七叶皂苷钠对细菌性脑膜炎大鼠RhoA/ROCK通路及血脑屏障通透性的影响CSCD

目的探讨七叶皂苷钠(SA)对细菌性脑膜炎(BM)大鼠肉瘤同源基因A(RhoA)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)通路及血脑屏障通透性的影响。方法将SD新生大鼠随机分为正常对照组、模型组、SA低剂量(1.75 mg/kg)组、SA中剂量(3.50 mg/kg)组、SA高剂量(7.00 mg/kg)组和阳性对照(青霉素,0.18 g/kg)组,每组20只。除正常对照组外,其余各组大鼠均经小脑延髓池注射B族溶血性链球菌建立BM模型,建模成功后经腹腔注射给予相应剂量药物,连续给药3 d,2次/d。末次给药12 h后,处死大鼠,采用酶联免疫吸附试剂盒(ELISA)检测脑脊液中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;血细胞分析仪检测脑脊液中白细胞(WBC)数量;伊文思蓝(EB)染色法检测大鼠血脑屏障通透性;干湿比重法计算各组大鼠脑组织含水量;免疫组化法检测脑皮质组织RhoA、ROCK阳性表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测脑皮质组织血脑屏障相关分子闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、水通道蛋白4(AQP4)及RhoA/ROCK通路相关蛋白肌球蛋白轻链(MLC)、丝切蛋白1(Cofilin1)相对表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠神经行为评分及脑皮质组织中ZO-1蛋白、Claudin-5蛋白、AQP4蛋白表达降低(均P<0.05),脑脊液WBC数量、IL-6水平、TNF-α水平、脑含水量、脑组织EB含量、脑皮质组织RhoA与ROCK阳性表达、p-MLC/MLC、p-Cofilin1/Cofilin1蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型组相比,SA低、中、高剂量组与阳性对照组大鼠神经行为评分及脑皮质组织中ZO-1蛋白、Claudin-5蛋白、AQP4蛋白表达升高(均P<0.05),脑脊液WBC数量、IL-6水平、TNF-α水平、脑含水量、脑组织EB含量、脑皮质组织RhoA与ROCK阳性表达及p-MLC/MLC蛋白、p-Cofilin1/Cofilin1蛋白表达降低(均P<0.05);SA中、高剂量组上述指标变化优于SA低剂量组(P<0.05),阳性对照组上述指标变化弱于SA低剂量组(P<0.05);SA中剂量组与高剂量组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论SA可改善BM大鼠脑水肿及血脑屏障通透性,且其改善血脑屏障损伤的作用可能与抑制RhoA/ROCK通路激活有关。     

二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响

目的观察二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响,研究其对血脑屏障紧密连接是否具有保护作用。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组及二氮嗪预处理组,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分别应用免疫组化染色和Western blot检测各组大鼠ZO-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果 1.假手术组ZO-1、Claudin-5在血管上的染色连续、丰富,缺血再灌注组ZO-1、Claudin-5的染色稀少、断续,二氮嗪预处理组染色较缺血再灌注组有所改善;2.Western blot定量测定与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠脑组织中ZO-1和Claudin-5蛋白表达均明显下降(P0.01),与缺血再灌注组相比,二氮嗪预处理组ZO-1和Claudin-5的蛋白表达明显增多(P0.05)。结论二氮嗪对血脑屏障紧密连接具有保护作用,其机制可能与增加紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5的表达有关。     

脂筏、紧密连接和血脑屏障的关系

血脑屏障破坏是缺血性脑卒中急性期发生脑水肿及神经元毒性损害的核心病理过程之一,目前尚无特效保护方法。血脑屏障通透性调节的中心环节是内皮细胞的紧密连接,而紧密连接结构蛋白表达水平和位置分布的变化与脑微血管通透性的改变及脑水肿的程度密切相关。脂筏是高流动性的细胞膜脂质双层内富含胆固醇的特殊脂质和蛋白质的动态微区,它参与细胞蛋白转运。血脑屏障上有大量的脂筏存在,紧密连接结构蛋白分布于脂筏中,其功能受胆固醇调节,且脂筏上紧密结合的脂质有利于蛋白质的寡聚化。因此,基于脂筏调节血脑屏障紧密连接可能为脑保护研究提供新的药物靶点。     

心衰大鼠血脑屏障通透性改变对认知功能的影响及机制研究

摘要 目的：观察大鼠心衰（HF）后血脑屏障通透性的改变,并探讨HF后认知功能障碍的可能机制。方法：本实验采用成年雄性SD大鼠85只,体重300-350 g,将大鼠随机分为5组：假手术组、心力衰竭组、空白对照组、心力衰竭+TAK242组、心力衰竭+抗生素组。造模24 h后采用TTC染色法检测大鼠心肌梗死面积,采用荧光素钠检测血脑屏障通透性的改变,采用蛋白印迹法检测大鼠海马和皮质中炎症蛋白MMP-9与NF-κB表达表达情况。造模4周后采用超声检测大鼠心功能情况,Morris水迷宫法检测大鼠行为学改变,采用HE染色法检测大鼠心脏组织病理学改变。结果：与Sham组相比,HF组大鼠术中循环和血气分析无明显差异（P>0.05）。与Sham组相比,HF组大鼠术后24 h可见清晰的心肌梗死灶,荧光素钠通透性增加,大鼠海马和皮质内炎症蛋白MMP-9与NF-κB表达升高。与HF组比较,给予TAK242的HF组大鼠认知功能得到改善,给予抗生素的HF大鼠认知功能降低。结论：NF-κB /MMP-9炎症通路激活诱导的血脑屏障通透性改变可能是HF后认知功能障碍的作用机制之一。     

大鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养

为了建立大鼠脑微血管内皮细胞体外培养模型,探索纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法并进行形态学观察。采用2～3周龄的SD大鼠,解剖得到大脑皮质,两次酶消化及牛血清白蛋白或葡聚糖和Percoll梯度离心获得较纯的脑微血管段后,接种于涂布基质的培养皿进行原代培养;培养的细胞采用相差显微镜形态学观察、透射电镜观察及Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测鉴定。结果发现,培养12h即可见细胞从贴壁的脑微血管段周围长出,细胞呈短梭形,区域性单层生长,5～7天内皮细胞融合,内皮细胞纯度达90％以上;内皮细胞的贴壁和生长有赖于所涂布的基质,纤连蛋白／Ⅳ型胶原优于鼠尾胶和明胶;Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达阳性,透射电镜观察可见相邻内皮细胞间存在紧密连接结构。提示该方法能成功进行纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养,可用于脑微血管内皮的生理、生化及药理学研究,亦可用于构建大鼠血脑屏障模型。     

柔肝固肠方改善慢性酒精性肝损伤大鼠肠道通透性的机制研究

目的：从肠道紧密连接及黏附连接角度探讨柔肝固肠方改善慢性酒精性肝损伤大鼠肠道通透性的作用机制。方法：Lieber-DeCarli酒精液体饲料饲养6周诱导大鼠慢性酒精性肝损伤模型。30只SD雄性大鼠,随机分无酒精液体饲料对照组（对照组,n＝10）和酒精液体饲料造模组（n＝20）,造模第4周将造模组大鼠随机分模型组（n＝10）,柔肝固肠方组（n＝10）,并开始灌胃给柔肝固肠方或蒸馏水直至6周末,取材前3．5 h各组以10 mg／kg的内毒素（LPS）灌胃。取材后检测：1）血清AST、ALT活性变化;2）通过门脉血浆内毒素含量测定判断小肠通透性变化;3）小肠组织电镜超微结构观察;4）小肠紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白与mRNA表达变化;5）小肠黏附连接蛋白β-Catenin和E-Cadherin蛋白表达。结果：1）柔肝固肠方可显著降低模型大鼠显著升高的AST水平（P＜0．05）;2）柔肝固肠方可降低模型大鼠显著升高的小肠通透性,柔肝固肠方组血浆内毒素含量显著低于模型组;3）电镜结果显示柔肝固肠方可显著改善Lieber-DeCarli酒精饲料喂养大鼠小肠黏膜表面微绒毛局灶性减少、变短、稀疏,排列不规则,同微绒毛相连的细胞终末网变性模糊等病理改变;4）柔肝固肠方可显著升高酒精饲料喂养肝损伤大鼠小肠组织紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白与mRNA表达及黏附连接蛋白β-Catenin和E-Cadherin蛋白表达。结论：柔肝固肠方通过改善肠上皮紧密连接及黏附连接改善慢性酒精性肝损伤大鼠肠道通透性改变。     

益生菌对胆汁淤积性黄疸大鼠小肠上皮细胞紧密连接蛋白的影响

目的探讨双歧三联活菌(培菲康)对胆汁淤积性大鼠小肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1(zonula oc-cludens-1)和Occludin表达的调控机制。方法雄性3周龄SD大鼠随机分为对照组、模型组和培菲康组,模型组和培菲康组均给予α-异硫氰酸萘酯(ANIT)50 mg/kg一次性灌胃,建立急性肝内胆汁淤积动物模型,培菲康组于造模前4 d开始给予培菲康4.2×107个活菌数/(kg.d)灌胃大鼠。分别于造模后24、48和72 h三个时间点处死大鼠,取末端回肠黏膜组织,采用免疫组化和Western blots免疫印迹法检测紧密连接蛋白ZO-1、闭锁蛋白(Occludin)的分布和表达,并利用图像分析系统对Western blots图像结果进行定量分析。结果ZO-1和Occludin蛋白主要沿大鼠小肠黏膜上皮细胞膜的顶端呈线状分布,模型组大鼠24 h时ZO-1和Occludin的阳性染色较对照组减少,48 h减少最为明显,72 h阳性染色有所恢复,而培菲康组大鼠各时间点ZO-1和Occludin的阳性染色和模型组相比均明显增多。Western blots结果与免疫组织化学结果相一致,模型组24 h已经开始下降(ZO-1 0.1294±0.0481)、(Oc-cludin 0.1950±0.0441),48 h达到最低(ZO-1 0.0395±0.0095)、(Occludin 0.0137±0.0092),72 h开始恢复(ZO-10.2024±0.0498)、(Occludin 0.1494±0.0355),各时间点与对照组(ZO-1 0.2887±0.0237)、(Occludin 0.4266±0.0670)相比差异有统计学意义(P0.01);而培菲康组各时间点蛋白表达分别为24 h(ZO-1 0.2110±0.0367)、(Occludin 0.3056±0.0572),48 h(ZO-1 0.1173±0.0423)、(Occludin 0.0521±0.0123),72 h(ZO-1 0.2601±0.0191)、(Occludin 0.2050±0.0721),与模型组相应时间点数据相比差异有统计学意义(P0.05)。结论双歧三联活菌能够影响胆汁淤积性大鼠小肠黏膜上皮紧密连接蛋白的分布和表达,可以恢复肠黏膜上皮屏障的完整性。     

肾上腺皮质能调制血脑屏障的通透性

在临床上,地塞米松和其他糖皮质激素已广泛应用于治疗脑水肿,从而能减轻由药物所引起的急性高血压、反复发作性癫痫或高渗性脑组织灌流对血脑屏障的损伤。提示肾上隙皮质可能参与对血脑屏障完整性的调节,并对脑微血管的通透性有一定的影响。为了证实这一推测,Long 等对此进行了实验观察。实验用雄性大鼠。将动物分成肾上腺切除组、去肾上腺髓质组、肾上腺切除加皮质酮替代治疗组,每     

非酒精性脂肪性肝病大鼠肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1及肌球蛋白轻链激酶的变化

目的:研究不同阶段非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的变化。方法:将60只雄性清洁级SD大鼠随机分为两组:正常饮食组(NDG)和高脂饮食组(FDG)。于4周、8周、12周时观察各组大鼠肝脏病理学改变;应用ELISA方法测定各阶段大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)的变化;应用鲎实验测定各阶段大鼠门静脉血中内毒素(ET)水平;应用免疫组化方法检测肠道粘膜肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及紧密连接蛋白(ZO-1)的表达及分布情况。结果:随着高脂饮食时间增长,高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变性程度逐渐加重;血清ALT、AST、TG、CHOL水平逐渐升高(4周时,P0.05,8周和12周时P0.05);大鼠血浆内毒素的水平逐渐上升(0.11±0.01比0.11±0.01,P0.05;0.36±0.01比0.11±0.01,P0.05;0.44±0.15比0.18±0.03,P0.05);高质饮食组较正常饮食组大鼠紧密连接蛋白ZO-1表达逐渐下降(3.6±0.7比3.9±0.32,P0.05;2.8±0.63比3.8±0.42,P0.05;1.8±0.79比3.7±0.48,P0.05),MLCK表达逐渐增多(0.5±0.53比0.3±0.48,P0.05;1.3±0.48比0.4±0.52,P0.05;1.9±0.74比0.5±0.53,P0.05)。结论:肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1及MLCK可通过影响肠粘膜屏障功能,改变肠粘膜的通透性,促进非酒精性脂肪肝病发生发展。     

糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障结构的损伤及其机制

目的：研究糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障结构关键蛋白紧密连接蛋白（ZO-1）、基底膜蛋白（CoIV）、周细胞蛋白（a-SMA）的表达情况及其损伤机制。方法：采用高脂灌胃14 d后,再尾静脉注射链脲佐菌素（STZ,38mg/kg）,随机分为2组（n=15）：糖尿病组和糖尿病并发抑郁症组;正常大鼠随机分为2组（n=15）：空白对照组和抑郁症组。糖尿病组与空白对照组正常饲养,糖尿病并发抑郁症组和抑郁症组慢性不可预知性应激28 d。检测各组大鼠血糖值的变化,Open-field及Morris实验评价大鼠行为学变化,透射电子显微镜观察大鼠海马血脑屏障形态学改变,免疫组化法检测大鼠海马血脑屏障关键蛋白ZO-1、CoIV、a-SMA表达情况。结果：与空白对照组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠血糖异常升高,自主活动次数减少,逃避潜伏期延长,空间探索时间减少（P < 0.05,P < 0. 01）;海马血脑屏障内皮模糊,毛细血管管腔狭窄,周边胶质细胞终足水肿,ZO-1、α-SMA表达显著减少（P < 0. 05）,CoIV的表达显著增加（P < 0.05）;与糖尿病组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠自主活动次数显著减少（P < 0. 01）,逃避潜伏期延长（P < 0.05）,海马血脑屏障毛细血管管腔更为狭窄、胶质细胞终足水肿更为明显,a-SMA表达显著下降（P< 0.05）。结论：糖尿病并发抑郁症血脑屏障关键蛋白ZO-1、CoIV、α-SMA表达紊乱可能是其结构损伤发生机制之一。     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

真菌类遗传学分析的知识结构教学

本文以认知结构理论为指导,讨论了真菌类遗传分析与高等动植物遗传分析的内在联系,认为利用这种内在联系进行教学可收到好的效果并说明了作者的具体教学过程。 Abstract:In the paper, the relationship between genetic analysis of Fungi and genetic analysis of high animal and plant was discussed.A good results were obtained when we adopted this method in the teaching.     

医疗机构合理用药评价模型的构建研究

目的 针对医疗机构的合理用药水平进行评价研究。方法 根据医疗机构合理用药的具体要求,构建医疗机构合理用药评价指标体系,采用基于模糊群决策的方法和多指标评价分析法构建医疗机构合理用药评价模型。结果 构建了基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型,并通过实例分析证明了评价模型的可行性。结论 建立的基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型能够对医疗机构的合理用药水平进行科学评价,为提高医疗机构合理用药水平奠定基础。     

棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测

用重组表达的棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠钙粘蛋白N端多肽片段制备兔多克隆抗体,并利用其对Bt抗性进行鉴定。通过RT-PCR方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白N端多肽的基因片段Cad285进行PCR扩增,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,得到35ku的重组融和蛋白,融合表达的包涵体经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16000;利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合Bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行Western blot分析,结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异,表明其能够应用对Bt抗性进行初步检测。     

Cause of Senescence of Nine Sorts of Flowers

The levels of endogenous phytohormones and respiratory rate in nine sorts of flowers such as Cymbidium faberi Rolfe, Nopalxochia ackermannii Kunth and others were investigated both at full bloom and senescence and meanwhile the effect of exogenous phytohormones on prolonging the blossoms and promoting ethylene production were tested. There is a high content of endogenous ethylene in all the long-lived flowere, about 3–16 folds higer than the short-lived ones. There is a high level of ABA at full blooming flowers of short-lived flowers, in which there is no or only some cytokinins in it, but the ratio of CTK (6BA+zeatin)/ABA is smaller(l.7). The endogenous ABA reached a much higher level at senescence in all nine sorts of flowers, so it is reasonable to consider that it is ABA which plays an important role of regulation in controlling flower's senescence. There is a much higher level of GA3 and zeatin in the long-lived flowers which is not demonstrated in the shortlived ones. The respiratory rate is one of the factors controtling the longevity of flowers, but it does not play a decided role. Application of 6BA and zeatin prolongs distinctly orchid’s longevity, however exogenous IAA through the promotive action on ethylene production, evidently extends the longevity of the flowers of the Nopalxochia ackermannii Kunth.     

青蒿素生物合成机理研究现状

本文总结了目前有关青蒿素生物合成机理方面的研究,主要包括青蒿素生物合成中生理因子的影响,青蒿素生物合成中间体及前体,青蒿素生物合成细胞定位等。指出了存在的一些问题及今后的研究发展前景。     

龙胆科药用植物化学成分的研究现状

龙胆科植物在我国的分布范围很广,且多数为药用植物,其多数种属的药用植物,至今其化学成分尚未被系统研究。综述了目前龙胆科药用植物的化学成分的研究现状及一般提取方法,对近年来发现的环烯醚萜及裂环烯醚萜类化合物进行了总结,为本科药用植物的更深入研究提供了参考。