镉诱导小鼠睾丸细胞凋亡与Caspase-3、Bcl-2和Bax mRNA的表达

一个月大雄性小鼠24只,随机分为6组,用30 μmol/kg CdCl2作用小鼠睾丸不同的时间(3 h、6 h、12 h、18 h、24 h)后,利用DNA电泳、免疫组化和半定量RT-PCR技术,分析生殖细胞凋亡过程中三种关键物质Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白和mRNA的表达量变化.结果显示:1) DNA各组 (除对照组外)均出现不同程度断裂.2)Caspase-3蛋白表达量一直上升,与对照组相比差异极显著;Bax蛋白在12 h前一直上升,与对照组相比差异显著,12 h后又开始下降,且与对照组相比无显著差异;Bcl-2蛋白在下降,与对照组相比差异显著.3)RT-PCR结果显示Caspase-3基因表达量减少;Bax基因表达量逐渐上升;Bcl-2基因表达量波动很大.综上所述,Caspase-3、Bcl-2和Bax三个基因可能参与了镉应激状态下小鼠睾丸组织细胞的凋亡过程.     

桃叶珊瑚苷对冠心病大鼠Nrf2介导的铁死亡途径的影响

摘要 目的：探讨桃叶珊瑚苷（AU）对冠心病（CHD）大鼠的治疗作用及其对核因子红系2相关因子2（Nrf2）介导的铁死亡途径的影响。方法：将大鼠分为NC组、CHD组、L-AU组、M-AU组、H-AU组和ML385组,每组12只大鼠。NC组为正常饲料喂养的对照大鼠,其他组均为高脂饮食联合腹腔注射垂体后叶素诱导的CHD模型大鼠。NC组和CHD组大鼠灌胃0.3%羧甲基纤维素钠（CMC）,L-AU组、M-AU组和H-AU组大鼠灌胃20、40和80 mg/kg/d的桃叶珊瑚苷,ML385组大鼠灌胃80 mg/kg/d的桃叶珊瑚苷并腹腔注射30 mg/kg/d Nrf2抑制剂ML385,共给药4周。分别检测各组大鼠的心功能指标[射血分数（EF）和短轴缩短率（FS）]、血清指标[肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C）和游离脂肪酸（FFA）]、心肌组织氧化应激指标[还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）]和心肌组织Fe²⁺含量。通过苏木素伊红（HE）染色观察大鼠心肌形态。通过Western blot检测大鼠心肌组织中Nrf2、Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）、血红素加氧酶-1（HO-1）、NADPH：醌氧化还原酶-1（NQO-1）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、铁蛋白重链1（FTH1）和膜铁转运蛋白1（FPN1）的蛋白水平。结果：与NC组比较,CHD组大鼠的EF和FS水平降低,CK-MB和LDH水平升高,心肌出现明显损伤;TC、TG、LDL-C、FFA和MDA水平升高,HDL-C和GSH水平降低;Nrf2、HO-1、NQO-1、GPX4、FTH1和FPN1蛋白水平降低,Keap1蛋白水平升高,Fe²⁺含量升高（P<0.05）。与CHD组比较,L-AU组、M-AU组和H-AU组大鼠的EF和FS升高,CK-MB和LDH水平降低,心肌形态明显改善;TC、TG、LDL-C、FFA和MDA水平降低,HDL-C和GSH水平升高;Nrf2、HO-1、NQO-1、GPX4、FTH1和FPN1蛋白水平升高,Keap1蛋白水平降低,Fe²⁺含量降低（P<0.05）。与H-AU组比较,ML385组大鼠的EF和FS降低,CK-MB和LDH水平升高,心肌损伤加重,TC、TG、LDL-C、FFA和MDA水平升高,HDL-C和GSH水平降低;Nrf2、HO-1、NQO-1、GPX4、FTH1和FPN1蛋白水平降低,Keap1蛋白水平升高,Fe²⁺含量升高（P<0.05）。结论：桃叶珊瑚苷表现出了良好的抗冠心病作用,其机制与抑制Nrf2介导的铁死亡途径有关。     

假孕大鼠黄体萎缩过程中凋亡相关基因Fas/FasL, Bax/Bcl-2和Caspase-3的表达

以促性腺激素诱导的假孕大鼠为模型, 用免疫组织化学、原位杂交、蛋白质印迹(Western blotting)和原位末端标记(TUNEL)方法研究了细胞凋亡相关分子Fas/FasL, Bax/Bcl-2 和Caspase-3在不同时期黄体中的表达. 结果显示: 排卵后第8天前黄体内没有凋亡信号, 第14天开始出现凋亡信号, 持续到第21天; Fas 在黄体中的各个时期都有表达, 随黄体发育其表达水平增加. FasL 在黄体各个时期都有表达, 第14天明显上升, 到第21天达到高峰; Bcl-2 随黄体的形成、维持和萎缩过程其表达由强到弱, 到第21天基本不表达; 而Bax 的表达正相反, 排卵后第2天几乎不表达, 第8天表达明显增加, 到第21天表达最高; Caspase-3持续表达于各期黄体中, 并随黄体的发育其表达由弱到强, 第2天表达最低, 到第21天表达最高. 结果提示, 大鼠黄体萎缩后期发生细胞凋亡.     

白藜芦醇后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤海马CA1区Bax、Bcl-2的影响

摘要 目的：探讨白藜芦醇后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤Bax、Bcl-2表达的影响。方法：清洁级雄性SD大鼠60只随机分为假手术组（n=12）、I/R组（n=12）、白藜芦醇组（n=36）,白藜芦醇组按不同剂量分为低剂量、中剂量、高剂量组（10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg）,每组12只。假手术组：仅暴露大鼠颈外动脉,不做缺血处理;I/R组：采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型（缺血2 h,再灌注24 h）;白藜芦醇组：造模方法同I/R组,在大鼠缺血2h后,将不同剂量白藜芦醇腹腔注射入大鼠体内,比较各组SD大鼠神经功能缺损评分、采用Western blotting法、免疫组化法对大鼠脑组织缺血侧海马CA1区Bax和Bcl-2表达进行比较。结果：白藜芦醇低、中、高剂量组神经功能缺损评分均低于I/R组,随着白藜芦醇剂量的增加,神经功能缺损评分逐渐降低,其中白藜芦醇高剂量组神经功能缺损评分降低最为明显;白藜芦醇组与I/R组相比,不同剂量白藜芦醇组Bax表达逐渐减少,而Bcl-2表达明显增加,其中以白藜芦醇高剂量组改变最为明显。结论：高剂量白藜芦醇可以降低大鼠神经功能缺损评分,减轻脑缺血再灌注损伤,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与Bax、Bcl-2的表达有关。     

藏花素对H_2O_2诱导PC12细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响

本文通过观察藏花素对H2O2诱导的PC12细胞的保护作用和对Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响,探讨藏花素对阿尔茨海默病细胞模型保护作用的机制。MTT法及LDH活性测定观察藏花素对PC12细胞模型的影响,RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表达水平,Western blot检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。藏花素预保护浓度在0.625μM和5μM之间,细胞存活率随着藏花素浓度的升高而升高;藏花素组和VE组与模型组相比,Bcl-2 mRNA和蛋白表达增加(P0.05),Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低(P0.05)。研究结果表明:藏花素可能是通过上调Bcl-2的表达,从而介导PC12细胞发挥抗氧化和细胞凋亡的生物学功能。     

甲基苯丙胺中毒大鼠相关脑区Caspase-3 和Bcl-2 表达的研究

目的:研究凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2在甲基苯丙胺神经毒性机制中所发挥的作用。方法:40只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10)和实验组(又分为3个亚组,分别为注射1天后、4天后、7天后,n=10)。实验组给予20mg/kg的甲基苯丙胺腹腔注射,对照组给予相同剂量的生理盐水注射。用免疫组化检测中毒大鼠相关脑区Caspase-3和Bcl-2的表达,用图像分析技术对检测结果进行分析。结果:Caspase-3在中毒大鼠不同脑区表达逐渐增加并可见明显的阳性信号;Bcl-2在中毒大鼠不同脑区表达逐渐减弱。结论:凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2参与了甲基苯丙胺神经毒性机制。     

甲基苯丙胺中毒大鼠相关脑区Caspase-3和Bcl-2表达的研究

目的：研究凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2在甲基苯丙胺神经毒性机制中所发挥的作用。方法：40只健康雄性SD大鼠随机分为对照组（n=10）和实验组（又分为3个亚组,分别为注射1天后、4天后、7天后,n=10）。实验组给予20mg/kg的甲基苯丙胺腹腔注射,对照组给予相同剂量的生理盐水注射。用免疫组化检测中毒大鼠相关脑区Caspase-3和Bcl-2的表达,用图像分析技术对检测结果进行分析。结果：Caspase-3在中毒大鼠不同脑区表达逐渐增加并可见明显的阳性信号;Bcl-2在中毒大鼠不同脑区表达逐渐减弱。结论：凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2参与了甲基苯丙胺神经毒性机制。     

藏红花对肝纤维化大鼠肝脏组织中Caspase-3，Bcl-2 表达的影响

目的:研究藏红花(Saffron)对肝纤维化大鼠肝组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达的影响。方法:45只雄性SD大鼠随机均分为3组:正常组、模型组、藏红花组,除正常组外,另外两组给予40%四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射制备肝纤维化大鼠模型,在造模的同时,藏红花组给予藏红花溶液5 m L·kg~(-1)·d~(-1)灌胃。8周后处死大鼠,留取肝脏组织,通过Masson染色观察大鼠肝纤维化的形成,免疫组化方法检测肝组织中Caspase-3及Bcl-2蛋白表达。结果:模型组大鼠肝纤维化程度最重,藏红花组较模型组纤维化程度轻,正常组大鼠肝脏无纤维化。与模型组比,藏红花组Caspase-3在肝实质内呈弱阳性表达,而纤维间隔内表达增加;Bcl-2的表达明显减少(P0.05),正常组Caspase-3及Bcl-2几乎无表达。结论:藏红花具有抗肝纤维化作用,其机制可能与调节Caspase-3,Bcl-2的表达有关。     

Cct6a对鸡卵泡膜细胞Bcl-2和Caspase-3表达的影响

Cct6a基因编码CCT（chaperonin containing tailless complex polypeptide）的ζ亚基,属Ⅱ型伴侣素,是一种广泛存在于细胞浆中的异型寡聚蛋白,在肌动蛋白、微管蛋白的组装和折叠中发挥着重要的作用. Cct6a在鸡性成熟和卵泡发育中发挥重要作用,然而其在卵泡发育中的分子机制尚不十分清楚. 本研究采用qRT-PCR分析了Cct6a在鸡卵泡细胞中的表达,结果表明,Cct6a在鸡卵泡膜细胞中高表达,并与卵泡体积的增大相关. 利用shRNA对鸡卵泡膜细胞中的Cct6a基因进行了敲低分析,转染48 h后鸡卵泡膜细胞中Bcl-2基因的表达量显著降低（P=0.0429）,Caspase-3基因的表达无变化;过表达Cct6a后的鸡卵泡膜细胞中Bcl-2基因的mRNA表达量有增高趋势,Caspase-3基因的mRNA表达量呈下调趋势. 因此,在鸡卵泡膜细胞中Cct6a影响Bcl-2基因表达,是否Cct6a可影响Caspase-3基因表达尚需进一步实验证明.     

壳寡糖对肝癌细胞SMMC-7721中Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的检测壳寡糖对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制效果及对凋亡调控蛋白Bcl-2和Caspase-3的影响。方法采用噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度壳寡糖对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,并利用荧光Hoechst33258染色法检测细胞凋亡状况。最后通过免疫细胞化学方法研究壳寡糖对肝癌细胞SMMC-7721中Bcl-2和Caspase-3表达的影响。结果壳寡糖能够抑制SMMC-7721细胞增殖,并且促进SMMC-7721细胞的凋亡,并且壳寡糖能够上调促凋亡蛋白Caspase-3的表达和降低抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论壳寡糖对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用,此作用可能是通过促进Caspase-3的表达和抑制Bcl-2的表达来实现的。     

Expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in Nerve Tissues of Rats Chronically Exposed to 2,5-hexanedione

Occupational exposure and experimental intoxication with n-hexane or its metabolite 2,5-hexanedione (HD) produce a central-peripheral neuropathy. However, the mechanism remains unknown. We hypothesized that HD affected the expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in the central nervous system (CNS) and the peripheral nervous system (PNS). Male adult Wistar rats were administered by intraperitoneal injection at a dosage of 200 or 400 mg/kg HD, five days per week for 8 weeks. Samples of the cerebral cortex, cerebellum, spinal cord and sciatic nerves were collected and examined for Bcl-2, Bax and Caspase-3 expression using Western blotting. Subchronic exposure to HD resulted in significantly increased expression of both anti-apoptotic protein Bcl-2 and pro-apoptotic protein Bax and Caspase-3 in cerebral cortex and cerebellum, which exhibited a dose-dependent pattern. Though little change was detected in spinal cord, our results showed that the expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 was markedly enhanced in the sciatic nerves. These findings suggested that the changes of apoptosis-related protein level in rat nerve tissues were associated with the intoxication of HD, which might be involved in early molecular regulatory mechanism of apoptosis in the HD-induced neuropathy.     

Expression of apoptosis-related genes Fas/FasL,Bax/Bcl-2 and Caspase-3 in rat corpus luteum during luteal regression

Using immunohistochemistry, in situ hybridization, Western blot and TUNEL methods, we have studied the expression of Fas/FasL, Bcl-2/Bax and caspase-3 in the corpora lutea (CL) at various stages of pseudopregnant rat induced by injection of PMSF/hCG. The results showed that no apoptotic signal could be observed until Day 14 after hCG injection. Fas weakly expressed in the CL at all the stages increased when luteolysis took place. FasL signal increased dramatically on Day 14 and reached the maximum level on Day 21. The expression of Bcl-2 and Bax was detected in a time-dependent manner. At the early stage of CL development, Bcl-2 expression was stronger, while Bax was low. The expression of Bcl-2 and Bax in the CL was completely reversed. Caspase-3 antigen could be detected throughout all the phases of CL development in a time-dependent fashion, low on Day 2 and reaching the maximum on Day 21. These results suggest that luteal regression at the late phases may be related to cell apoptosis.     

鱼藤酮致帕金森大鼠的脑黑质中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达改变

目的研究鱼藤酮致帕金森病（PD）大鼠中脑黑质凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的改变。方法Wistar大鼠每日颈背部皮下注射鱼藤酮2mg（kg·d）（3～6周）造模,依据所建立的评分体系记录动物行为变化,在行为学有记分并停止给鱼藤酮4、10d时,中脑黑质病理切片免疫组化染色比较黑质区域Bcl-2、Bax的表达。结果在有行为学记分4d时,记4分和8分的大鼠中脑黑质Bcl-2表达均显著减少;所有PD大鼠中脑黑质Bax表达均显著增加;Bcl-2/Bax比率均显著减少;有记分4d时,行为学记分与Bcl-2/Bax比值成负相关性。结论细胞凋亡参与了鱼藤酮帕金森模型大鼠黑质多巴胺神经细胞的损伤。     

Expression of apoptosis-related genes Fas/FasL, Bax/Bcl-2 and Caspase-3 in rat corpus luteum during luteal regression

Corpus luteum (CL) is a transient endocrine organ formed from the ovulated follicle. CL produces progesterone and estrogen that are important in preparing the uterine environment for implantation and maintaining gestation. Pregnancy maintains the CL function; otherwise, CL re-gresses rapidly. Cycling formation and regression of CL is essential for initiation of new follicular growth and differentiation, and subsequently ovulation and luteinization[1]. Luteal regression could be divided int…     

海藻色素糖蛋白对肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响

目的：研究麒麟菜海藻色素糖蛋白（SPG）对肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响。方法：将50只皮下接种H22肝癌细胞株的小鼠随机分为5组,每组10只。高、中、低剂量组分别每天经口灌胃给予100、50、10mg/kg的SPG,肿瘤对照组灌胃生理盐水,连续10d。环磷酰胺组隔天腹腔注射环磷酰胺20mg/kg.bw。取肝癌组织用MTT法测定各组肝癌细胞增殖活性,免疫组化法检测各组肝癌组织Caspase-3和Bax蛋白表达水平。结果：高剂量组Caspase-3和Bax蛋白表达率分别为40.20%和38.10%,而肿瘤对照组分别为5.00%和4.68%,差异均有显著性（P〈0.05）。高剂量SPG组和肿瘤对照组的肝癌细胞增殖活性分别为0.711±0.028和1.135±0.032,差别有显著性（P〈0.05）。结论：SPG可促进肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达,诱发肝癌细胞凋亡。     

海藻色素糖蛋白对肝癌细胞Caspase-3 和Bax 蛋白表达的影响

目的:研究麒麟菜海藻色素糖蛋白(SPG)对肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响。方法:将50只皮下接种H22肝癌细胞株的小鼠随机分为5组,每组10只。高、中、低剂量组分别每天经口灌胃给予100、50、10mg/kg的SPG,肿瘤对照组灌胃生理盐水,连续10d。环磷酰胺组隔天腹腔注射环磷酰胺20mg/kg.bw。取肝癌组织用MTT法测定各组肝癌细胞增殖活性,免疫组化法检测各组肝癌组织Caspase-3和Bax蛋白表达水平。结果:高剂量组Caspase-3和Bax蛋白表达率分别为40.20%和38.10%,而肿瘤对照组分别为5.00%和4.68%,差异均有显著性(P<0.05)。高剂量SPG组和肿瘤对照组的肝癌细胞增殖活性分别为0.711±0.028和1.135±0.032,差别有显著性(P<0.05)。结论:SPG可促进肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达,诱发肝癌细胞凋亡。     

Involvement of Bcl-2 Family and Caspase-3-Like Protease in NO-Mediated Neuronal Apoptosis

Abstract: To clarify mechanisms of neuronal death in the postischemic brain, we examined whether astrocytes exposed to hypoxia/reoxygenation exert a neurotoxic effect, using a coculture system. Neurons cocultured with astrocytes subjected to hypoxia/reoxygenation underwent apoptotic cell death, the effect enhanced by a combination of interleukin-1β with hypoxia. The synergistic neurotoxic activity of hypoxia and interleukin-1β was dependent on de novo expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and on nitric oxide (NO) production in astrocytes. Further analysis to determine the neurotoxic mechanism revealed decreased Bcl-2 and increased Bax expression together with caspase-3 activation in cortical neurons cocultured with NO-producing astrocytes. Inhibition of NO production in astrocytes by N ^G-monomethyl- l -arginine, an inhibitor of NOS, significantly inhibited neuronal death together with changes in Bcl-2 and Bax protein levels and in caspase-3-like activity. Moreover, treatment of neurons with a bax antisense oligonucleotide inhibited the caspase-3-like activation and neuronal death induced by an NO donor, sodium nitroprusside. These data suggest that NO produced by astrocytes after hypoxic insult induces apoptotic death of neurons through mechanisms involving the caspase-3 activation after down-regulation of BCl-2 and up-regulation of Bax protein levels.