肿瘤的分子分型在当代结直肠癌中的应用

以分子检测为基础的肿瘤分子分型及个体化治疗方案使当代的结直肠癌治疗逐步走向“同病异治”模式,结直肠癌同病异治两个最常见的应用,一是RAS基因突变与分子靶向药物的应用,二是微卫星不稳定(MSI)状态与林奇综合征的诊断和治疗。其中RAS基因野生型患者使用西妥昔单抗联合化疗方案获益显著,而林奇综合征的患者与微卫星稳定患者相比,显示了更好的预后,且其不能从化疗药物氟尿嘧啶中获益。然而,为了让更多的结肠癌患者获益,我们还需要继续探寻对结肠癌更有效更全面的分子分型标准。     

生物钟基因PER2在结直肠癌中的表达及意义

目的:探讨PER2基因表达水平和结直肠癌发生发展的关系。方法:收集203例在上海市第一人民医院接受根治性肠切除术结直肠癌患者的标本,通过实时定量PCR和免疫组织化学技术检测PER2在肿瘤组织和邻近正常组织中的表达水平,并对PER2的表达与患者的病理资料和临床预后的相关性进行统计学分析。结果:PER2在结直肠患者肿瘤组织的表达较正常组织减少(P0.001)。与PER2阳性患者相比,PER2阴性的结直肠癌患者有远处转移(P=0.026)、AJCC分期为IV期(P=0.011)的比例更高。结论:PER2基因在结直肠癌患者中存在低表达现象,其对于患者的AJCC分期评价以及了解患者有无远处转移有一定的参考价值。     

预警症状对结直肠癌的诊断效能研究

目的:明确预警症状(腹部包块、便秘、排便习惯改变、腹泻、肛周异物感、长期腹痛、便血或肛门出血)对结直肠癌的诊断效能。方法:收集我院2016年1月至2016年12月的结肠镜检查数据,计算各个预警症状的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比。结果:预警症状总的诊断敏感度和特异度分别是6.63%和94.33%。所有的预警症状诊断敏感度最高的是便血,敏感度为19.28%,最低的是腹泻,敏感度为2.41%。相对而言,便血和长期腹痛的准确度较高,分别达到了19.28%和11.45%。除了长期腹痛之外,其他所有的预警症状的诊断特异度都达到了90%以上。结论:超过一半的结直肠癌患者没有出现预警症状,用预警症状来诊断结直肠癌具有较低的敏感度和较高的特异度,需要更多的研究来证明预警症状的临床意义。     

四种错配修复基因蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:分析hMLH1、hMSH2、hMSH6和hPMS2四种错配修复基因蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法:随机选取2013年1月至2015年12月广州医科大学附属第三医院结直肠癌患者标本177例,采用免疫组织化学法检测hMLH1、hMSH2、hMSH6和hPMS2蛋白的表达情况,并分析蛋白表达与临床参数间关系。结果:177例结直肠癌组织中,hMLH1蛋白的缺失率为6.2%(11/177),hMSH2蛋白的缺失率为4.0%(7/177),hMSH6蛋白的缺失率为1.7%(3/177),hPMS2蛋白的缺失率为8.0%(14/177),四者之和占所有结直肠癌病例的19.8%(35/177)。四种错配修复基因蛋白表达缺失均与肿瘤发生部位有关(P0.05),另外,hMLH1及hPMS2蛋白的表达缺失还与肿瘤分化程度相关(P0.05),hMSH6蛋白的表达缺失还与肿瘤浸润深度相关(P0.05);而缺失均与年龄、性别、淋巴结转移和远处转移无关(P0.05)。结论:错配修复蛋白的表达在部分结直肠癌组织中出现缺失现象,且与肿瘤部位及分化程度密切相关。hMLH1、hMSH2、hMSH6和hPMS2四种基因的突变,为临床判断预后及拟定治疗方案提供一个有参考价值的依据。     

结直肠癌患者血清基质金属蛋白酶水平及其临床意义

目的:探讨结直肠癌患者血清基质金属蛋白酶水平及其临床意义。方法:采用Bio-plex200悬浮芯片系统检测33例结直肠癌患者(其中13例为结直肠癌转移患者,20例为结直肠癌非转移组)和30例正常对照组血清中基质金属蛋白酶(MMP)-1、2、3、7、8、9、10、12、13的浓度。结果:与正常对照组相比,结直肠癌患者血清MMP-2、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-13的浓度显著上调(P0.05),而MMP-1、MMP-3、MMP-12的浓度并无显著性差异(P0.05);与结直肠癌非转移组患者相比,结直肠癌转移组患者血清MMP-2和MMP-7的浓度显著升高(MMP-2:P=0.029;MMP-7:P=0.002)。结论:基质金属蛋白酶可能在结直肠癌的发生、发展过程中起重要作用;MMP-2和MMP-7可能成为结直肠癌发生和转移的预测和评估指标。     

结直肠癌早期诊断的研究进展

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的早期诊断对减少肿瘤发病率和死亡率具有极其重要的意义。随着分子生物、内镜影像技术以及激光技术的发展,各种诊断方法不断改进,新诊断方法和技术不断涌现,对结直肠癌的早期诊断、定位和分期提高到了一个新的认知水平。本文简述了结直肠组织的层微结构和癌变进程,介绍了目前临床诊断的主要方法,展望了其发展方向。论文在重点评述非线性光谱技术,包括双光子激发荧光、二次谐波以及拉曼光谱在CRC诊断研究的基础上,提出联合多光子显微成像与拉曼光谱技术进一步开展结直肠癌早期无损诊断研究。     

结直肠癌无创筛查技术研究进展

结直肠癌和高危腺瘤的早期诊断及治疗,能够大大降低其死亡率。因而,在临床普及结直肠癌筛查有助于遏制该疾病的危害。目前,结肠镜检查是结直肠癌诊断的金标准,但该方法需要肠道准备,且具有侵入性,易造成肠道穿孔等缺点,导致患者依从性差,不利于其作为大规模筛查技术推广实施。近年来非侵入性的结直肠癌诊断方法发展迅速,这类方法主要通过检测粪便或血液样本中与结直肠癌发生相关的生物标志物,为结直肠癌的无创筛查提供了可能。但由于粪便、血液样本的成分复杂,对其中生物标志物的检测技术仍然在不断研究和完善中。本文分别从基于粪便样本和血液样本的检测技术两方面入手,探讨了近年来结直肠癌无创筛查技术的研究进展。     

肠道微生态在结直肠癌诊断中的研究进展

近年来,肠道微生态学已经成为众学者的研究热点,肠道微生态平衡影响人体健康,尤其与结直肠癌（colorectal cancer,CRC）关系密切。许多CRC患者在早期并无明显症状,在进入中晚期时才被确诊,因错过早期治疗的机会而导致治疗效果欠佳,目前亟需更新更优的CRC早期诊断方法。基于肠道微生态与CRC的密切关系,肠道微生态已成为CRC新诊断方法的主要选择之一,主要研究方向是肠道中的细菌、病毒及其代谢产物的种类与数量的检测。本文就近年来关于肠道微生态对CRC诊断作用的相关热点问题进行概述,并展望肠道微生态在CRC诊断作用研究的主要方向及预期进展,旨在为通过肠道微生态诊断CRC提供理论依据。

     

GJA1在结直肠癌组织中表达及促进侵袭转移的研究

摘要 目的：间隙连接Alpha-1蛋白（Gap Junction Alpha-1,GJA1）是间隙连接中分布最广泛的蛋白,并在多种肿瘤中起促癌作用,但其在结直肠癌发生、发展的作用研究甚少。本实验旨在探究GJA1在结直肠癌组织中的表达情况及其对结直肠癌细胞系侵袭、转移能力的影响,以期为结直肠癌的诊断和预后寻找新的生物标志物。方法：收集92对结直肠癌及其癌旁组织样本,提取组织RNA,利用qRT-PCR检测GJA1相对表达量,并分析GJA1表达与临床病理特征及预后的相关性。在HCT116和HCT8两种结直肠癌细胞系中分别构建GJA1过表达载体和敲减载体,利用qRT-PCR和、Western Blot检测上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表达变化,利用Wound healing和Transwell实验观察其迁移、侵袭能力的变化。结果：相对于癌旁组织,GJA1在结直肠癌组织中显著低表达。并且结直肠癌中低表达的GJA1与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴血管转移相关,低表达GJA1结直肠癌患者显示更差的总体生存率和更低的无病生存率。此外,过表达GJA1后,结直肠癌细胞E-cadherin的表达升高,N-cadherin、Vimentin和Snail的表达降低,划痕愈合减慢,Transwell转移细胞减少;而敲减GJA1后,结直肠癌细胞E-Cadherin的表达降低,N-Cadherin、Vimentin和Snail的表达升高,划痕愈合加快,Transwell转移细胞增多。结论：GJA1在结直肠癌中低表达,其表达降低可通过EMT促进结直肠癌的侵袭、转移并影响病人预后。     

窄带成像技术联合放大内镜在早期胃癌诊断中的价值

目的:评估比较窄带成像技术联合放大内镜(narrow band imaging-magnifying endoscopy,NBI-ME)在早期胃癌诊断中价值。方法:115例早期胃癌患者行NBI-ME观察,采集照片并做出内镜下诊断,于病灶最明显处取活检并行病理检查。所有患者接受内镜下治疗,术后行病理活检。分别计算NBI-ME、内镜活检诊断早期胃癌的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率。结果:115例患者纳入本研究,最终术后切除病理示低级别上皮内瘤变(low-grade neoplasia,LGIN)16例,高级别上皮内瘤变(high-grade neoplasia,HGIN)30例,分化型胃癌59例,未分化型胃癌10例。NBI-ME诊断早期胃癌的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率分别为98.0%、81.3%、97.0%、86.7%、95.7%,内镜活检的对应值分别为82.8%、87.5%、97.6%、45.2%、83.5%。NBI-ME诊断早期胃癌的敏感度及准确率均明显高于内镜活检(P0.05)。结论:NBI-ME对早期胃癌具有较高诊断价值。     

腹腔镜下完整系膜切除术治疗结肠癌的临床效果

目的:探讨腹腔镜下完整系膜切除术治疗结肠癌中的临床效果及安全性。方法:选取2015年1月至2017年5月在本院经纤维结肠镜及活组织病理检查确诊为结肠癌的患者作为研究对象,并按照手术方式不同分为开腹手术组及腹腔镜手术组两组,每组各选取93例。开腹手术组采用开腹完整结肠系膜结肠癌根治术进行治疗,腹腔镜手术组采用腹腔镜下完整结肠系膜切除结肠癌根治术进行治疗,比较两组的手术指标、术后并发症和手术质量。结果:与开腹手术组比较,腹腔镜手术组手术时间延长,术中出血量减少,术后排气时间缩短,术后引流量减少,引流管拔管时间缩短,住院时间缩短(P0.05)。腹腔镜手术组术后并发症总发生率(20.43%)显著低于开腹手术组(35.48%)(P0.05);切口相关感染发生率(1.08%)明显低于开腹手术组(6.45%),但差异无统计学意义(P0.05);总感染发生率(11.83%)低于开腹手术组(30.11%)(P0.05)。腹腔镜手术组与开腹手术组均达到完整系膜切除标准,肿瘤组织、系膜等均整块完整切除且系膜未发现损伤,切除标本质量分级达到C级及以上,切除肠管均距离恶性肿瘤上缘10 cm、下缘15 cm,且对切除肠管上切缘及下切缘的病理组织学检查结果均未发现恶性肿瘤细胞。腹腔镜手术组与开腹手术组在清扫淋巴结数量、肿瘤TNM病理分期方面比较均未发现具有统计学差异(P0.05)。腹腔镜手术组肿瘤大小明显小于开腹手术组(P0.05)。结论:腹腔镜下完整系膜切除术治疗结肠癌的手术创伤小,可降低术后并发症发生率,但手术时间还有待优化,应用指征还有待进一步拓宽。     

见微知著：微生物对人体恶性肿瘤诊疗研究带来的机遇与挑战

微生物与人体共生共存,主要分布在口腔、鼻腔、阴道、肠道、皮肤等部位,目前的研究已经表明微生物的分布特异性、种群的动态变化在人体恶性肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用,为该领域今后的临床诊疗带来了全新的机遇和挑战。因此,笔者着重阐述微生物在口腔癌、胃癌、胆囊癌、胰腺癌、结直肠癌等常见恶性肿瘤中的作用及临床研究进展。旨在帮助临床医师了解目前微生物肿瘤学的发展现状及机遇与挑战。     

缺氧通过SIRT1调控结直肠癌细胞自噬

目的:探究缺氧调控结直肠癌细胞自噬的分子机制。方法:分别在常氧及缺氧(1%氧气浓度)条件下处理细胞,western blot检测细胞内沉默信息调节因子1(Silencing Information Regulator 1,SIRT1)及自噬相关标志分子的表达情况;慢病毒转染构建SIRT1稳定过表达或敲减细胞株,利用透射电镜观察细胞内自噬体形成的情况;使用m RFP-GFP-LC3双标腺病毒感染细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞自噬流的进展。结果:Western blot结果显示,缺氧条件下,HCT116及SW480细胞内SIRT1的表达水平随着缺氧时间的延长而降低,自噬特异性底物p62蛋白水平降低且LC3-I/II转换增加;与对照组相比,SIRT1过表达细胞内自噬特异性底物p62的表达水平升高而LC3-I/II转换受到抑制;相反在SIRT1敲减细胞内,p62的表达水平降低而LC3-I/II转换进一步促进。透射电镜结果发现SIRT1过表达后,细胞内自噬溶酶体形成减少、自噬体数量增多;激光共聚焦结果显示,SIRT1过表达细胞内绿色荧光淬灭减少、自噬体与自噬溶酶体的融合收到明显抑制,说明SIRT1通过抑制自噬溶酶体的形成,阻断自噬流的进展。结论:缺氧通过抑制SIRT1的表达促进结直肠癌的细胞自噬。     

丙戊酸协同顺铂抑制乳腺癌和结直肠癌细胞生长

摘要 目的：探究丙戊酸（Valproic acid, VPA）协同顺铂抑制乳腺癌和结直肠癌细胞增殖。方法：首先使用Western blot 检测 VPA 对Acetyl-Histone H3蛋白水平的影响,使用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测 VPA 对乳腺癌和结直肠癌细胞的细胞活力的影响。其次单药顺铂、VPA 和联合用药处理乳腺癌细胞 MDA-MB-231 和结直肠癌细胞 HCT-15,使用 IncuCyte 动态检测细胞生长过程和生长终点。结果：发现VPA 可抑制组蛋白去乙酰化酶的功能,升高Acetyl-Histone H3的蛋白水平,VPA 可抑制乳腺癌细胞和结直肠癌细胞增殖,且对 VPA 的药物敏感性相似;顺铂和 VPA 连用后可显著抑制乳腺癌和结直肠癌细胞增殖和活力。结论：本文发现 VPA 抑制组蛋白去乙酰化酶发挥抑制乳腺癌和结直肠癌细胞生长的新机制,并可以与顺铂连用提高抗肿瘤效果和药物敏感性,为同时患有癫痫和肿瘤的人群提供新的治疗思路。     

结直肠癌COX-2表达及其与临床病理特征的相关性分析

目的:探讨结直肠癌环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达及其与临床病理特征的相关性。方法:选择2017年8月～2019年6月在本院外科手术诊治的结直肠癌患者60例,取所有患者的病灶组织标本与癌旁组织标本,采用PCR与免疫组化法检测COX-2 mRNA与蛋白表达情况,分析其与患者的临床病理特征的相关性。结果:直肠癌组织COX-2 mRNA与蛋白表达阳性率分别为63.3%和55.0%,显著高于癌旁组织的20.0%和16.7%(P0.05)。随着结直肠癌的病理分期及分化程度的增加、淋巴结转移的发生,直肠癌组织的COX-2 mRNA、蛋白表达阳性率显著升高(P0.05)。Spearman等级相关分析显示直肠癌组织的COX-2 mRNA、蛋白表达阳性率与临床分期、组织学分化与淋巴结转移都存在显著相关性(P0.05)。Cox模型多因素分析显示临床分期、组织学分化与淋巴结转移都是影响COX-2蛋白表达的主要因素(P0.05)。结论:结直肠癌COX-2的mRNA与蛋白都呈现高表达,与患者的临床分期、组织学分化与淋巴结转移显著相关。     

符合大肠癌早期无创分子诊断要求的粪便DNA样本贮存条件考察

目的:考察在不同温度下储存时间和反复冻融对粪便中人基因组DNA含量的影响。方法:1.将粪便样本在室温、4℃、-40℃和-70℃条件下分别放置不同时间和-40℃条件下保存并反复冻融后,使用QIAamp DNA Stool Mini Kit试剂盒提取得到粪便DNA,通过实时荧光定量PCR体系对人KRAS基因定量确定人基因组DNA含量,评价粪便样本不同冻存条件对其中人基因组DNA含量的影响。2.将粪便DNA样本在4℃和-40℃条件下分别放置不同时间和-40℃条件下保存并反复冻融后,评价粪便DNA样本不同冻存条件下对其中人基因组DNA含量的影响。结果:1).粪便样本常温放置2小时,其中人基因组DNA即发生明显降解(P0.01),4℃可保存3天左右,-40℃可保存4周,-70℃可保存3个月以上,粪便反复冻融第3次,其中人基因组DNA降解具有统计学意义(P0.05)。2).粪便DNA 4℃可保存3天,-40℃可保存4周,粪便DNA反复冻融第4次,其中人基因组DNA降解具有统计学意义(P0.05)。结论:符合大肠癌早期无创分子诊断要求的粪便DNA贮存条件:粪便样本室温收集后尽快保存;短期可处理的粪便样本存放在4℃条件下(3天内);暂无法处理则存于-40℃(1个月内);粪便样本长期保存在-70℃条件下,可保存3个月。