枸杞多糖对自发乳腺癌MMTV-PyMT小鼠肿瘤生长和转移的作用

目的以MMTV-Py MT小鼠为乳腺癌模型探讨枸杞多糖对乳腺癌生长和转移的作用。方法扩群鉴定转基因自发乳腺癌MMTV-Py MT小鼠,将阳性雌性小鼠随机分为LBP组和对照组,每组8只,小鼠8周龄时给药,LBP组给予LBP(50 mg/kg,腹腔注射)治疗,对照组给予生理盐水,每2 d给药一次测量肿瘤体积一次,4周后脱臼处死,肺Bouin’s溶液固定后观察肺表面转移结节数目,肿瘤组织固定包埋后免疫组化法检测肿瘤细胞增殖及血管密度。结果 MMTV-Py MT阳性小鼠成瘤率100%,与对照组相比,LBP组的肿瘤重量(4.208±0.4463 g)明显地比对照组(6.477±0.3724 g)轻,肿瘤体积也明显比对照组小;LBP组肺表面结节数目(12±1.155个)明显比对照组(20±2.745个)少,免疫组化染色结果显示LBP组肿瘤组织中细胞增殖数目及微血管密度明显比对照组少。结论枸杞多糖可通过抑制MMTV-Py MT小鼠乳腺癌的生长和转移,并抑制肿瘤细胞增殖和血管新生,MMTV-Py MT小鼠可作为乳腺癌肺转移模型运用于抗肿瘤药物研究。     

CLCN3/MMTV-PyMT转基因小鼠杂交群体的建立及鉴定

目的建立并鉴定CLCN3/MMTV-Py MT双转基因小鼠杂交群体,构建氯通道Cl C-3过表达的自发乳腺肿瘤转基因小鼠模型。方法将CLCN3转基因小鼠和MMTV-Py MT转基因小鼠分别进行繁殖,选取阳性子代鼠进行配对,培育杂交后代,然后通过PCR鉴定基因型、通过组织免疫荧光方法、Western blot检测转基因小鼠蛋白表达情况。结果成功繁育CLCN3转基因小鼠和MMTV-Py MT转基因小鼠,经PCR鉴定成功构建CLCN3/MMTV-Py MT双转基因鼠杂交群体,并成功保种和扩群,经组织免疫荧光和Western-blot分析双转基因小鼠的Cl C-3蛋白的表达高于MMTV-Py MT转基因小鼠。结论成功构建Cl C-3过表达的自发乳腺肿瘤转基因小鼠模型,为进一步研究Cl C-3在肿瘤生长和转移中的功能提供了良好的动物模型。     

三种金花茶提取物降脂作用实验研究

目的:探讨金花茶浓缩液、金花茶乙酸乙酯/二氯甲烷提取物以及金花茶水提物对高脂血症小鼠血脂的调节作用。方法:将小鼠按照体重随机分成正常饮食组和高脂饮食组,分别给予正常饲料和高脂饲料喂食,4周后将高脂饮食小鼠按照体重以及血脂水平(TC)随机分成金花茶浓缩液组、金花茶乙酸乙酯/二氯甲烷提取物组、金花茶水提物组以及辛伐他丁组。3种金花茶提取物以及辛伐他丁混悬液连续灌胃10周,同时给予高脂饮食。末次给药后禁食不禁水12 h,摘眼球取血,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)。结果:与模型组相比,金花茶浓缩液和辛伐他丁能显著降低血清TC、TG、LDL-C水平(P0.01或P0.05),但是对HDL-C无明显调节作用;对血清中的AST、ALT、SOD以及MDA影响不大。金花茶乙酸乙酯/二氯甲烷提取物以及水体物对血清中的TC、TG、LDL-C、HDL-C、AST、ALT、SOD及MDA无明显的调节作用。结论:金花茶浓缩液对高脂血症小鼠的血脂具有良好的调节作用。     

褪黑素抑制小鼠卵母细胞的体外成熟

目的:探讨褪黑素(MT)对小鼠卵母细胞的体外成熟的影响.方法:通过卵母细胞自发、次黄嘌呤(HX)阻滞和激素诱导成熟三种体外培养模型研究了褪黑素(MT)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响.结果:①0.1 g/L、0.02g/L、0.004 g/L及0.0008 g/L浓度的MT均能显著抑制小鼠卵丘卵母细胞复合体(CEOs)自发成熟过程中第一极体(PB1)的释放(P＜0.01);②动力曲线分析表明,MT对自发成熟的CEOs的GVBD和PB1有显著的推后作用,与对照组相比,处理组的GVBD和PB1分别被推后8～10 h和3～4 h;③0.1 g/L和0.02 g/L两有效浓度的MT还能显著抑制促性腺激素(FSH)诱导的HX阻滞的CEOsGVBD的发生(P＜0.05),对PB1的排出虽有一定的抑制作用,但没有统计学意义;④MT和次黄嘌呤(HX)对CEOs的自发成熟有协同抑制作用(P＜0.01),但在裸卵(DO)自发成熟的阻滞中没有协同效应.结论:MT是调节哺乳动物卵母细胞成熟的重要激素之一,其作用机制可能是通过卵丘细胞实现的.     

桑枝提取物及抗炎作用研究

桑支（Ramulus mori)乙醇提取物经不同有机溶剂萃取,浓缩得到石油醚提取物（I）,乙酸乙酯提取物（Ⅱ）和正丁醇提取物（Ⅲ）三部分,分别进行定性分析。并灌胃给药进行抗炎实验,结果显示,I和Ⅲ的0.30g/kg组对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用,I的0.15g/kg组有明显的抑制毛细血管通透性的作用。     

油茶籽壳乙酸乙酯提取物对HepG2抗增殖作用及机制研究

本研究探讨不同浓度的油茶籽壳乙酸乙酯提取物对Hep G2细胞的增殖抑制作用,及其诱导细胞凋亡的机制。以油茶籽壳乙酸乙酯提取物为原材料,以Hep G2细胞为研究对象,采用CCK-8法测定油茶籽壳乙酸乙酯提取物对Hep G2细胞的抗增殖作用;采用流式细胞术和荧光定量PCR分别检测油茶籽壳乙酸乙酯提取物对Hep G2细胞的周期阻滞情况及相关凋亡基因(Survivn,Bcl-2,Bax和caspase-3)的表达水平。结果表明:油茶籽壳乙酸乙酯提取物对Hep G2细胞具有显著的增殖抑制作用,且在一定浓度范围内62.5~250μg/m L具有剂量依耐性;Hep G2细胞经一定浓度提取物50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L诱导处理24 h后,发生G_0/G_1期阻滞,且使Survivin及Bcl-2的表达降低,Caspase-3及Bax的表达上升,导致细胞发生凋亡。     

金耳子实体体外抗肿瘤和免疫活性部位的筛选研究

为系统地筛选金耳子实体的活性部位,本论文首次采用系统溶剂法分别用氯仿、乙酸乙酯和乙醇等极性不同的有机溶剂依次提取,残渣风干后再分别用冷水(80℃)、热水(100℃)、3%草酸铵和5%氢氧化钠依次提取,并对各提取物进行了体外抗肿瘤和免疫活性的测试。体外抑制肿瘤细胞增殖模型试验结果表明,氯仿提取物对肿瘤细胞株L1210和SW 620的抑制作用效果最好(P<0.05);小鼠脾淋巴细胞的体外免疫增殖试验结果表明,冷水提取物和热水提提取物的刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖活性相当,仅次于氢氧化钠提取物的活性,草酸铵提取物的活性最差(P<0.05)。     

黄芪、何首乌、女贞子、菟丝子混合提取物对体外培养毛囊生长的影响及药理作用研究

目的:通过体内外实验探讨黄芪、何首乌、女贞子、菟丝子混合中药提取物对毛囊增殖的影响作用以及其作用机理。方法:通过体外培养的C57BL/6小鼠毛囊器官模型观察不同浓度中药提取物对毛囊生长的影响;采用MTT法测定不同浓度中药提取物对毛乳头增殖的影响;蛋白免疫印迹法(Western Blot)和ELISA检测中药提取物对毛乳头细胞分泌肝细胞生长因子(HGF)的影响。结果:中药提取物能够刺激体外培养的小鼠毛囊的生长,800μg/mL浓度的促进作用最强;160μg/mL中药提取物对毛乳头细胞的增殖作用最强,与米诺地尔、齐墩果酸阳性对照存在显著性差异(P0.05)。而且,药提取物促进了毛乳头细胞分泌HGF。结论:黄芪、何首乌、女贞子、菟丝子混合中药提取物在促进毛发生长中起到重要作用,促进毛乳头细胞增殖和分泌HGF是促进毛囊生长的可能性药理机制。     

硬毛粗盖孔菌子实体提取物抑制H_(22)荷瘤小鼠肿瘤活性研究

本文对硬毛粗盖孔菌子实体不同提取物的抗肿瘤活性进行筛选。通过建立H_(22)荷瘤小鼠肿瘤移植模型,研究硬毛粗盖孔菌子实体的石油醚提取物、二氯甲烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物以及水提取物等5种提取物的高、中、低剂量组对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用,并对其H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤率、体质量、胸腺指数、脾脏指数、肝脏指数、肾脏指数进行了考察。对小鼠肿瘤、脾脏、肾脏进行了组织病理学检查,对血清中的细胞因子IL‐2、IL‐4、IFN‐γ及TNF‐α的含量进行测定。结果表明:各组分均有抑瘤效果,其中乙酸乙酯提取物中剂量组(1 000mg/kg)抑瘤效果最佳,与阴性对照组比较有极显著差异(P0.01),并且这组的H_(22)荷瘤小鼠血清中白介素‐2的含量显著增加,同时肿瘤细胞通过HE染色后,可观察到出现坏死面积增大,与抑制肿瘤活性具有相关性。     

非洲马铃果果籽提取物的体外抗肿瘤活性

分别以不同极性有机溶剂(正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮与乙醇)对非洲马铃果的果籽进行索氏提取,测定提取率;以人宫颈癌细胞(Hela Cells)与人肝癌细胞(SMMC-7721细胞株)为对象,对5种有机相的非洲马铃果果籽提取物进行体外细胞毒理性研究,测定提取物抗肿瘤活性。结果表明,马铃果果籽丙酮提取物对SMMC-7721癌细胞具有显著的增殖抑制活性,同时也表现出对Hela癌细胞较高程度的抑制作用;正己烷提取物对Hela癌细胞具有相对较明显的抑制活性,对SMMC-7721癌细胞药理活性不显著;其他有机相提取物几乎没有肿瘤细胞增殖抑制活性。     

褪黑素对FSH诱导的小鼠卵母细胞体外成熟的影响

通过次黄嘌呤(HX)阻滞、FSH诱导体外培养模型研究了褪黑素(MT)对小鼠卵母细胞成熟的影响,探讨褪黑素(MT)是否影响小鼠卵母细胞的体外成熟。0.1mg/mL和0.02mg/mL两有效浓度的MT能显著抑制促性腺激素(FSH)诱导的HX阻滞的CEOsGVBD的发生(P<0.05),对PBl的排出虽有一定的抑制作用,但没有统计学意义;MT和次黄嘌呤(HX)对CEOs的自发成熟有协同抑制作用(P<0.01),但在裸卵(DO)自发成熟的阻滞中没有协同效应。MT是调节哺乳动物卵母细胞成熟的重要激素之一,其作用机制可能是通过卵丘细胞实现的。     

瑞戈非尼抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的研究

目的:利用裸鼠皮下成瘤动物模型及裸鼠肝脏原位多发与弥散模型,探索新型分子靶向药物瑞戈非尼对三阴性乳腺癌MDA-MB-231增殖的抑制作用,确定其分子机制。方法:培养获得人高侵袭性三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,经BALB/c裸鼠皮下注射形成皮下肿瘤,或经肝门静脉注射形成肝脏多发、弥散的肿瘤模型。给予瑞戈非尼灌胃给药治疗,3周后解剖,测量肿瘤体积并称重;或进行PET/CT检测,对核素强度、散发肿瘤占肝脏面积进行定量。通过定量PCR(q PCR)实验验证上皮-间质转化标志物与转移、侵袭相关标志物的表达水平。结果:在裸鼠皮下成瘤模型以及裸鼠肝脏原位多发与弥散肿瘤模型中,瑞戈非尼隔日灌胃给药持续3周能够显著抑制MDA-MB-231的增殖;皮下肿瘤体积、重量,以及裸鼠肝脏PET/CT检测显示瑞戈非尼持续给药组的相对核素强度均明显低于对照组;q PCR实验反映出瑞戈非尼能够抑制MDA-MB-231的上皮-间质转化与转移、侵袭作用。结论:揭示了瑞戈非尼对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231的增殖抑制作用,初步探索了其分子机制,为瑞戈非尼应用于三阴性乳腺癌的治疗提供参考。     

白花蛇舌草豆甾醇对肝癌细胞的体内外抑制作用及对其增殖周期、凋亡的影响

目的:研究白花蛇舌草豆甾醇(stigmasterol from Hedyotis diffusa willd.,SHD)对人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7402的体外抑制作用,对肝癌H22的体内抑制作用及对其增殖周期、凋亡的影响。方法:MTT法评价SHD对人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7402的抑制率变化规律。昆明雄性小鼠60只,随机取10只为正常对照组,余接种H22瘤株,随机分为模型对照组、5-FU阳性对照组(30mg/kg)和高中低剂量SHD给药组(剂量分别为15、30、60mg/kg),腹腔给药10 d后,比较各组瘤重抑制率、H22细胞周期分布、凋亡率。结果:SHD对SMMC-7721、BEL-7402细胞具有体外抑制作用;SHD显著抑制H22肿瘤,增加G0-G1期细胞比例,降低G2/M期细胞比例,促进肿瘤细胞凋亡。结论:SHD在体外、体内均具有抑制肝癌细胞的作用,此作用与阻滞肿瘤细胞增殖周期,促进肿瘤细胞凋亡有关。     

九香虫水煎液主要成分分析及对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

为检测九香虫水煎液对乳腺癌细胞体外增殖的影响及分析其主要成分,通过制备九香虫水煎液,利用MTT法、形态学观察及细胞划痕实验检测九香虫水煎液对人乳腺癌细胞MDA-MB-453及小鼠乳腺癌细胞4T1增殖和迁移的影响,采用GC-MS技术分析九香虫水煎液的主要化学成分。结果表明,九香虫水煎液对人乳腺癌MDA-MB-453及小鼠乳腺癌4T1细胞的体外增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量相关性,IC 50分别为0.034、0.101 g/mL,其对4T1细胞的迁移具有抑制作用。九香虫水煎液对乳腺癌细胞的增殖及迁移抑制作用可能与其中含有具抗肿瘤功效的反丁烯二酸、3,4-二羟基苯甲酸、腺苷、尿苷、棕榈酸等物质相关。     

白花蛇舌草提取物对乳腺癌荷瘤小鼠干预作用的实验研究

目的:明确白花蛇舌草提取物对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤发生发展的干预作用及可能机制,以期为其未来的临床应用提供实验依据。方法:选择12周龄的雄性BALB/c小鼠30只,随机等分成3组:对照组(Control)、乳腺癌荷瘤小鼠组(BC)和乳腺癌荷瘤小鼠行白花蛇舌草药物治疗组(BC+HD)。BC组和BC+HD组小鼠的右侧肩胛骨注射以0.2 m L的MCF-7乳腺癌细胞悬液(细胞浓度为2×10~7/m L),Control组小鼠注射等量的生理盐水。在2周后,对BC+HD组小鼠进行白花蛇舌草的灌胃给药,BC组和Control组小鼠灌以等量的生理盐水。在给药的第21天后,处死全部小鼠,分析小鼠的体重、总摄食量、肿瘤重量和肿瘤体积,使用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法定量分析小鼠血清中的白介素-6(interleukelin-6,IL-6)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量。结果:给药21天后,BC+HD组小鼠体重显著高于BC组(P0.05),总摄食量、肿瘤重量、肿瘤体积、血清IL-6和VEGF的含量均显著低于BC组(P0.05)。结论:白花蛇舌草能够有效改善乳腺癌荷瘤小鼠的营养状况,抑制乳腺癌的发生和发展,可能与其有效降低乳腺荷瘤小鼠血清IL-6和VEGF的含量有关。     

藏波罗花提取物对小鼠耐缺氧作用的研究

采用不同方法建立小鼠常压缺氧模型、亚硝酸钠中毒模型及急性脑缺血性缺氧模型,对藏波罗花提取物的耐缺氧活性进行研究。以0.5%羧甲基纤维素钠溶液为空白对照、盐酸普萘洛尔为阳性对照药,设置藏波罗花60%乙醇提取物、95%乙醇提取物的5g/kg、10g/kg、15g/kg三个剂量的给药组,通过观察小鼠存活时间,研究藏波罗花提取物对小鼠缺氧损伤的保护作用。结果显示,与空白对照组相比较,藏波罗花提取物各剂量组均能明显延长小鼠在常压缺氧、亚硝酸钠中毒及急性脑缺血性缺氧条件下的存活时间(P<0.05),表明藏波罗花提取物具有一定的耐缺氧活性,可提高实验小鼠的耐缺氧能力。     

合欢皮提取物抑制血管生成的体内药效学研究

为了探讨合欢皮提取物体内对血管生成的抑制作用。本文采用MTT法和Matrigel plug方法考察合欢皮提取物对人血管内皮细胞(HMEC)增殖和体内Matrigel胶小管形成的影响,运用Lewis肺癌转移小鼠模型,观察合欢皮提取物对小鼠Lewis肺癌的疗效。结果表明合欢皮提取物可明显抑制HMEC细胞的体外增殖(IC50为30μg/mL),并且呈明显的剂量依赖性,同时具有抑制Matrigel plug中的血管新生的作用。合欢皮提取物还能够明显抑制Lewis肺癌肿瘤细胞生长,减少转移病灶。提示合欢皮提取物具有明显抑制血管生成的作用,有可能成为有效的血管生成抑制剂。     

骆驼刺提取物体内外抗肿瘤作用及机制初探

为了探讨骆驼刺提取物在体内外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,应用MTT法考察骆驼刺提取物在体外对人胃癌BGC-823、人食道癌Eca-109、人结肠癌HT-29和人肝癌Hep G2细胞株的抑制作用。为明确其体内抗肿瘤疗效,建立CT26结肠癌小鼠模型,通过比较各组小鼠的肿瘤增殖率、生长曲线和抑瘤率等指标考察体内抑瘤效果。结果表明骆驼刺提取物对Hep G2和HT-29的IC50值小于1.5 mg/m L,在体内的抗肿瘤药效实验中仅高剂量组表现出明显的抗肿瘤活性。证明骆驼刺提取物对Hep G2和HT-29表现出明显的体外抑瘤作用,对CT26结肠癌实体瘤模型有一定敏感性。     

香菇C91-3菌LP1蛋白在小鼠体内的 抗肿瘤免疫作用

目的通过观察注射C91-3菌LP1蛋白对H22荷瘤小鼠的影响,探讨LP1蛋白在小鼠体内的抗肿瘤免疫作用。方法使用鼠肝癌H22细胞接种于BALB/C小鼠右腋下,建立小鼠H22实体瘤模型。取上述建立成功的H22实体瘤模型小鼠64只,体重20~25g;分为A、B两组,每组32只。A组再分为LP1实验Ⅰ组(300μg/只)、LP1实验Ⅱ组(100μg/只)、PBS对照组和顺铂对照组(4 mg/kg),每组8只,各组隔日给药1次,共给药5次。A组用于检测LP1蛋白作用后在小鼠体内对H22肿瘤的抑瘤作用、血清中IL-2含量以及脾中NK细胞活性等生理指标。B组按同样的方法分组,隔日给药1次,直至荷瘤小鼠死亡,记录各组小鼠的生存期,计算生命延长率。结果 LP1蛋白可以延长H22荷瘤小鼠的生存期,LP1实验组生存期达16.6d,较PBS对照组13.2d有明显提高。LP1蛋白在体内对H22实体瘤具有一定的抑制作用,对H22实体瘤进行病理切片、HE染色观察后发现,LP1实验组中H22肿瘤组织较PBS对照组肿瘤组织内出现炎性细胞浸润,局部可见坏死现象。使用ELISA法和LDH法分别检测H22荷瘤小鼠血清中IL-2含量以及NK细胞活性,发现LP1实验组IL-2水平和NK细胞活性较PBS对照组和顺铂对照组显著提高。结论 LP1蛋白可延长H22荷瘤小鼠的生存期限,提高小鼠的生存质量,具有一定的肿瘤抑制作用。其抑制作用主要是由增强H22荷瘤小鼠自身免疫力,提高NK细胞活性,发挥机体自身肿瘤免疫功能造成的。     

松生拟层孔菌乙醇提取物抗肿瘤作用及其机制的实验研究

目的:探讨松生拟层孔菌抗肿瘤作用及其机制.方法:采用乙醇提取与硅胶柱层析分离,并对其乙醇粗提物、石油醚相、乙酸乙酯相提取物分别进行了体内(小鼠移植性肿瘤),外(采用Alamar Blue法)抗肿瘤活性研究.结果:松生拟层孔菌的乙醇粗提物,石油醚相,乙醇乙酯相在100ug/ml时,体外对NCI-H460细胞株具有增殖抑制作用,100mg/kg时对在体的H22瘤细胞具有显著的抗肿瘤活性,并能诱导H22瘤细胞凋亡,显著提高荷瘤鼠血清中IL-2、TNF-a的水平.结论:松生拟层孔菌乙醇提取物具有抗肿瘤作用,并能增强机体的免疫功能.