烟草花叶病毒几个分离物的比较研究

本文从血清学关系、外壳蛋白亚基分子量、氨基酸组成和放射性碘标记酶解肽谱等方面比较研究了广州和上海地区的烟草、茄子、辣椒、番茄上分离到的烟草花叶病毒几个分离株。试验结果指出,它们与烟草花叶病毒普通株(TMV_c),长叶车前花叶病上海株(RMV_gh)都有所不同。并对放射性碘标记酶解肽谱在病毒诊断鉴定上的应用进行了讨论。     

从云南烟草上检测到的黄瓜花叶病毒亚组II分离物

在对云南省烟草病毒病的研究中,分离到一种直径约26～30nm的球形病毒。提纯病毒进行的SDSPAGE发现一条55kD蛋白带。55kD蛋白N端10个氨基酸与CMV亚组II的Q株系外壳蛋白N端氨基酸同源性为100%。以CMVQ抗血清对55kD蛋白进行了Western blot检测,发现55kD蛋白与CMV Q株系抗血清有血清学反应。根据已报道的CMV亚组II外壳蛋白基因序列合成引物,采用RTPCR技术扩增到一条约09kb的cDNA条带,并进行了克隆及序列测定,经Genbank比较,发现此09kb cDNA包含一657bp的外壳蛋白基因,其核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与CMV亚组II分离物有极高的同源性,分别达97%～98%和96%～99%,而与亚组I分离物的同源性仅为75%～76%和78%～79%。因此,该球形病毒应为CMV亚组II的一个分离物,命名为CMVYnb。     

从云南烟草上检测到的黄瓜花叶病毒亚组Ⅱ分离物*

在对云南省烟草病毒病的研究中,分离到一种直径约２６￣３０ｎｍ的球形病毒。提纯病毒进行的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ发现一条５５ｋＤ蛋白带。５５ｋＤ蛋白Ｎ－端１０个氨基酸与ＣＭＶ亚组Ⅱ的Ｑ株系外壳蛋白Ｎ－氨基酸同源性为１００％。以ＣＭＶ－Ｑ抗血清对５５ｋＤ蛋白进行了Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测,发现５５ｋＤ蛋白与ＣＭＶ Ｑ株系抗血清有血清学反应。根据已报道的ＣＭＶ亚组Ⅱ外壳蛋白基因序列合成引物,采用ＲＴ－ＰＣＲ     

黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁分离物全基因组序列测定

以感病组织总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增并测定黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)辽宁分离物(CGMMV-LN)的基因组全序列。CGMMV-LN基因组全长6 422 nt,5'非编码区(noncoding region,NCR)和3'NCR分别为59 nt和175 nt。CGMMV-LN编码的4个蛋白依次是186 kD和129kD的复制酶,29 kD的移动蛋白和17.4 kD的外壳蛋白。CGMMV-LN与其他4个CGMMV分离物基因组核苷酸序列同源性为97.6%～99.3%,与同属其他3种病毒基因组核苷酸序列同源性仅为61.7%～62.8%。基于186kD复制酶和外壳蛋白氨基酸序列的同源树显示:侵染葫芦科作物的烟草花叶病毒属病毒可分为2个亚组,亚组I包括所有CGMMV分离物,亚组II包括Kyuri绿斑驳花叶病毒(Kyuri green mottle mosaic virus,KGMMV)、黄瓜果实斑驳花叶病毒(Cucumber fruit mottle mosaic virus,CFMMV)和小西葫芦绿斑驳花叶病毒(Zucchini ...     

从烟草上分离的黄瓜花叶病毒

黄瓜花叶病毒(CMV)危害烟草已成为烟区严重病害之一,如山东烟区CMV引起的烟草病毒病发病率达50%以上。CMV在福建烟区的发病率也达15～30%。上述调查系根据烟草田间症状表现以及温室内不同鉴别寄主的反应和抗性测定得到。为了进一步     

从烟草上分离的黄瓜花叶病毒

黄瓜花叶病毒(CMV)危害烟草已成为烟区严重病害之一,如山东烟区CMV 引起的烟草病毒病发病率达50%以上。GMV 在福建烟区的发病率也达15～30%。上述调查系根据烟草田间症状表现以及温室内不同鉴别寄主的反应和抗性测定得到。为了进一步研究与肯定CMV 引起的烟草病毒病,有必要由病株分离病毒和进行电子显微镜观察鉴定。     

烟草花叶病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用TMV免疫的BALB/c鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得10株能稳定传代並分泌抗烟草花叶病毒(TMV)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其中T73McAb滴度最高,ELISA滴度高达1/655,360,能被TMV兔免疫血清所阻断,能中和TMV的感染性。但与其它植物病毒无交叉反应,与TMV不同毒株均有反应。     

检测烟草中烟草花叶病毒的RNA斑点杂交法

用普通烟草花叶病毒OM株3′-端约2kb的cDNA为探针,探索了用RNA斑点杂交法对烟草组织中烟草花叶病毒RNA进行检测的条件。这些条件包括用分子杂交法观察云南烟区和上海烟草上分到的烟草花叶病毒与OM株的同源性,从烟草组织中提取烟草花叶病毒的几种方法的比较,使RNA有效地固定在硝酸纤维素滤膜上的方法,烟草组织中是否有干扰RNA固定和杂交的物质,斑点杂交方法检测烟草花叶病毒的特异性、灵敏度等。     

从不同植物上来的几个烟草花叶病毒分离物的初步比较研究

试验比较了油菜花叶病15号分离物(YMV15),地黄退化病(DDV)分离物,毛白楊球状丛生(PV)的分离物以及烟草花叶病毒(TMVl)在寄主反应、体外抗性和血清学方面的异同。三个分离物和TMv-在心叶烟,普通烟等鉴定寄主有相似的反应,但是它们在另一些寄主上的反应又有显著的差别。例如,只有YMVt5能侵染油菜和白菜;YMV-s和DDV在菜豆上不就产生局部斑点,而TMV。和’PV却与TMv的大多数毒株一样有此反应。YMvB和DDv在卓前的接种叶上产生枯斑反应,而’rMVi和Pv且¨不表现病状。三个分离物都和TMvl一样极易通过机械接种传染而不能借桃蚜传染;井且具有相近TMV-的稀释限度(10一L一10“),但致死温度TMV-和Pv为92~(3及90℃,而YM’V15和DDV均为86qc。四个分离物的抗血清都有交互的血清沉淀反应。但YMVls与DDV之嗣的反应鞍强,TMVt与PV的反应亦较强。在交互吸收试验中证明YMVt,与DDV的抗血清中有较多的共同抗体,而TMvl与PV的抗血清中亦有较多的共同抗体。交互血清反应,寄主范围,体外抗性,传染方法,都指出它们是FMV的毒株。TMVl极接近于国外TMV的普通株,PV近似黄化奥古巴花叶毒株,YMVL15有些象Holmes的卓前株。作为TMV毒株的最大特点是它们来自与烟草相距极远的植物,因此探讨这些毒株的起源将是很有兴趣的。     

用DNA杂交技术测定烟草花叶病毒与长叶车前花叶病毒的关系

从油菜上分离的属于烟草花叶病毒组的油菜花叶病毒15(YMV15)和从大白菜上分离到的白菜花叶病毒(ccMV)的外壳蛋白中,都含有组氨酸和甲硫氨酸,类似于长叶车前花叶病毒(RMV)。用YMV15一、RMV一和番茄花叶病毒(ToMV)突变体Nc广RNA的cDNA与Ymv_RNA、RMV—RNA和ccMV．RNA进行了同源和异源的分子杂交试验。 从分子杂交的R0t曲线和杂交产物的Tm值看,YMV-,和ccMV都不同于RMV,其饱和杂交率表明,ccMV与YMV,,有一定核苷酸序列的同源性,两者都与RMV没有核苷酸序列同源性,说明它们属于烟花叶病毒组的不同亚组。     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

烟草花叶病毒RNA双链复制型的分离和鉴定

用”P标记感染了TMV‘的普通烟草,从叶组织中提取总RNA,井用纤维素柱层析分离,得到了TMV-RNA的复制型。它在高离子强度下抗Rnase,在低离子强度下对Rnase敏感,并具有能自我退火和能与TMV-RNA杂交等性质。用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测得其分子量为3．8×106。根据以上性质可以确认它是对TMV-RNA有专一性的双链RNA。     

芜菁花叶病毒温州分离物HC-Pro基因序列分析

从浙江温州盘菜上获得芜菁花叶病毒温州分离物（TuMV-WZ）,病毒提纯后,经电镜观察,可发现大量长约700nm的线形粒子。利用免疫捕捉RT-PCR,通过特异性引物对TuMV-WZ的HC-Pro基因进行PCR扩增,经电泳可见1.5kb的特异条带。PCR扩增产物经过纯化后进行序列测定,序列长度为1449个核苷酸,编码482个氨基酸。其核苷酸序列与已报道的TuMV的基础分离物（Canada,UK1和Japanese）同源率分别为83.9%、96.5%和94.0%,氨基酸同源率分别为97.3%、98.8%和99.0%。     

中国大麦黄花叶病毒分离物的分子变异

１３个供试的中国和英国大麦黄花叶病毒（ＢａＹＭＶ）分离物,经ＲＮＡ１和ＲＮＡ２全基因组不同区域ＤＮＡ片段背地里单构象多态分析（ＳＳＣＰ）,外壳蛋白基因和ＲＮＡ２ ７０ｋＤ基因５端７０５碱基序列分析,以及此７－５碱基ＤＮＡ片段限制性内切酶图谱分析结果,它们的ＲＮＡ１和ＲＮＡ２彼此无一相同,其中ＲＮＡ２变异比ＲＮＡ１更大。由于变异十分复杂,且没有规律性,因而当前通用的分子生物学技术尚不能简单地ＢａＹＭ     

用互补DNA杂交技术研究中国分离的几个烟草花叶病毒组RNA序列的同源性

用互补DNA分子杂交技术研究了烟草花叶病毒组的几个中国分离物RNA序列的同源性。结果表明,杨树丛顶病毒(PV)、地黄退化病毒(DDV)、烟草花叶病毒普通株(TMVc)、番茄株(TMVts)及其突变体(TMV_(N_(14))可归于TMV-U_1株所代表的亚组。油菜花叶病毒15(YMV_(15))与TMV-U_1株无关,在所比较的病毒中是一独特的成员。     

用互补DNA杂交技术研究中国分离的几个烟草花叶病毒组RNA序列的同源性

用互补DNA分子杂交技术研究了烟草花叶病毒组的几个中国分离物RNA序列的同源性。结果表明,杨树丛顶病毒(PV)、地黄退化病毒(DDV)、烟草花叶病毒普通株(TMVc)、番茄株(TMVts)及其突变体(TMVN_(N_(14)))可归于TMV-U_1株所代表的亚组。油菜花叶病毒15(YMV_(15))与TMV-U_1株无关,在所比较的病毒中是一独特的成员。     

十字花科蔬菜上黄瓜花叶病毒分离物的比较研究

对从杭州市郊青菜、萝卜、花椰菜上分离的6个CMV分离物进行了生物学、血清学及双链RNA比较研究。生物学测定结果表明,不同分离物在所测定的6种十字花科蔬菜上的致病力有差异。6种分离物颗粒形态、衣壳蛋白分子量和血清学方面无差异,且都属血清型Ⅰ。dsRNA分析结果表明,6个分离物的dsRNAl,2,3和4在PAGE中迁移率相似,但在1.5kb～0.4kb之间有多条量相对较少的条带,这些条带在不同分离物之间差异较大。6个分离物均含有卫星RNA。     

烟草花叶病毒提纯的改良程序

植物病毒的分离和提纯是研究植物病毒病不可缺少的步骤。病毒粒体的纯化一般有三个要求:一是纯度高,二是产量高,三是方法简便易行。烟草花叶病毒(TMV)的侵染寄主广泛,是农作物的要病原毒。因此,它在植物病毒病研究中,占有相当重要的地位。超离心机的问世,对提高 TMV 的纯化程度和产量提供了有利的条件。但在不具备超