP1) and p53 expression with decreases in Skp2 (S-phase kinase-associated protein 2) and Bcl-2 (B-cell lymphocytic-leukaemia proto-oncogene 2) expression, which may participate in the induction of apoptosis and cell cycle arrest. CONCLUSIONS: Since the effects of the Notch1 pathway are cell-type specific and context-dependent in cell types where Notch1 has an anti-proliferative effect, down-regulation of Wnt/beta-catenin signalling may be one of the mechanisms which induces apoptosis and cell cycle arrest.     

辣椒素对舌鳞癌细胞增殖和凋亡影响的初步研究

目的:研究辣椒素对人舌鳞癌细胞增殖和存活的影响。方法:不同浓度辣椒素处理TSCCA和Tca8113细胞24,48和72h,MTS法检测细胞增殖,Western Blot法检测细胞周期调控和细胞凋亡相关分子的表达。结果:随着辣椒素浓度的增加,p53,p21和p27表达上调,Bcl-2表达未受到明显影响,Bcl-XL和Mcl-1表达抑制,caspase7和PARP剪切体表达上调。结论:辣椒素呈剂量依赖和时间依赖性抑制TSCCA和Tca8113细胞增殖,其机制可能与细胞周期和细胞凋亡相关分子表达的改变相关。     

Growth inhibition induced by transforming growth factor-β1 in human oral squamous cell carcinoma

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a world-wide health problem and its incidence accounts for 1.9–3.5% of all malignant tumors. Transforming growth factor beta/Smads (TGF-β/Smads) signaling pathway plays an important role in oncogenesis, but its function and molecular mechanisms in OSCC remain unclear. Expression of transforming growth factor-β receptor type II (TβRII) and Smad4 was studied by immunohistochemistry in 108 OSCC patients and 10 normal controls. Function and molecular mechanisms of TGF-β/Smads signaling pathway was then investigated in two human tongue squamous carcinoma cell lines with high and low metastasis (Tb and Tca8113) by RT-PCR, Western Blot, immunofluorescence, cell growth curve and flow cytometry (FCM), respectively. TβRII and Smad4 were significantly down-regulated in tumor tissues (with or without lymph node metastasis) compared to normal oral epithelium tissues (P < 0.05). TGF-β1 induced arrest of the cell cycle rather than cell death in Tca8113 and Tb cells, and this influence was mediated by the increasing the expression and changing the location of its downstream components of TGF-β1/Smads signaling pathway. TGF-β1 rapidly increased the expression of p15 and p21 in both Tca8113 and Tb cells. TGF-β1 did not increase p27 expression in Tca8113 cells, but p27 expression was increased in Tb cells. These indicated that TGF-β1 induced G₁ arrest of cell cycle through a different regulating pathway in Tb cells compared with Tca8113 cells. Thus, we conclude that TGF-β/Smads signaling pathway play a important role on cell growth and metastasis potential in OSCC. Xiumei Wang, Wenjing Sun, and Jing Bai contributed equally to this paper.     

上调OPN和TIP30表达对口腔鳞癌cal-27细胞的影响

目的:探讨上调骨桥蛋白(OPN)和TIP30表达对口腔鳞状细胞癌cal-27细胞增殖和迁移能力的影响。方法:采用过表达OPN载体病毒和过表达TIP30质粒分别感染或转染cal-27细胞株后,通过实时荧光定量PCR法和蛋白印迹western blot法检测OPN和TIP30的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:过表达OPN载体病毒感染的cal-27-sh OPN细胞株OPN m RNA和蛋白的表达均明显高于cal-27-sh N细胞株(P0.001,P=0.002),且细胞的增殖能力和迁移能力强(P0.001,P=0.002)。过表达TIP30质粒转染的cal-27-p TIP30细胞株TIP30 m RNA和蛋白的表达均明显高于cal-27-pc3.0细胞株(P=0.001,P=0.003),且细胞的增殖能力和迁移能力弱(P0.001,P=0.005)。结论:OPN能促进cal-27细胞的增殖和迁移,TIP30抑制cal-27细胞的增殖和迁移。     

肺鳞状细胞癌和腺癌PD-L1蛋白及相关miRNA表达差异的研究

摘要 目的：探讨肺鳞状细胞癌（鳞癌）和腺癌PD-L1蛋白及相关miRNA表达的差异。方法：2019年5月至2020年11月来我院就诊的非小细胞肺癌初治患者纳入本项研究；按照病理类型，将患者分为腺癌组和鳞癌组；H&E染色检测免疫细胞数量；免疫组化检测PD-L1、ki-67、PD-1、CTLA-4和LAG-3的表达；miRNA测序筛选鳞癌和腺癌间差异表达的miRNA。结果：H&E染色结果显示鳞癌组微环境中免疫细胞的数量为86.86±8.96个/高倍视野（HPF），腺癌组的数量为26.29±3.99个/HPF（t=6.173，P＜0.001）；肺鳞癌组微环境免疫细胞PD-1、CTLA-4和LAG-3阳性表达的比例分别为53.71±6.88%、35.29±3.25%和34.43±3.29%，腺癌组阳性表达的比例分别为22.29±3.80%、13.43±2.32%和24.00±1.98%（t=3.997，P=0.002；t=5.476，P＜0.001；t=2.719，P=0.019）；肺鳞癌组患者PD-L1蛋白阳性表达的比例为76.67%，腺癌组的比例为36.67%（P=0.001）；肺鳞癌PD-L1（miR-135、miR-24和miR-30b等）和PD-1（miR-802、miR-155和miR-3127-5p等）相关miRNA的表达均显著高于腺癌。结论：肺鳞癌PD-L1蛋白及相关miRNA的表达、微环境免疫细胞PD-1、CTLA-4和LAG-3阳性比例均显著高于腺癌。