shPLCε通过PPARβ/twist1抑制前列腺癌细胞的迁移和EMT过程

该研究旨在探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C epsilon(phospholipase C epsilon,PLCε)对前列腺癌细胞上皮–间充质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及迁移能力的影响。用LV-sh PLCε感染前列腺癌细胞,q-PCR和Western blot检测PLCε、过氧化物酶体增殖物激活受体β(peroxisome proliferator activated receptorβ,PPARβ)、twist1和EMT相关分子m RNA和蛋白质水平,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果表明,感染LV-sh PLCε可显著下调PLCε、PPARβ和twist1的m RNA和蛋白质水平,同时降低前列腺癌细胞株PC3和DU145的迁移能力以及EMT过程。而在sh PLCε组细胞中加入PPARβ的激动剂能一定程度逆转PPARβ和twist1的下调,促进细胞的迁移能力和EMT过程;而PPARβ的抑制剂产生相反作用。该研究说明,PLCε可通过PPARβ/twist1影响前列腺癌细胞的迁移能力和EMT过程。     

miR-199b-3p通过靶向PLCε抑制前列腺癌细胞的恶性增殖

该研究的目的是确定miR-199b-3p在前列腺癌(PCa)中的表达及其对PCa细胞增殖的影响及作用机制。通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-199b-3p在PCa组织、良性前列腺增生(BPH)组织、PCa细胞及人正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中的表达,并分析其表达与PCa临床病理特征的关系。蛋白质印迹法(Western blot)用于检测磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C epsilon(PLCε)的表达。采用CCK-8法和克隆形成实验对其体外增殖进行评估。Edu测定法用于检测细胞对Edu的吸收。荧光素酶报告实验被用来验证miR-199b-3p和PLCε的靶向结合情况。结果显示,在PCa组织中miR-199b-3p的表达水平明显低于BPH组织,且与临床病理特征中的组织学分期相关。上调miR-199b-3p可以显著抑制PCa细胞的增殖和Edu的摄取能力,PLCε被鉴定为miR-199b-3p的下游靶基因,且其表达量与miR-199b-3p的表达量呈负相关。此外,补救实验结果显示,上调PLCε能够逆转miR-199b-3p在PCa细胞增殖中的抑制作用。总之,miR-199b-3p可通过靶向PLCε 3?非编码区(3?-UTR)负性调控PLCε进而抑制PCa细胞的恶性增殖。     

miRNA-145通过下调ROCK1的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移

目的:研究微小核糖核酸-145(microRNA-145,miRNA-145)对人牙周膜成纤维细胞迁移的影响及其作用机制。方法:体外采用酶消化法培养人牙周膜成纤维细胞并传代,将其分为对照组和转染miRNA-145组,按50 ng/mL的miRNA-145浓度转染人牙周膜成纤维细胞,转染72 h后提取各组蛋白,用Western blot检测miRNA-145的靶蛋白ROCK1的表达水平的相关变化;采用划痕试验检测各组划痕细胞间距离的相关变化,选取划痕后的0 h、24 h、48 h、72 h时间点,测量各时间点划痕细胞间的距离并计算平均值。结果:与对照组相比,转染miRNA-145后,miRNA-145靶蛋白ROCK1的表达量显著降低(p0.05);转染24 h、48 h后细胞间距离的均值大于对照组(p0.05)。结论:miRNA-145可能通过下调ROCK1的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移。     

miR-145通过靶向吞噬和细胞活力蛋白1抑制乳腺癌细胞侵袭

吞噬和细胞活力蛋白1（engulfment and cell motility protein 1,ELMO1）可以促进多种癌细胞的侵袭和转移,但ELMO1的表达是否受miRNA的调控鲜有研究。本研究旨在探讨miR-145与ELMO1表达的相关性,以及miR-145通过结合ELMO1的mRNA对乳腺癌侵袭的影响。通过TargetScan (http://www.targetscan.org/)靶基因预测软件预测与ELMO1的3′UTR结合的miR-145。荧光素酶结果证实两者互补结合。Transwell侵袭结果显示,miR-145组和siELMO1+miR-145组MDA-231乳腺癌细胞穿膜数较对照组分别降低40%（P＜0.05）和79%（P＜0.05）。siELMO1+miR-145组和siELMO1组细胞穿膜数则无显著差异（P>0.05）。结果提示,miR-145通过与ELMO1的mRNA结合抑制细胞侵袭。qRT-PCR显示,低侵袭的MCF-7乳腺癌细胞miR-145的表达量较高侵袭的MDA-435细胞高80%（P＜0.05）,较MDA-231乳腺癌细胞高75%（P＜0.05）,即miR-145与癌细胞侵袭能力呈负相关。Western印迹结果表明,miR-145组ELMO1表达量低于阴性对照组,miR-145 抑制组ELMO1表达量高于抑制剂NC组（P＜0.05）,证明miR-145抑制ELMO1的表达。qRT-PCR显示,过表达miR-145后ELMO1 mRNA含量与对照组无显著差异（P>0.05）。结果提示,miR-145对ELMO1的调控作用通过抑制其翻译实现。F-肌动蛋白聚合实验表明,miR-145组和阴性对照组于20 s和60 s时F-肌动蛋白聚合结果存在明显区别（P＜0.05）。Western 印迹结果表明,miR-145组活化的Rac1表达量较阴性对照组降低60%（P<0.05）,抑制剂NC组活化的Rac1较miR-145 抑制组降低55%（P<0.05）;miR-145组磷酸化的整合素β1较对照组于15 min时降低42%（P<0.05）,于30 min时降低31%（P<0.05）。由此得出的miR-145过表达显著促进乳腺癌细胞F-肌动蛋白聚合、Rac1活化和整合素β1磷酸化结论。综上所述,miR-145通过靶向ELMO1的 mRNA抑制ELMO1翻译,从而抑制乳腺癌的侵袭。     

miR-145通过靶向吞噬和细胞活力蛋白1抑制乳腺癌细胞侵袭

吞噬和细胞活力蛋白1（engulfment and cell motility protein 1,ELMO1）可以促进多种癌细胞的侵袭和转移,但ELMO1的表达是否受miRNA的调控鲜有研究。本研究旨在探讨miR-145与ELMO1表达的相关性,以及miR-145通过结合ELMO1的mRNA对乳腺癌侵袭的影响。通过TargetScan (http://www.targetscan.org/)靶基因预测软件预测与ELMO1的3′UTR结合的miR-145。荧光素酶结果证实两者互补结合。Transwell侵袭结果显示,miR-145组和siELMO1+miR-145组MDA-231乳腺癌细胞穿膜数较对照组分别降低40%（P＜0.05）和79%（P＜0.05）。siELMO1+miR-145组和siELMO1组细胞穿膜数则无显著差异（P>0.05）。结果提示,miR-145通过与ELMO1的mRNA结合抑制细胞侵袭。qRT-PCR显示,低侵袭的MCF-7乳腺癌细胞miR-145的表达量较高侵袭的MDA-435细胞高80%（P＜0.05）,较MDA-231乳腺癌细胞高75%（P＜0.05）,即miR-145与癌细胞侵袭能力呈负相关。Western印迹结果表明,miR-145组ELMO1表达量低于阴性对照组,miR-145 抑制组ELMO1表达量高于抑制剂NC组（P＜0.05）,证明miR-145抑制ELMO1的表达。qRT-PCR显示,过表达miR-145后ELMO1 mRNA含量与对照组无显著差异（P>0.05）。结果提示,miR-145对ELMO1的调控作用通过抑制其翻译实现。F-肌动蛋白聚合实验表明,miR-145组和阴性对照组于20 s和60 s时F-肌动蛋白聚合结果存在明显区别（P＜0.05）。Western 印迹结果表明,miR-145组活化的Rac1表达量较阴性对照组降低60%（P<0.05）,抑制剂NC组活化的Rac1较miR-145 抑制组降低55%（P<0.05）;miR-145组磷酸化的整合素β1较对照组于15 min时降低42%（P<0.05）,于30 min时降低31%（P<0.05）。由此得出的miR-145过表达显著促进乳腺癌细胞F-肌动蛋白聚合、Rac1活化和整合素β1磷酸化结论。综上所述,miR-145通过靶向ELMO1的 mRNA抑制ELMO1翻译,从而抑制乳腺癌的侵袭。     

补骨脂素抑制膀胱癌T24细胞增殖和迁移的作用及机制研究

目的探讨补骨脂素对人膀胱癌T24细胞存活率、细胞周期、细胞凋亡和迁移的影响及其分子机制。 方法分别用细胞培养液、3‰二甲基亚砜（DMSO）和不同浓度（10、30、50、100 μg/mL）补骨脂素处理膀胱癌细胞分成对照组、DMSO组和补骨脂素组,CCK-8检测细胞存活率。流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。划痕实验检测划痕愈合率。RT-qPCR法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和蛋白激酶B （AKT） mRNA表达水平、Western blot法检测PI3K和AKT蛋白的表达及磷酸化情况。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与DMSO组比较,除10 μg/mL补骨脂素作用24 h外,其余浓度补骨脂素作用不同时间的细胞存活率随着补骨脂素浓度增高、作用时间延长而逐渐降低（P < 0.05）。与DMSO组比较,30、100 μg/mL补骨脂素干预24 h后,G1期细胞比例增多,G2/M期比例减少,细胞凋亡率[（9.16±0.97）%、（15.45±1.57）%比（1.02±0.36）%]升高,划痕愈合率[24 h：（45.00±3.44）%、（27.60±2.21）%比（66.10±2.61）%,48 h：（70.00 ± 3.40）%、（45.17±2.44）%比（85.17±3.85）%]降低,PI3K、AKT mRNA表达以及PI3K、AKT蛋白表达水平和磷酸化水平均降低（P均< 0.05）。 结论补骨脂素降低膀胱癌细胞存活率、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡和抑制细胞迁移,其机制可能与下调PI3K、AKT mRNA、蛋白表达及磷酸化水平有关。     

PLCε通过GLS/p-mTOR途径促进膀胱癌细胞T24生存

谷氨酰胺对于细胞的代谢和生长十分重要,也是血液中含量最丰富的氨基酸,且肿瘤的代谢特征之一就是谷氨酰胺成瘾。该研究探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶PLC epsilon(phospholipase C epsilon,PLCε)是否通过谷氨酰胺酶(glutaminase,GLS),调节膀胱癌细胞T24自噬,促进膀胱癌细胞生存。首先通过数据库Su Multi-cancer Statistics、Sanchez-Carbayo Bladder 2和细胞实验分析PLCε在膀胱癌中表达情况。结果表明,PLCε在膀胱癌中高表达。并通过LV-shPLCε转染膀胱癌细胞T24后,q-PCR和Western blot检测PLCε在膀胱癌细胞T24中的表达情况以及对凋亡和自噬的影响,同时免疫荧光检测细胞内自噬斑点(LC3)的变化。结果显示,敲低PLCε后,Caspase-3/Caspase-8/LC3-Ⅱ表达增加,p62表达降低;流式细胞术结果显示凋亡率增高;免疫荧光发现自噬斑点LC3均增多;GLS和p-mTOR的表达受到抑制。在shPLCε组中添加过表达GLS质粒后,p-mTOR和p62表达增加,LC3-Ⅱ表达降低并且免疫荧光自噬斑点LC3减少;加入敲低GLS质粒后出现相反结果。该研究得出,PLCε通过GLS/p-mTOR抑制膀胱癌细胞T24自噬,促进膀胱癌细胞T24的生存。     

海藻多糖通过下调肝癌细胞Hep3B糖酵解途径抑制细胞增殖和迁移

目的:探讨海藻多糖(algal polysaccharides,AP)对肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移的影响及其可能的作用机制,为治疗肝癌提供新的思路。方法:(1)比较正常细胞与癌细胞中糖酵解(embden-meyerhof-parnas,EMP)途径的表达差异,用紫外分光光度计比色法检测EMP限速酶酶活力:己糖激酶(hexokinase,HK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK),用乳酸测定试剂盒测定EMP产物:乳酸。(2)AP处理Hep3B后,检测EMP表达水平变化。(3)AP处理细胞后,检测肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移能力及对上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响,方法包括MTT、q PCR和Transwell小室实验。(4)MTT、Transwell和q PCR检测HK抑制剂3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)对肝癌Hep3B细胞的活力和迁移能力及EMT的影响。(5)Western blot和相关试剂盒检测AP与3-BrPA分别处理细胞时,对EMP水平及Akt通路的影响。(6)AP联合3-BrPA处理Hep B3后,检测HK和Akt信号通路表达水平及细胞活力和迁移的变化。结果:(1)癌细胞(Hep3B、He La、SW480)EMP代谢水平均高于正常肝细胞(HL02),其中Hep3B差异最为显著。(2)AP能抑制Hep B细胞EMP代谢水平,且抑制程度随着AP浓度升高而升高,存在浓度依赖性。(3)AP可抑制肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移,且抑制EMT的发生。AP浓度为200mg/ml,处理时间为48h时,生长抑制率达(55±2.8)%,细胞迁移数为对照组的(32±2.9)%;(4)3-BrPA可下调Hep3B细胞HK活性,并抑制细胞活力与迁移,且抑制EMT的发生。200μmol/L 3-BrPA作用细胞48h后,与对照组相比,细胞活性下降了(52±5.8)%(P0.001),细胞迁移数下降了(48±6.1)%(P0.01)。(5)AP和3-BrPA均下调EMP代谢水平,且抑制Akt信号通路。(6)AP与3-BrPA联合处理Hep3B后,HK表达下降,显著抑制Akt信号通路,细胞活性和迁移能力均较AP单用组显著下降(P0.05)。结论:肝癌细胞Hep3B EMP代谢水平高于正常肝细胞,AP可下调Hep3B细胞EMP代谢水平,低EMP代谢水平可能通过下调EMT和Akt信号通路抑制Hep3B的增殖和迁移。当AP和3-BrPA联合应用时,抑制肝癌迁移和增殖效果更明显。     

地高辛通过下调AEG-1表达抑制人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭

本研究旨在观察地高辛对人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。取人胃癌MKN45细胞作为研究对象,采用Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,通过脂质体转染法将星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)sh RNA干扰质粒转染MKN45细胞以构建低表达AEG-1的细胞株,利用Western blot法检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和AEG-1等蛋白的表达变化。结果显示,地高辛可使MKN45细胞迁移率和侵袭率均显著下降(P0.05),下调MMP-9和AEG-1蛋白表达水平(P0.05)以及上调E-cadherin蛋白表达水平(P0.05),上述作用均具有剂量依赖性。经sh RNA干扰AEG-1基因表达后,MKN45细胞中AEG-1蛋白表达水平显著下降(P0.05);同时AEG-1干扰组MKN45细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05),细胞迁移率、侵袭率和MMP-9蛋白表达水平均显著下降(P0.05)。上述结果提示,地高辛可在体外剂量依赖性地抑制人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭,这可能与地高辛抑制AEG-1蛋白表达,继而下调MMP-9蛋白表达和上调E-cadherin蛋白表达有关。     

miR-124和miR-520b下调Eps8表达并抑制HeLa细胞增殖

Eps8是一个多功能的信号分子,参与肌动蛋白重排、受体内吞和肿瘤的发生发展. 为了寻找靶向Eps8的microRNAs (miRNAs)并研究其在宫颈癌中的调控作用,本文采用软件预测获得4个可能调控Eps8表达的miRNAs. 利用双荧光素酶报告系统和Western印迹研究发现,miR-124 和miR-520b结合到人EPS8 mRNA的3′非翻译区(untranslated region, UTR)并有效抑制Eps8蛋白的表达. 进一步细胞存活检测、MTT法和克隆形成实验分析显示,miR-124和miR-520b过表达显著抑制HeLa细胞的生长和增殖.而且,miRNA调节的Eps8下调能提高HeLa细胞对化疗药物顺铂的敏感性. 同时证明,miR-124和miR-520b激活肿瘤抑制基因p53与下游基因p21报告基因转录活性,也相应地上调了p53与p21的蛋白表达. 这些结果提示,miR-124和miR-520b下调癌基因EPS8表达,从而抑制HeLa细胞增殖,负调控宫颈癌细胞生长.     

shPLCε通过下调CDC25A抑制T24细胞的瓦伯格效应

目的:探讨shPLCε对膀胱癌T24细胞瓦伯格效应的影响及其相关机制。方法:(1)慢病毒感染T24细胞,葡萄糖测定试剂盒和乳酸测试盒分别检测细胞葡萄糖利用和乳酸生成情况;q-PCR、Western blot分别检测PLCε、CDC25A及瓦伯格效应相关分子的表达。(2)转染sh CDC25A质粒,q-PCR、Western blot检测CDC25A的表达;Western blot检测瓦伯格效应相关分子的表达情况。结果:(1)慢病毒干扰PLCε后,T24细胞利用葡萄糖和生成乳酸的能力降低,同时下调CDC25A、PKM2、GLUT1、LDHA的表达。(2)干扰CDC25A的表达后可抑制PKM2、GLUT1、LDHA的表达。结论:shPLCε通过下调关键分子CDC25A的表达抑制膀胱癌T24细胞的瓦伯格效应,从而为膀胱癌的治疗提供了新思路。     

miR-346通过靶向调控SRSF10抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖

胶质瘤是最常见的肿瘤之一,预后较差。有研究表明,microRNAs(miRNAs)与包括胶质瘤在内的多种肿瘤有密切联系。然而,miR-346通过靶向调控丝氨酸/精氨酸剪接因子10(serine/arginine splicing factor 10,SRSF10)抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖能力的分子机制目前仍不明确。对GSE165137与GSE139031芯片进行差异表达分析结果显示,miR-346在两个数据集中共同下调,运用CGGA数据库分析显示,miR-346高表达的患者总生存期明显提高(P<0.0001),miR-346的表达随胶质瘤WHO分级升高而降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,miR-346在胶质瘤细胞U251中的表达显著降低(P<0.05),且miR-346过表达质粒转染成功(P<0.05)。Transwell实验,5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)增殖实验和细胞克隆形成结果显示,与对照组相比,过表达miR-346后U251细胞的迁移、侵袭和增殖能力下降(P<0.05)。生物信息学方法预测miR-34...     

澳洲茄碱抑制人膀胱癌5637细胞增殖及其机制研究

[目的]探究澳洲茄碱对人膀胱癌细胞株5637细胞增殖的影响,并初步揭示其相关机制,为膀胱癌治疗提供新的方向。[方法]以人膀胱癌5637细胞为研究对象,将浓度为5、10、20、40、80μmol/L的澳洲茄碱分别作用于细胞24h、48 h、72 h,MTT法计算各组细胞增殖率,据此设置空白对照组、溶剂对照组、以及不同浓度梯度(10、20、40、80μmol/L)的澳洲茄碱处理组作为后续实验分组。24 h后使用显微镜观察细胞形态变化,Western Blotting检测相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达变化情况。[结果] 10μmol/L的澳洲茄碱在24 h时即可显著地抑制5637细胞的增殖,且抑制作用具有时间和浓度依赖性;澳洲茄碱处理后的5637细胞具有细胞凋亡形态学变化; Western Blotting结果表明,在一定浓度范围内,与空白对照组相比,促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达量随澳洲茄碱浓度增大而升高,而抑凋亡蛋白Bcl-2表达量下降,差异均具有统计学意义(P <0. 05)。[结论]澳洲茄碱可抑制人膀胱癌5637细胞增殖,其机制之一是通过调控...     

miR-302通过下调靶基因RAB22A抑制膀胱癌进展

目的:探讨miR-302通过靶向调控RAB22A影响膀胱癌进展的分子机制。方法:采用RT-qPCR检测miR-302在HTB1和RT112膀胱癌细胞系和膀胱内皮细胞系HBdNEC中的表达;以miRNA-NC、miR-302 mimic、miR-302 inhibitor转染细胞,并分为以下几组:NC+control si RNA、miR-302 inhibitor+control si RNA、miR-302 inhibitor+RAB22A si RNA、NC+vector、miR-302 mimic+vector或miR-302 mimic+RAB22A,再通过MTT实验分析膀胱癌细胞的增殖情况,细胞侵袭实验检测细胞侵袭情况,双荧光素酶报告载体检测分析miR-302靶基因,Western blot检测RAB22A在膀胱癌细胞中的表达。结果:HTB1和RT112细胞中miR-302的表达明显低于HBdNEC细胞(P0.05)。miR-302高表达抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭;miR-302低表达时,膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力上升。生物信息学和双荧光素酶报告结果显示RAB22A为miR-302的靶基因。miR-302过表达后,细胞荧光素酶活性显著下降(P0.05),RAB22A表达下调(P0.05);miR-302表达沉默后,细胞荧光素酶活性显著上升(P0.05),RAB22A表达上调(P0.01)。拯救实验显示RAB22A表达沉默可逆转miR-302表达沉默时对膀胱癌细胞增殖和侵袭能力上调的影响;而RAB22A过表达可逆转miR-302过表达对膀胱癌细胞增殖和侵袭的抑制。结论:miR-302可通过抑制靶基因RAB22A的表达,抑制膀胱癌细胞的增殖及侵袭。     

miR-145与肿瘤相关研究及其临床应用

microRNAs(miRs)是一类长约22核苷酸的内源性非编码单链RNA分子,对生长发育、细胞增殖、凋亡乃至肿瘤发生发展等生命过程具有重要作用.其中,miR-145是研究最多的miRs之一,研究发现其在多种肿瘤组织中表达下调.通过与多种靶分子,如OCT4、MUC1等相互作用,miR-145可影响肿瘤细胞的增殖、转移及凋亡等过程.在临床应用方面,多项研究发现,miR-145表达水平与肿瘤患者的诊断及预后具有良好的相关性.此外,其表达水平还与卵巢癌等多种肿瘤的化疗耐药性相关.本文就miR-145对肿瘤的发生发展的作用及影响,以及在临床上诊断、治疗和预后等方面的应用前景做一综述.     

miR-34a-5p通过靶向醛缩酶A抑制肝癌细胞的增殖和迁移

[目的]证明醛缩酶A(ALDOA)在肝癌细胞的增殖和迁移作用并探索miR-34a-5p靶向调控ALDOA的分子机制,为肝癌治疗提供潜在的分子靶标。[方法]分子生物学技术构建了ALDOA表达质粒,蛋白质印迹(Western Blotting)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ALDOA的过表达和敲降效果,CCK-8验证细胞的增殖,划痕实验验证细胞的迁移。[结果]在肝癌细胞中过表达ALDOA能促进肝癌细胞的增殖与迁移(P <0.05),敲降ALDOA后肝癌细胞的增殖与迁移受到抑制(P <0.05),miR-34a-5p是通过靶向结合ALDOA的3’UTR抑制其表达从而抑制肝癌细胞的增殖与迁移(P <0.05)。[结论]miR-34a-5p通过靶向ALDOA抑制肝癌细胞的增殖和迁移。     

过表达miR-498通过下调STAT3抑制类风湿性关节炎患者Th17细胞分化

本文旨在探讨微小RNA-498(miR-498)影响类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Th17细胞分化的作用机制。从50例RA患者和50例对照人群中分别收集外周血,分离PBMCs。流式细胞术检测CD4~+IL-17~+T(Th17)细胞或者CD4~+FOXP3~+T(Treg)细胞比例,并分析Th17/Treg比值。Real-time PCR检测细胞中miR-498和STAT3基因表达,Western blot检测STAT3的蛋白表达,ELISA检测外周血血清或细胞上清中IL-17的浓度。荧光素酶报告基因实验验证miR-498靶向结合STAT3的3’非翻译(3’untranslated region,3’UTR)。miR-498 mimic或/和pc DNA-STAT3瞬时转染CD4~+T细胞,进一步考察miR-498影响Th17细胞分化的机制。结果显示,RA患者的PBMCs中,Th17细胞比例显著高于对照,且Th17/Treg比值也显著高于对照(P0.05)。miR-498低表达而STAT3高表达于RA患者的PBMCs中,且RA患者血清中的IL-17浓度显著高于对照(P0.05)。在转染野生型STAT3报告基因质粒的细胞中转染miR-498 mimic/inhibitor后,荧光酶活性、STAT3的基因和蛋白表达均明显改变(P0.05),但是在转染突变型STAT3报告基因质粒的细胞中转染miR-498 mimic/inhibitor,上述指标没有显著变化(P0.05)。此外,miR-498 mimic转染CD4~+T细胞后,显著降低Th17细胞比例,且细胞分泌IL-17的水平减少(P0.05),而与pcDNA-STAT3共转CD4~+T细胞后,Th17细胞比例明显提高,细胞分泌IL-17的水平增加(P0.05)。以上结果提示,在RA患者CD4~+T细胞中,过表达miR-498靶向下调STAT3,进而抑制Th17细胞分化。     

miR-184通过抑制EPB41L5调控大鼠肾癌细胞增殖及迁移

为了探讨miR-184对肾癌细胞的影响及机制,本研究选取肾癌细胞株786-0细胞,随机分为对照组、空白转染组和miR-184转染组,其中miR-184转染组转染miR-184 mimic,空白转染组转染空白mimic,采用CCK-8细胞增殖实验检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,划痕实验检测各组细胞迁移,Western blotting检测各组EPB41L5蛋白表达。研究结果表明miR-184转染组培养48 h和培养72 h时OD值分别为(0.964±0.103)和(1.011±0.121),明显低于对照组和空白转染组(p<0.05);miR-184转染组培养72 h后细胞凋亡率为(18.22±2.26)%,明显高于对照组和空白转染组(p<0.05);miR-184转染组培养24 h后细胞迁移数为(17.21±3.06)个,明显低于对照组和空白转染组(p<0.05);miR-184转染组细胞EPB41L5蛋白相对表达量为(0.241±0.061),明显低于对照组和空白转染组(p<0.05)。本研究初步表明:miR-184可抑制肾癌786-0细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其可能与其抑制EPB41L5蛋白表达有关。     

腺病毒介导的EMC6基因通过下调FAK信号通路抑制胃癌细胞迁移

内质网膜蛋白复合物亚单位6（endoplasmic reticulum membrane protein complex subunit 6,EMC6）,也称穿膜蛋白93 (transmembrane protein 93, TMEM93)是我们首次报道的一个人类自噬相关分子。EMC6基因进化保守,表达广泛,在胃癌组织中表达下调或缺失。本研究利用构建的重组腺病毒5型EMC6（Ad5-EMC6）载体,感染胃癌细胞系BGC823和SGC7901,分析了其在肿瘤细胞的表达以及抗肿瘤活性。研究证明, Ad5-EMC6能够显著抑制胃癌细胞的克隆形成、细胞划痕修复、以及迁移和侵袭的能力。进一步的研究提示,Ad5-EMC6能够降低胃癌细胞局部黏着斑激酶（FAK）的Y576/577磷酸化水平,FAK下游的基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的蛋白质水平也同时下调。在裸鼠的腹膜扩散模型中,Ad5-EMC6处理组的小鼠腹膜结节数量明显减少或缺失。这些研究数据提示, Ad5-EMC6介导的FAK信号灭活可能是其抑瘤活性的机制之一,其分子机制还需要进一步探讨。