恩替卡韦联合异甘草酸镁注射液对慢性乙型肝炎患者血清IL-2、IL-10、IL-17、MIF及外周血T细胞亚群水平的影响

目的:探讨恩替卡韦联合异甘草酸镁注射液对慢性乙型肝炎患者血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)及外周血T细胞亚群水平的影响。方法:选择我院2015年6月~2016年12月收治的92例慢性乙型肝炎患者,并按不同治疗方式分为对照组与研究组,每组46例。对照组采用恩替卡韦治疗,研究组基于对照组加以异甘草酸镁注射液治疗。比较两组的临床疗效,治疗前后血清IL-2、IL-10、IL-17、MIF、谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),总胆红素(TbiL)水平,外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,研究组总有效率高于对照组[93.47%vs.71.74%],差异有统计学意义(P0.05);两组血清IL-2水平及外周血CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平均较治疗前显著上升,且研究组以上指标均明显高于对照组,两组血清IL-10、IL-17、MIF、ALT、AST、TbiL水平及外周血CD8~+水平均较治疗前显著下降,且研究组以上指标均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:恩替卡韦联合异甘草酸镁注射液对慢性乙型肝炎患者的效果优于单用恩替卡韦,可能与其显著升高血清IL-2、外周血CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平及降低血清IL-10、IL-17、MIF和外周血CD8~+水平有关。     

四磨汤对宫颈癌化疗患者胃肠功能的保护作用及对血清IL-8、CEA、CA125水平的影响

目的:研究四磨汤对恩度联合力朴素治疗的宫颈癌患者胃肠功能的保护作用及对其血清白细胞介素8(IL-8)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)的影响。方法:选取2015年9月至2016年8月我院收治的88例宫颈癌患者,根据患者入院顺序分为观察组和对照组,每组44例。对照组在放疗基础上加以恩度联合力朴素完成化疗,观察组在对照组治疗基础上加以四磨汤。比较两组患者治疗前后血清IL-8、CEA、CA125水平及外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞比例的变化和胃肠道毒副反应、胃肠道放射性损伤的发生情况。结果:治疗后,两组患者血清IL-8、CEA、CA125水平均较治疗前显著降低(P0.05),且观察组的血清IL-8、CEA、CA125水平较对照组明显降低(P0.05);两组患者CD3~+、CD4~+细胞比例较治疗前显著降低(P0.05),CD8~+细胞比例较治疗前显著升高(P0.05),但观察组的CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞比例细胞比例显著高于对照组(P0.05)。观察组不良反应发生率、早期胃肠道放射性损伤发生率、Ⅱ、Ⅲ级胃肠道放射性损伤率均显著低于对照组(P0.05)。结论:四磨汤用于恩度联合力朴素治疗的宫颈癌患者能有效保护患者胃肠功能,降低患者血清IL-8、CEA、CA125水平,增强患者免疫力。     

双歧杆菌三联活菌对胃癌部分切除患者术后 炎症因子、免疫和营养状态的影响

目的 探究胃癌部分切除术后补充双歧杆菌三联活菌对患者营养状态、炎症和免疫因子的影响,为肿瘤术后患者营养治疗支持提供建议。方法 选取2017年1月至2018年12月在我院行部分胃癌切除术的早期胃癌患者114例,采用随机数表法分为对照组(57例)与观察组(57例),两组患者于术后3～5 d开始进食,观察组在此基础上使用双歧杆菌三联活菌片,3粒/次,3次/日,口服,疗程14 d。对比两组治疗前后炎症因子水平(ELISA法测定外周血IL-2、IL-6及TNF-α水平)、免疫细胞水平(流式细胞仪测定外周血CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+水平)、营养状态(蛋白质测定仪测定外周血白蛋白和总蛋白水平)及治疗不良反应。结果 治疗前两组IL-2、IL-6及TNF-α水平无明显差异(t=1.861,0.744,1.489;P=0.064,0.457,0.138),治疗后两组上述指标均较治疗前显著下降,其中观察组治疗后上述指标水平显著低于对照组(t=5.784,6.153,8.457;均P0.05);治疗前两组CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+水平无明显差异(t=1.301,1.084,0.542;P=0.198,0.283,0.590),治疗后两组CD4~+、CD4~+/CD8~+均较治疗前显著提高,CD8~+显著下降,其中观察组治疗后CD4~+、CD4~+/CD8~+水平显著高于对照组(t=5.205,3.904;均P0.05),CD8~+显著低于对照组(t=6.507;P0.05);治疗前两组白蛋白及总蛋白水平无明显差异(t=1.301,0.651;P=0.198,0.518),治疗后两组上述水平均较治疗前显著提高,其中观察组治疗后白蛋白及总蛋白水平显著高于对照组(t=13.664,8.590;均P0.05);两组不良反应发生率无明显差异(5.26%vs 10.53%;χ~2=1.086,P=0.297)。结论 胃癌部分切除术后补充益生菌可有效调节患者的炎症和免疫状态,显著改善营养状况。     

分泌性中耳炎患者外周血Th1Th2细胞及T淋巴细胞亚群水平的表达及临床意义

目的:探讨分泌性中耳炎(SOM)患者外周血T辅助细胞1(Th1)、T辅助细胞2(Th2)细胞因子及T淋巴细胞亚群水平的表达及其临床意义。方法:选取我院于2015年1月至2018年1月期间收治的SOM患者135例记为SOM组,根据病程将患者分为急性组(病程14d,49例)、亚急性组(病程14-30d,53例)、慢性组(病程30d,33例)。另外选择同期于我院进行体检的100例健康者为对照组。分别对比SOM组和对照组受试者、不同病程SOM患者外周血Th1细胞因子[干扰素(INF-γ)、白细胞介素-2(IL-2)]、Th2细胞因子[白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)]以及T淋巴细胞亚群[CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+]水平。采用Pearson相关性分析INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10与CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+的相关性。结果:SOM组患者外周血INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平高于对照组(P0.05);急性组患者外周血INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平低于亚急性组、慢性组,亚急性组患者外周血INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平低于慢性组(P0.05)。SOM组患者外周血CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平低于对照组,CD8~+水平高于对照组(P0.05);急性组患者外周血CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平高于亚急性组、慢性组,CD8~+水平低于亚急性组、慢性组,亚急性组患者外周血CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平高于慢性组,CD8~+水平低于慢性组(P0.05)。Pearson相关性分析结果显示,SOM患者外周血INF-γ、IL-4与CD8~+呈正相关(P0.05),IL-4与CD3~+、CD4~+呈负相关(P0.05)。结论:SOM患者外周血Th1Th2细胞因子、T淋巴细胞亚群水平均表现异常,且其水平与疾病发生和发展存在一定联系,通过监测Th1Th2细胞因子、T淋巴细胞亚群有助于评估SOM患者病情。     

补肾温阳化瘀法对子宫内膜异位症患者子宫内膜腺上皮细胞OPN与MMP-9的影响

目的:探讨补肾温阳化瘀法对子宫内膜异位症患者子宫内膜腺上皮细胞骨桥蛋白(OPN)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响。方法:选择我院2013年4月~2016年4月收治的92例子宫内膜异位症患者,分为对照组与观察组,各46例,对照组行常规西医治疗,观察组行补肾温阳化瘀法治疗,比较两组OPN及MMP-9,雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8),CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+,临床疗效及安全性。结果:治疗后,观察组OPN、MMP-9,TNF-α、IL-6、IL-8,CD8~+低于对照组,观察组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组总有效率高于对照组,不良反应率低于对照组(P0.05)。结论:补肾温阳化瘀法可下调子宫内膜异位症患者子宫内膜腺上皮细胞OPN及MPP-9表达。     

乌司他丁治疗支气管哮喘的临床疗效及血清IL-2, IL-4及T细胞亚群的变化分析

目的:探讨乌司他丁治疗支气管哮喘的临床研究及血清白介素(IL)-2、IL-4、T细胞亚群的变化。方法:选择2014年1月至2016年10月我院接诊的98例支气管哮喘患者,通过随机数表法分为观察组(n=49)和对照组(n=49)。对照组使用常规治疗,包括抗炎、改善通气、纠正酸碱平衡紊乱、雾化吸入糖皮质激素及β2受体激动剂、补充电解质等,观察组联合乌司他丁治疗,均连续治疗7 d。比较两组临床疗效、临床症状消退时间,并于治疗前后采集3 mL空腹静脉血,使用流式细胞仪检测血清IL-2、IL-4、T细胞亚群的变化。结果:治疗后,观察组临床疗效总有效率明显高于对照组(P0.05);观察组呼吸困难、哮鸣音、胸闷、咳嗽症状消退时间明显比对照组短(P0.05);治疗前,两组血清IL-2、IL-4比较差异不明显(P0.05),和治疗前比较,两组治疗后血清IL-2、IL-4均得到显著改善(P0.05),观察组血清IL-2明显高于对照组,血清IL-4明显比对照组低(P0.05);T细胞亚群中,两组治疗前CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+比较无显著差异(P0.05),治疗后,两组CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+水平较治疗前均显著改善(P0.05),观察组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+均比明显对照组高,CD8~+明显低于对照组(P0.05)。结论:在支气管哮喘患者中应用乌司他丁效果显著,可有效缓解临床症状,改善血清IL-2、IL-4及T细胞亚群的表达,调节机体免疫功能,临床应用价值高。     

早期肠内营养对重症脑出血患者免疫功能和预后的影响

目的:研究早期肠内营养(EEN)对重症脑出血患者免疫功能和预后的影响。方法:选取2013年1月至2015年3月间我院收治的重症脑出血患者161例,依据随机数字表法分为对照组(n=77)和观察组(n=84),观察组患者入院12h~24h内予以肠内营养乳剂支持,对照组患者予普通鼻饲流食。所有患者于治疗前及治疗后采用GCS评估患者意识情况,检测血Alb、TP、PA、IgG、IgM、IgA、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞及CD4~+/CD8~+水平,并观察治疗后患者并发症的发生率。结果:治疗后观察组Alb、TP、PA水平均显著高于对照组(均P0.05);治疗后观察组IgG、IgM、IgA、CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+水平均显著高于同期对照组,CD8~+T细胞显著低于同期对照组(均P0.05);治疗后观察组GCS评分显著高于对照组(P0.05);治疗后观察组患者肺部感染率,消化道症状发生率略低于对照组,但差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:重症脑出血患者予以EEN治疗可明显改善其营养状况,有助于神经系统功能和免疫功能的恢复,改善预后,值得临床推广应用。     

EB病毒感染导致单核细胞增多症患儿免疫功能的变化及意义

探究EB病毒感染导致单核细胞增多症(IM)患儿免疫功能的变化及意义,以期为EB病毒感致IM的诊疗提供理论依据。研究对象选取2015年6月至2016年6月期间于我院诊治的80例EB病毒感染导致IM患者以及40例体检正常儿童,将确诊未开始治疗的IM患者设为观察组(40例),处于恢复期的IM患者设为治疗组(40例),将体检正常儿童设为对照组。检测淋T巴细胞亚群CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞比例以及CD4~+/CD8~+比值,并比较3组观察对象外周血白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)的水平。研究显示观察组CD3~+与CD8~+分别为(0.75±0.13)、(0.45±0.11),均显著高于对照组((0.53±0.09),(0.26±0.09))、治疗组((0.57±0.10),(0.30±0.10)),观察组CD4~+、CD4~+/CD8~+均显著低于对照组与治疗组,差异具有统计学意义(p0.05),治疗组与对照组各项指标差异均不显著(p0.05);观察组IL-6、IL-8分别为(16.34±4.22)pg/m L、(17.96±4.32)pg/m L,显著高于对照组((9.32±3.21)pg/m L、(10.12±3.10)pg/m L)、治疗组((10.32±3.32)pg/m L、(10.78±3.16)pg/m L),差异具有统计学意义(p0.05),治疗组与对照组各项指标差异均不显著(p0.05)。综上可得EB病毒感染后患儿体内CD3~+与CD8~+显著升高,打破CD4~+/CD8~+平衡,免疫功能失常是IM发病的重要原因,对于探究免疫功能的变化对IM的诊治具有重要意义。     

美沙拉嗪对溃疡性结肠炎患者血清炎症因子与凝血指标的影响

目的:分析美沙拉嗪对溃疡性结肠炎患者血清炎症因子与凝血指标的影响。方法:按抽签法将102例溃疡性结肠炎患者分作对照组和研究组,各51例,对照组治疗采用柳氮磺胺吡啶,研究组治疗采用美沙拉嗪,观察两组治疗前后血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),血小板(PLT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶原时间(PT)、D-二聚体(D-D)水平,氧化应激指标,免疫功能,临床疗效及安全性。结果:治疗后,研究组患者血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、Fg、D-D水平及PLT均显著低于对照组,PT高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。研究组氧化应激过氧化脂质(LPO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、免疫功能(CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+)改善均优于对照组(P0.05)。研究组总有效率高于对照组,不良反应率低于对照组,均有统计学差异(P0.05)。结论:美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎患者可显著抑制炎症,改善氧化应激状态,纠正凝血功能障碍并改善免疫功能,且临床疗效和安全性均较好。     

百令胶囊联合左卡尼汀对维持性血液透析患者氧化应激、T淋巴细胞亚群及营养状态的影响*

目的:探讨百令胶囊联合左卡尼汀对维持性血液透析(MHD)患者氧化应激、T淋巴细胞亚群及营养状态的影响。方法:选取我院于2015年6月至2017年4月期间接受MHD治疗的慢性肾衰竭患者72例为研究对象。按照数表法将患者随机分为对照组(n=36)和实验组(n=36)。两组患者均行MHD治疗,实验组患者在此基础上给予百令胶囊联合左卡尼汀治疗,疗程均为6个月。比较两组治疗前、治疗6个月后的氧化应激指标:血浆丙二醛(MDA)、血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、血浆总高半胱氨酸(tHcy)水平,免疫功能指标:CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+,营养状态指标:血红蛋白(Hb)、白蛋白(Alb)、前白蛋白(PA)、总胆固醇(TCh)、三酰甘油(TG)、脂蛋白(a)[Lp(a)]。结果:两组患者治疗6个月后MDA、t Hcy水平下降,且实验组低于对照组(P0.05);治疗6个月后实验组患者GSHPx水平高于治疗前与对照组(P0.05),而对照组GSHPx水平与治疗前相比差异无统计学意义(P0.05)。治疗6个月后,实验组患者CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平高于治疗前及对照组,而CD8~+低于治疗前及对照组(P0.05)。实验组治疗6个月后Hb、Alb、PA水平高于治疗前及对照组,而Lp(a)低于治疗前及对照组(P0.05),实验组患者TCh、TG水平与治疗前比较差异无统计学意义(P0.05);对照组治疗6个月后Hb、Alb、PA、TCh、TG、Lp(a)水平与治疗前比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:百令胶囊联合左卡尼汀可减轻MHD患者氧化应激反应,调节T淋巴细胞亚群,同时改善患者营养状况,值得临床推广应用。     

壳聚糖酶的克隆表达与壳寡糖的制备分析

目的:克隆壳聚糖酶基因于大肠杆菌中实现高表达,制备壳寡糖。方法:以枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增壳聚糖酶基因(CSN),克隆至载体pET23a(+)上,转化菌株BL21(DE3)。重组子经0.5 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE和质谱检测与鉴定重组酶。酶纯化后水解壳聚糖,薄层色谱分析其水解产物。结果:质谱证明壳聚糖酶(31.5kDa)成功表达,表达量占菌体总蛋白的45%左右。纯化后重组酶浓度为900 mg/L,纯度95%、回收率85%,酶活力为10 000 U/mg。壳聚糖降解产物为壳二糖至壳四糖。结论:原核表达载体pET23a(+)-CSN构建正确,壳聚糖酶表达量与活性高,适用于水解壳聚糖制备壳寡糖。     

国内外蝗害治理技术现状与展望

本文首先概述了国内外蝗虫发生与为害的态势,总结了现阶段我国蝗虫发生与为害的主要特点:即农田飞蝗暴发频繁而且严重,草原土蝗的发生时常造成严重的经济损失,而且侵入城市干扰市民生活,我国与周边国家之间蝗虫过境迁移频繁,使用化学农药污染环境和农产品;分析了国内外蝗虫防治对策与技术的发展现状,重点介绍了应急防治和可持续治理对策、...     

Coiled-coil nanomechanics and uncoiling and unfolding of the superhelix and alpha-helices of myosin

The nanomechanical properties of the coiled-coils of myosin are fundamentally important in understanding muscle assembly and contraction. Force spectra of single molecules of double-headed myosin, single-headed myosin, and coiled-coil tail fragments were acquired with an atomic force microscope and displayed characteristic triphasic force-distance responses to stretch: a rise phase (R) and a plateau phase (P) and an exponential phase (E). The R and P phases arise mainly from the stretching of the coiled-coils, with the hinge region being the main contributor to the rise phase at low force. Only the E phase was analyzable by the worm-like chain model of polymer elasticity. Restrained molecular mechanics simulations on an existing x-ray structure of scallop S2 yielded force spectra with either two or three phases, depending on the mode of stretch. It revealed that coiled-coil chains separate completely near the end of the P phase and the stretching of the unfolded chains gives rise to the E phase. Extensive conformational searching yielded a P phase force near 40 pN that agreed well with the experimental value. We suggest that the flexible and elastic S2 region, particularly the hinge region, may undergo force-induced unfolding and extend reversibly during actomyosin powerstroke.     

Kinetics and thermodynamics of peroxidase- and laccase-catalyzed oxidation of N-substituted phenothiazines and phenoxazines

N -substituted phenothiazines (PTs) and phenoxazines (POs) catalyzed by fungal Coprinus cinereus peroxidase and Polyporus pinsitus laccase were investigated at pH 4–10. In the case of peroxidase, an apparent bimolecular rate constant (expressed as k _cat/K _m) varied from 1 ×10⁷M⁻¹s⁻¹to 2.6×10⁸M⁻¹s⁻¹ at pH 7.0. The constants for PO oxidation were higher in comparison to PT. pH dependence revealed two or three ionizable groups with pK _a values of 4.9–5.7 and 7.7–9.7 that significantly affected the activity of peroxidase. Single-turnover experiments showed that the limiting step of PT oxidation was reduction of compound II and second-order rate constants were obtained which were consistent with the constants at steady-state conditions. Laccase-catalyzed PT and PO oxidation rates were lower; apparent bimolecular rate constants varied from 1.8×10⁵M⁻¹s⁻¹ to 2.0×10⁷M⁻¹s⁻¹ at pH 5.3. PO constants were higher in comparison to PT, as was the case with peroxidase. The dependence of the apparent bimolecular constants of compound II or copper type 1 reduction, in the case of peroxidase or laccase, respectively, was analyzed in the framework of the Marcus outer-sphere electron-transfer theory. Peroxidase-catalyzed reactions with PT, as well as PO, fitted the same hyperbolic dependence with a maximal oxidation rate of 1.6×10⁸M⁻¹s⁻¹ and a reorganization energy of 0.30 eV. The respective parameters for laccase were 5.0×10⁷M⁻¹s⁻¹ and 0.29 eV. Received: 20 September 1999 / Accepted: 24 February 2000     

白术同源四倍体的诱导和鉴定及其与二倍体过氧化物酶的比较

以白术（Atractylodes macrooephala Koidz.）二倍体组培苗为材料,对其四倍体诱导方法进行研究,共获得45个白术同源四倍体株系,为优良株系的选育提供了材料。此外,还分析比较了其中8个白术四倍体株系与二倍体的过氧化物酶同工酶（POD）的酶谱差异,发现四倍体各株系过氧化物酶同工酶谱比二倍体的均多了Rf0.310的谱带,且总过氧化物酶比活力也发生了很大改变,对探讨白术四倍体优良株系的生理生化机理具有一定的参考价值。     

放牧对牧草光合作用、呼吸作用和氮、碳吸收与转运的影响

研究放牧对草地植物生理活动的影响,对于揭示草地放牧演替的生理机制有重要意义.大量研究表明,家畜放牧对牧草光合作用、呼吸作用以及C和N吸收与转运的影响,可以分为生理伤害和生理恢复2个阶段.放牧通过改变草地冠层结构影响牧草光合作用,净光合作用速率短期内迅速下降,随着叶面积指数增加又逐渐上升,呼吸作用有相似的变化趋势.牧草放牧后再生长所需的C和N最初主要来自根系和留茬中的贮藏物质,此后随着牧草生长恢复逐渐由同化作用供给,C代谢与土壤N水平负相关.放牧后牧草生理活动变化与牧草遗传特性、种间竞争、家畜放牧特征、非生物环境等因素密切相关.     

Synthesis of hapten and conjugates of coumestrol and development of immunoassay

3-O-Carboxymethylcoumestrol was prepared as the hapten for immunoassay by a partial alkylation of coumestrol with ethyl chloroacetate in acetone alkalized with potassium carbonate. 3-O-Ethoxycarbonylmethylcoumestrol was separated by column chromatography and finally was hydrolyzed with formic acid. 1H and 13C NMR data (APT, COSY, HMQC, and HMBC) revealed that the reaction was regioselective, as 3-O-ethoxycarboxymethylcoumestrol was the only monosubstituted derivative. The hapten was then conjugated to bovine serum albumin and used for immunization of rabbits. A radioimmunoassay (RIA) system was established based on the polyclonal antiserum and a 125I-labeled hapten-tyrosine methyl ester conjugate as the radioligand. Parameters of the RIA: sensitivity: 12 pg per tube, 50% intercept: 140 pg per tube, working range: 20-4000 pg per tube. The cross-reactivity of a panel isoflavonoid and lignan phytoestrogens was either negligible (e.g. formononetin 0.07%; biochanin A 0.06%) or not detectable at all. The major immunoreactive peak in HPLC fractions from an alfalfa extract had the same retention time as coumestrol standard and represented 94.8% of the signal. The remaining 5.2% of immunoreactivity was distributed between five minor peaks. We conclude that after the validation for particular matrices, the method will be a useful tool for analysis of coumestrol, especially in low volume and low concentration samples.