几种不同分离polyA—RNA方法的比较

本实验采用四种方法:(1)冷酚法。(2)琼脂糖凝胶2 B柱层析(3)超速离心。(4)镁离子沉淀,从大鼠肝中分离出poly A RNA。用(1)法提取总RNA,用其他方法分别抽提pRNA,再分别经Oligo(dT)—纤维素柱层析分离出poly A RNA。从A260/A280,A280/A260,A260/A230,比值、收得率、电泳行为作一比较,初步认为:冷酚法所得polg A RNA收得率较好,但有其他RNA;2 B拄层析法收得率最高,可是纯度较差;超离心法仪器昂贵,不宜普及,镁离子沉淀法则是一个操作简便而又适用的方法。     

盐生肉质化植物海马齿(Sesuvium portulacastrum L.)中总RNA提取方法的优化

以海马齿为材料,分别用CrAB法、SDS法、Trizol方法以及改进的CTAB法提取其总RNA,并比较了各RNA的产率、纯度和完整性等.结果表明,改进的CrAB法对海马齿总RNA的提取有较好的效果.所得总RNA的28S、18S和5S条带清晰,A260/A280比值为2.0,A260/A230比值为2.08,RNA产量可达56μg·g-1(FW).经RT-PCR获得了特异条带,说明利用改良的CTAB法从海马齿中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于进一步的分子生物学研究.     

柑橘叶片总RNA的两种提取方法比较

为了简便、快速提取高质量的柑橘(Citrus reticulata Banco)叶片总RNA,采用TRlzol法,对北京天根公司RNAplant Reagent和日本TaKaRa公司RNAiso Reagent两种RNA提取试剂进行比较并适当改进.结果表明:通过琼脂糖凝胶电泳,使用TaKaRa公司试剂提取的总RNA28S和18S条带清晰,紫外分光光度计检测分析A260/A280为1,820,A260,A230为2.088,RNA的浓度为2.840 μg μl-1,用于RT-PCR反应可成功克隆柑橘β-actin看家基因228 bp片段;采用天根公司试剂,琼脂糖凝胶电泳显示RNA带型较模糊,紫外分光光度计检测分析A260/A280为1.464,A260/A230为1.603,RNA的浓度为2.020 μg μl-1,达不到RNA的标准.TaKaRa公司RNAiso Reagent试剂提取的柑橘叶RNA纯度和完整性较好,能用于Northern杂交、cDNA文库的建立及基因克隆等分子生物学实验,为柑橘的进一步分子生物学研究奠定了基础.     

猕猴桃RNA提取与RT-PCR

为了从富含多糖和多酚等物质的猕猴桃幼叶中提取和分离出高质量的RNA,用多个不同品种的猕猴桃叶为材料,比较了3种不同的RNA提取方法所提取的总RNA。结果表明,用胍-酚酸-DEPC法提取的RNA质量最好,提取率达到682.9~780.8μg?g(FW),其R值(A260?A280)接近1.90。用所提取的RNA样品进行RT-PCR,其扩增产物在琼脂糖凝胶上出现明显清晰的扩增cDNA带,说明RNA样品在纯度和浓度上都可以满足PCR等分子生物学实验的基本要求。     

提取高质量人参RNA的方法研究

针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的叶片中获得高质量、完整性好的总RNA,每克新鲜组织RNA产量在90～120!g之间,电泳分析,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间.用改良的Trizol法分离的RNA,已成功进行了RT-PCR及人参叶cDNA文库构建等研究.     

檀香心材总RNA提取方法的比较研究

为筛选檀香心材总RNA提取方法,对5种提取方法进行比较研究,包括Trizol法、改良CTAB法、SDS酸酚法、异硫氰酸胍-CTAB法、异硫氰酸胍-SDS法。结果表明,Trizol法和异硫氰酸胍-CTAB法不能提取出檀香心材总RNA,而SDS酸酚法、改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法均能提取檀香心材总RNA。SDS酸酚法的A260 nm/A230 nm小于2.0,且RNA产率低,仅为(27.94±1.06)μg g–1,不能满足后续实验要求。而改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA带型清晰,完整性好,A260 nm/A280 nm为1.8~2.0,A260 nm/A230 nm大于2.0,RNA产率分别为(79.06±4.22)和(107.00±1.36)μg g–1。分别以改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA为模板,通过RT-PCR反应,扩增檀香Actin基因片段,结果二者扩增产物大小相同且条带单一,说明改良CTAB法与异硫氰酸胍-SDS法为檀香心材总RNA提取的较好方法。     

一种新型的油樟叶片总RNA提取方法

以油樟叶为试材,比较Trizol法、皂土法、CTAB法、Tris-SDS-异硫氰酸胍法等传统方案提取总RNA,发现效果都不理想.本文针对油樟叶片富含油脂、多酚、多糖的特点,开创性地使用了一种改良的总RNA提取流程:首次增加预处理液、乙酸乙酯抽提来减少油脂、多酚和多糖对裂解液粘稠度的影响,提取过程中使用二氯甲烷代替三氯甲烷增加对疏水性杂质的清除效果,使用混合型高盐溶液多次脱糖,结果表明使用改良的新型方法获得的油樟叶片总RNA条带清晰无明显降解,测得的A260/A280和OD260/OD230均在2.0左右,产物得率约580 μg/g,通过RT-PCR扩增出了油樟18S rRNA基因序长为113bp的特异条带,说明这种改良的新型方法获得的RNA完整性、纯度和产率都远高于常规RNA提取方法,研究探索出一种新型油樟叶片总RNA的提取方法.     

灰绿藜RNA提取方法及在cDNA文库构建中的应用

目的:为分离灰绿藜耐盐相关新基因,构建叶片cDNA文库,探索从盐生植物中提取高质量RNA的方法.方法:以灰绿藜叶片为材料,应用RNA Plant Reagent法(Tiangen)、Plant RNA purification Reagent法(Invitrogen)、UNIQ柱式总RNA试剂盒提取法(Sangon)、SDS-LiCl法、TRIZOL试剂法(Invitrogen)等进行总RNA的提取,并构建其全长cDNA文库和抑制消减文库.结果:RNAPlant-Reagent法、Plant RNA purification Reagent法和UNIQ柱式总RNA试剂盒提取法获得的RNA完整性均不好;SDS-LiCl法提取的RNA完整性好(28S条带亮度是18S的2倍、条带锐利清晰)、纯度高(A280/A260为1.89±0.03,A260/A230为2.23±0.02),适合用于直接反转录及构建全长cDNA文库,并获得成功;TRIZOL试剂法简单快捷,产率高(2724±82μg/g),完整性较好,可经mRNA纯化后用于抑制消减文库的构建并获得成功.结论:建立了用于构建高质量cDNA文库的灰绿藜RNA的制备方法.     

四种副溶血弧菌总RNA提取方法的比较

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐菌.提取高质量的RNA是研究副溶血弧毒力基因表达与其致病性和环境适应性的基础.本研究分别用SDS法、Trizol法,PureLinkTM RNA Mini Kit和Uniq-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取六株副溶血弧菌的总RNA,用普通琼脂糖凝胶电泳和核酸测定仪检测RNA的质量,并用RT-PCR法对四种提取方法进行比较.研究结果表明,Trizol法和PureLinkTM RNA Mini Kit简单快捷,提取的总RNA完整性好,纯度高,可用于后续实验的分子生物学研究;而Trizol法更适用于普通实验室细菌RNA的提取.     

黄檗(Phellodendron amuranse)叶片总RNA提取方法研究

以黄檗(Phellodendron amuranseRupr.)叶片为材料,分别利用改进的盐酸胍法、Trizol法、CTAB法提取黄檗叶片总RNA,通过RNA产率、纯度、电泳图谱等分析,确立了1种从黄檗叶片中快速分离总RNA的方法。研究结果表明,改进盐酸胍法所提取的总RNA的A260/A280为1.928,28S和18S条带清晰谱图完整性好,而且具有产率高、时间短、成本低的特点,所提取的总RNA适用于mRNA分离、cDNA文库的建立、Northern杂交等分析。     

一种改良的热酚法高效快速提取酿酒酵母总RNA

以酿酒酵母单倍体CEN.PK1与双倍体CEN.PK2为研究对象,利用改良热酚法,快速高效地提取酿酒酵母总RNA.结果显示应用该方法提取的酿酒酵母CEN.PK1和CEN.PK2的总RNA经分光光度计测定浓度为7.63 μg/μL和3.77 μg/μL,OD260/280分别为2.10和2.04,OD260/230分别为2.32和2.24,浓度与纯度均能达到后续分子生物学试验的要求.经PCR与荧光定量PCR检测,该方法提取的RNA无DNA污染,可作为PCR反应的模板,与Trizol方法提取RNA相比,该方法不仅浓度高并且可将提取时间由常规的2.5 h缩短为1.5 h,具有操作简单、高质、高效等优点,经多次试验证明,此方法同样适用于酿酒酵母总RNA的大量提取试验,有较高的实用价值.     

富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5％,1.0％和2.0％β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5％,1％,2％β-巯基乙醇.测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响.结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0％,2.0％β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5％β-巯基乙醇组,1.0％β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0％β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0％β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响.综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0％β-巯基乙醇是最佳提取方案.     

富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5％,1.0％和2.0％β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5％,1％,2％β-巯基乙醇.测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响.结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0％,2.0％β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5％β-巯基乙醇组,1.0％β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0％β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0％β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响.综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0％β-巯基乙醇是最佳提取方案.     

富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5％,1.0％和2.0％β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5％,1％,2％β-巯基乙醇.测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响.结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0％,2.0％β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5％β-巯基乙醇组,1.0％β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0％β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0％β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响.综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0％β-巯基乙醇是最佳提取方案.     

麦冬根中总RNA的快速提取

目的:从富含多糖、多酚的麦冬根部组织中快速提取总RNA。方法:采用改进的苯酚法,提取液的配制为5%SDS、1mol/LNaAc(pH4.1)、20%HAC、0.1%PVP。结果:采用该方法提取的麦冬总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰。通过琼脂糖凝胶电泳与紫外吸光度测定产量与纯度,麦冬根部组织总RNA的吸光值D260nm/D280nm值大于1.8,D260nm/D230nm值大于2.0,麦冬块根与不定根RNA的平均产量分别为79.716和76.144μg/g(鲜重)。结论:用本方法提取的RNA可用于后继的抑制消减杂交试验。     

槟榔黄化病组织RNA提取方法的比较

为了从发生黄化病的槟榔茎、叶、花中提取到完整的RNA,采用了CTAB法、Trizol法和异硫氰酸胍法提取槟榔黄化病组织RNA。从RNA的完整性、产率和纯度方面对这几种方法进行了比较,结果表明,异硫氰酸胍法所得RNA完整性较好,条带清晰无明显降解,OD260/OD280介于1.8-2.0之间,RNA得率较高,为120μg/g以上,并能成功进行反转录制备cDNA,表明该RNA可以进行后续分子生物学操作。     

一种适用于RT-PCR的石榴籽粒总RNA提取方法

为从石榴籽粒中提取高质量的RNA,以便进行后续分子生物学研究,针对石榴籽粒富含次生代谢物的特点,采用CTAB法并进行了改良,利用氯仿/异戊醇替代其他方法中的"异硫氰酸胍"和"Trizol试剂"进行反复抽提去除蛋白,无水乙醇去除多糖,LiCl消化DNA。结果显示:改良CTAB法提取的石榴籽粒总RNA的28S rRNA、18SrRNA条带清晰,完整性较好;OD260 nm/OD280 nm比值为1.9960,纯度较高。在此基础上通过反转录、PCR扩增出符合预期大小的Actin基因片段,表明该方法提取的RNA可满足后续RT-PCR等分子生物学试验研究。     

一种有效的花瓣总RNA的提取方法

利用CTAB法以富含花青素类物质的紫蓝色花瓣为材料提取总RNA,经紫外光谱分析A260/A280比值为1.9~2.0,A260/A230比值约为2.0;电泳检测到了28S、18S和5S rRNA清晰的条带;通过RT-PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明分离的总RNA能去除色素干扰,纯度和反转录活性较高符合RNA相关实验的要求,是一种经济、有效的花瓣总RNA的提取方法。     

藤茶叶片总 RNA 的提取及苯丙氨酸解氨酶基因（pal）片段的克隆

藤茶叶片富含多酚、多糖以及黄酮类化合物,严重干扰了其总RNA的提取。实验在裂解前先用70%丙酮对藤茶叶片冷冻研磨材料进行多次抽提,然后采用试剂盒提取法、Trizol法和异硫氰酸胍法提取总RNA。结果表明,经丙酮预处理后,上述3种方法均能从藤茶叶片中成功提取到高质量的RNA,其完整性好,纯度高,D260 nm/D280 nm值介于1.8~2.0之间,产率为22.74~33.66μg/g。以提取的总RNA逆转录的c DNA为模板进行RT-PCR,克隆到一条长度为817 bp的pal片段。经Blast比对分析,该基因片段与葡萄、茶树等物种的pal之间具有较高的同源性。     

丹参DNA提取方法比较

为从富含多糖、酚类物质的丹参幼叶中提取高质量的核总DNA,比较了4种DNA提取方法对丹参叶片的提取效果,结果表明改良CTAB法提取的DNA溶液颜色为无色透明、A260/A230为2.137、A260/A280为1.816值最好,是提取丹参基因组DNA的有效方法.