胰高血糖素样肽1受体--治疗糖尿病新药的研究热点

胰高血糖素样肽l(glucagon—like peptide—l,GLP-1)与胰岛素分泌和糖代谢调节密切相关。GLP-1与其受体(GLP-1receptor,GLP-1R)结合后,主要通过cAMP和P13K两条信号途径,促进胰岛素的分泌,刺激胰岛β细胞的增殖和分化。对GLP-1R结构和信号传导机制的研究,有助于了解其在糖尿病病理进程中的作用,为开发新型糖尿病治疗药物指明方向。     

GFP荧光标记GLP-1受体细胞系的建立

为建立胰高血糖素样肽1受体(glucagon-like peptide 1 receptor,GLP-1R)药物筛选模型,真核表达载体pCMV6/GFP/GLP-1R构建好后,转染至U2OS细胞,转染后的细胞经G418筛选获得单克隆细胞株。该细胞株经Western-blot和GLP-1类似物检测,结果表明GLP-1R在该细胞株高表达并对GLP-1类似物有着高灵敏度与特异性的反应,可以用于GLP-1受体激动剂的筛选。     

GLP-1R结构和功能及小分子药物筛选研究进展

胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R)作为2-型糖尿病(T2DM)药物研发和治疗的靶点有着十分重要的临床意义。尽管通过结构生物学,蛋白质工程等方法和手段对于GLP-1R结构的研究有了较大突破。但是关于其全长结构解析,多肽结合受体的分子机理及受体激活的内在机制还不曾得到解决。近些年有关GLP-1R相关研究发展较快,简述了该受体的结构与功能以及已有的小分子药物先导化合物,并讨论GLP-1受体分子结构作用机制的发展方向及应用前景,旨为进一步探寻2型糖尿病的治疗方案提供有利的帮助。     

胰高血糖素样肽-1类似物活性检测的CHO细胞模型构建

该文构建了一种胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)类似物活性检测的细胞模型,为GLP-1类似物的药物筛选提供了一种简单可靠的评价方法。真核表达质粒pc DNA3.1/h GLP-1R转染至中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO),经单克隆筛选和遗传霉素(G418)压力筛选最终筛选出6株单克隆菌株。流式细胞仪检测GLP-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R)的表达量,最终筛选获得1株高表达的细胞模型(CHO/pc DNA3.1/h GLP-1R)。RT-PCR结果显示,该细胞模型转录h GLP-1R基因;流式细胞仪检测结果和激光共聚焦结果显示,细胞模型的膜表面有h GLP-1R蛋白的表达。连续传代10次,细胞膜表面的h GLP-1R蛋白表达没有变化。构建的细胞模型活性检测结果显示,该细胞模型可以很好地用于GLP-1类似物的活性检测。综上所述,该细胞模型为GLP-1类似物的活性检测建立了一种方便可靠的体外活性检测方法。     

胰高血糖素样肽-1受体激动剂抑制大鼠进食效应的比较研究（英文）

胰高血糖素样肽-1 (glucagon-like peptide-1, GLP-1)在小肠细胞和脑干神经元中都有表达,起着抑制进食的作用。然而,目前对生理状态下影响进食的GLP-1的来源或是GLP-1受体激动剂(GLP-1 receptor agonists, GLP-1RA)的相关作用机制尚不明确。本研究选择即刻早期基因产物c-Fos作为特异抗原进行免疫组化染色以显示被GLP-1RA激活的中枢神经系统特定区域。将30只正常SD大鼠随机分为3组,分别一次性腹腔注射利拉鲁肽(200μg/kg)、艾塞那肽(10μg/kg)和生理盐水,检测给药后早期大鼠的摄食总量和血糖。结果显示,急性腹腔注射药理浓度的GLP-1RA能显著地影响摄食。然而,血糖的比较研究显示,在正常大鼠,GLP-1RA抑制进食的作用可能与血糖的变化相分离。与对照组相比,GLP-1RA组c-Fos表达主要在与摄食相关的核团中显著升高,并且在脊髓中发现了c-Fos的表达。以上结果果提示,急性注射药理浓度的GLP-1可以通过循环和迷走神经的途径影响中枢神经系统,尤其是作用于弓状核(arcuate nucleus, ARC)和孤束核(nucleus of solitary tract, NTS),GLP-1能同时调节自主神经的活动。     

胰高血糖素样肽-1与受体相互作用研究进展

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)具有促胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、刺激胰岛β细胞的增殖和分化、抑制β细胞凋亡、抑制胃排空等作用,近年来成为治疗糖尿病药物研究中的热点。GLP-1与受体的相互作用一直备受关注,我们从4个方面对GLP-1与受体相互作用的研究进行了综述:GLP-1的二级结构、GLP-1单个残基改变及残基间的相互作用、GLP-1不同残基片段对GLP-1结合并激活受体的影响和GLP-1受体的相互作用模式。     

人胰高糖素样肽-1及其突变体在大肠杆菌BL21中的表达与生物活性研究

以人胰高糖素样肽-1（human glucagons-like peptide-1,GLP-1））为研究对象,以克隆载体pPblu2SKP/（GLP-1A2G）2基因为模板,利用PCR扩增获得GLP-1与其突变体GLP-1A2G的编码基因,并将其插入原核表达质粒pGEX-4T-1中,利用氯化钙法将其转入表达宿主大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中诱导表达,经IPTG诱导后,收集菌体。菌体经超声破碎后,裂解液用GST亲和层析纯化得到融合蛋白,经凝血酶酶解,用Superdex G-75凝胶层析,得到GLP-1及其突变体GLP-1A2G的样品,经SDS-PAGE电泳测定,样品纯度〉90%。小鼠糖耐量试验表明,相对于空白对照组而言,GLP-1及其突变体GLP-1A2G可以明显地控制血糖的水平,两者的生物活性并无明显差异。由于突变体GLP-1A2G较GLP-1可以更加有效的抵制DPPⅣ的降解,提示突变体GLP-1A2G较GLP-1在白蛋白融合或PEG修饰等方面具有更大的优势。     

重组胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白的纯化及活性研究

利用构建的重组菌株Pichia pastoris GS115/GLP-1/HSA,在10L发酵罐中表达了胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白(GLP-1/HSA),表达量为63.6mg/L。发酵液经中空纤维柱浓缩、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化,获得了较高纯度的GLP-1/HSA,经HPLC分析纯度达95.8%。进一步的体内活性分析结果表明,GLP-1/HSA不仅具有天然GLP-1的生物活性,而且在给药后4h仍能发挥显著性降血糖作用。以上结果表明,利用Pichia pastoris分泌型表达系统和建立的分离纯化方法,能获得大量较高纯度的GLP-1/HSA,为进一步研究和开发能够用于糖尿病临床治疗的长效GLP-1类似物奠定了基础。     

重组胰高糖素样肽-1融合蛋白的纯化及其活性测定

主要探讨了发酵液中融合蛋白rh（GLP-1A2G）2-HSA的分离纯化过程。发酵上清液经超滤浓缩、离子交换层析、凝胶过滤分离得高纯度的rh（GLP-1A2G）2-HSA。纯化样品经SDS-PAGE检测为单一条带,HPLC分析纯度达98%,^125I标记后用TCA沉淀法测定放射性纯度达97%,符合药效学和药代动力学研究的需要,整个纯化过程回收率达到48.5%。通过细胞增殖实验表明纯化后的rh（GLP-1A2G）2-HSA具有类似GLP-1的促胰岛β细胞增殖活性,说明该分离过程保护了融合蛋白rh（GLP-1A2G）2-HSA的生物活性。通过融合蛋白rh（GLP-1A2G）2-HSA的纯化方法,可获得高纯度的重组融合蛋白rh（GLP-1A2G）2-HSA,为进一步的药效学和药代动力学研究奠定了基础。     

《美国科学院院刊》:科学家发现减肥植物的有效成分及机制

<正>中国科学院上海药物研究所谢欣课题组与中国科学院上海有机化学研究所俞飚课题组合作,发现了减肥植物蝴蝶亚仙人掌的有效成分及减肥机制。研究论文于9月22日在线发表于《美国科学院院刊》上。有文献报道,蝴蝶亚仙人掌中的一个化合物P57是其抑制食欲的主要活性成分,但其作用机制并不清楚。研究团队通过大量化合物筛选发现一个提取自蝴蝶亚仙人掌的化合物Gordonoside F,而不是P57,可以特异性激活与代谢密切相关的G蛋白偶联受体GPR119。Gordonoside F通过激活GPR119刺激胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和胰岛素的分泌,并抑制小鼠食欲。     

Nature:一些人胚胎干细胞系发生癌症相关突变

正根据一项新的研究,在用于基础研究或临床开发的140种人胚胎干细胞系当中,5种人胚胎干细胞系在肿瘤抑制基因TP53上获得突变。其中的两种人胚胎干细胞系H1和H9已用于人体中,不过还没有证据证实它们在受者体内导致癌症产生。相关研究结果在线发表在Nature期刊上,论文标题为"Human pluripotent stem cells recurrently acquire and expand dominant negative     

重组胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白的纯化及活性研究

利用构建的重组菌株Pichia pastoris GS115/GLP-1/HSA,在10L发酵罐中表达了胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白（GLP-1/HSA）,表达量为63.6mg/L。发酵液经中空纤维柱浓缩、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化,获得了较高纯度的GLP-1/HSA,经HPLC分析纯度达95.8%。进一步的体内活性分析结果表明,GLP-1/HSA不仅具有天然GLP-1的生物活性,而且在给药后4 h仍能发挥显著性降血糖作用。以上结果表明,利用Pichia pastoris分泌型表达系统和建立的分离纯化方法,能获得大量较高纯度的GLP-1/HSA,为进一步研究和开发能够用于糖尿病临床治疗的长效GLP-1类似物奠定了基础。     

治疗糖尿病的短肽药物GLP-1在毕赤酵母中的分泌表达

利用毕赤酵母表达治疗糖尿病的短肽药物GLP-1(胰高血糖素样肽-1)。以pUC18GLP-1 为模板进行PCR,将获得的GLP-1基因片段克隆到pMD18T-vector上,然后将SmaI和NotI双酶切获得的基因小片段插入到表达载体pPIC9上,完成表达载体pPIC9GLP-1的构建,SacI线性化重组质粒,通过醋酸锂转化法转化毕赤酵母GS115感受态细胞,成功构建了能够分泌抗二肽酶Ⅳ降解的长效促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌株。结果表明毕赤酵母6号菌株的GLP-1分泌表达产量最高可达 100．00 mg／L．实现了GLP-1在毕赤酵母中的表达,为进一步开发治疗糖尿病新型短肽药物的研究奠定了基础。     

Cloning and bioinformatics analysis of a full-length cDNA of porcine CRl-like gene

Human erythrocyte complement receptor type 1 （CR1）, also known as CD35, is a large single-chain tmnsmembrane glycoprotein and an immune adherence receptor of comple- ment component 3b/4b [1]. Its amino acid composition and genetic structure have been reported [2]. In primate, when the erythrocytes bounded with immune complexes （ICs） moved through the liver and spleen, only the ICs were removed by sinusoidal macrophages and the erythrocytes were allowed to reign to the circulation [3].     

胰高血糖素样肽-1在胰腺中作用机制的研究进展

胰高血糖素样肽-1（GLP-1）是胰高血糖素原基因编码的一种激素,主要由肠道L细胞产生并分泌进入血液。GLP-1能激活胰腺、肾脏、肺、胃、心脏和脑等组织中存在的特异性G蛋白偶联受体（GPCR）。通过GLP-1受体（GLP-1R）的激活,活化腺苷酸环化酶,产生3＇,5＇-环腺苷酸,随后通过cAMP依赖性第二信使途径激活蛋白激酶A和鸟苷酸交换因子。大量围绕胰岛素产生细胞——β细胞开展的研究证明,GLP-1短期作用能够加强葡萄糖依赖性的胰岛素分泌作用,持续的GLP-1R激活也能增加胰岛素的合成,促进β细胞的增殖和新生,抑制β细胞凋亡。GLP-1在胰岛素和胰高血糖素分泌方面的独特作用引发了大量针对GLP-1受体激动剂的研究。我们对胰腺中GLP-1R激活所产生作用的机制进行简要综述。     

《生命科学》被收录为“中国科技核心期刊”

经中国科技信息研究所信息分析研究中心审核批准,《生命科学》自2004年第16卷第1期起加入“中国科技论文与引文数据库”．成为该数据库的来源期刊,即被收录为“中国科技核心期刊”该刊由中国科学院主管,国家自然科学基金委员会生命科学部、中国科学院生命科学与生物技术局、中国科学院生命科学和医学学部、中国科学院上海生命科学研究院和中国科学院上海生命科学信息中心主办。     

GLP-1对人脐静脉内皮细胞释放NO的影响及机制的研究

目的:观察胰高糖素样肽-1(GLP-1)对脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放一氧化氮(NO)的影响,并探讨GLP-1受体及GLP-1(9-36)在其中的作用。方法:分别以GLP-1、艾塞那肽、GLP-1(9-36)、GLP-1+exendin(9-39)、GLP-1+西格列汀、GLP-1+西格列汀+exendin(9-39)孵育HUVECs,取培养上清以硝酸还原酶法检测NO浓度。结果:GLP-1剂量依赖性的增加HUVECs中NO释放,艾塞那肽和GLP-1(9-36)均可刺激NO释放,exendin(9-39)和西格列汀均可部分阻断GLP-1引起的NO释放。结论:GLP-1可能通过GLP-1受体及GLP-1(9-36)相关的途径刺激HUVECs NO释放,发挥直接的血管保护作用。     

长效GLP-1-IgG2σ Fc融合蛋白的真核表达与生物活性鉴定

目的:在真核细胞中融合表达胰高血糖素样肽1(GLP-1),纯化后探究产物的生物学活性。方法:通过预留酶切位点将合成的GLP-1-Ig G2σFc融合蛋白表达序列连入表达载体质粒,用电转方法将线性化质粒稳定转染CHO-K1细胞,通过亚克隆筛选出蛋白高表达细胞株;收集高表达细胞株培养上清并初步纯化,采用口服葡萄糖耐量试验(OGTT)探究GLP-1融合蛋白降低血糖的生物学活性。结果:经过一轮亚克隆,筛选得到的细胞株的GLP-1融合蛋白产量达1 g/L,OGTT实验结果表明GLP-1融合蛋白具有降血糖生物活性。结论:GLP-1变体和Ig G2σ的Fc段连接是一种可行的融合蛋白形式,融合蛋白具有GLP-1受体激动剂的降糖作用,并且细胞株的筛选方式和初步纯化方法也具有可行性,为后续的体内、外活性研究和纯化方法确定提供了基础。     

人胰高血糖素样肽-1的研究与应用进展

糖尿病的成因非常复杂,迄今为止,人们仍没有找到根治糖尿病的有效方法。尽管市面上销售和治疗糖尿病的化药不断涌现,但这些化药在降糖的同时,不可避免带来许多毒副作用,同时也并不能延缓一些糖尿病并发症的发展。人体自身分泌的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是一种小分子的多肽,长度仅有30个氨基酸,它属于葡萄糖浓度依赖型的,既可以特异性有效降低血糖浓度,又不会产生任何不良反应,加上GLP-1多重功效的发挥,使其成为II型糖尿病治疗的一个研究热点。要将GLP-1应用于临床,亟待解决它在体内的半衰期非常短的难题。因此,综述国内外对GLP-1的研究探索与应用的最新进展情况,旨在为研究人员和医务工作者在GLP-1相关药物研发上提供借鉴。     

室旁核注射胰高血糖素样肽-1对不同病程糖尿病大鼠胃排空的影响（英文）

目的：研究下丘脑室旁核（paraventricular nucleus,PVN）注射胰高血糖素样肽-1（GLP-1）对糖尿病早期大鼠胃排空的影响,并探讨其相关作用机制。方法：60只清洁级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）,糖尿病组（DM组）,GLP-1干预组（GLP-1组）,每组各20只,后两组腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病模型,分别于注射STZ2周、6周后每组随机取半数进行实验,实验前于无菌条件下大鼠一侧下丘脑PVN区埋置套管,GLP-1组经套管注入GLP-1,NC组及DM组注入等体积生理盐水。酚红灌胃法检测胃排空率,酶联免疫吸附法（ELISA）测定血浆GLP-1浓度,半定量RT-PCR法测定胃窦、胃底GLP-1RmRNA表达。结果：注射STZ 2周后,DM组较NC组胃排空率显著升高（P〈0.01）。GLP-1组胃排空率低于DM组（P〈0.01）,血浆GLP-1浓度高于DM组及NC组（P均〈0.05）,胃窦GLP-1RmRNA表达明显高于DM组、NC组（P均〈0.01）。注射STZ 6周后,DM组胃排空率高于NC组（P〈0.01）。GLP-1组较DM组胃排空率显著降低（P〈0.01）,血浆GLP-1浓度、胃窦GLP-1RmRNA表达显著高于DM组、NC组（P均〈0.01）。结论：下丘脑PVN区注射GLP-1后,可减慢糖尿病大鼠初期加速的胃排空,原因可能与血浆GLP-1浓度及胃窦GLP-1RmRNA表达增加有关。