响应面法优化氧化胁迫提高透明质酸分子量

本文研究了氧化剂NaClO胁迫培养兽疫链球菌Streptococcuszooepidemicus对透明质酸(HA)分子量的影响。运用响应面分析法优化发酵工艺条件,在单因素实验基础上,采用中心复合法研究了NaClO的加入时间和加入浓度对HA分子量的影响。利用Mintab 16软件分析确定最佳提取工艺,根据实际条件,得到HA最佳的发酵工艺参数为:NaClO加入时间7 h,NaClO加入浓度为0.415 mL/L。HA分子量由178万Da提高到219万Da。     

由透明质酸发酵液制备高纯度透明质酸的方法

为简化由透明质酸发酵液制备高纯度透明质酸的过程,本实验利用氯苯除去菌体,由乙醇分离得到透明质酸提取物,向提取物中加入由4.2 g/L碳酸氢钠和5.3 g/L碳酸钠以体积比为45:5组成的水溶液及胰蛋白酶进行水解.水解后所得分离物在磷酸二氢钠含量为0.45 g/L,磷酸氢二钠含量为0.05 g/L及氯化钠含量为11.6 g/L的水溶液中溶解,向其中加入3倍体积的95%乙醇,得到沉淀,绝干的沉淀物中透明质酸质量比为98.9%.随后,经活性炭以及透析处理.最终透明质酸质量比为99.996%,相对分子量5.8×105.总回收率96.17%.     

一株具有褐藻胶降解能力的海洋细菌的筛选鉴定及其多糖利用能力研究

旨在得到一株具有褐藻胶降解能力的菌株。利用海藻酸钠作为唯一碳源,从腐烂马尾藻中筛选纯化得到一株降解褐藻胶能力较强的海洋细菌,编号X511。根据形态观察和理化指标,结合分子生物学技术鉴定该菌株为弧菌,命名Vibrio sp.X511。X511菌株的指数生长期5-16 h,适宜生长的盐浓度为2%-6%(W/V)。能在以葡萄糖、甘露醇、淀粉等为唯一碳源的培养基中生长。4%-6%(W/V)的盐浓度、海带粉、昆布多糖能延长该菌株的生长稳定期。该菌株在筛选培养基中发酵培养24 h胞内褐藻胶裂解酶粗酶活力达到12.68±0.13 U/m L;提取X511的褐藻胶裂解酶粗酶,分别对海藻酸钠、聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸三种多糖的酶解能力依次为:海藻酸钠聚甘露糖醛酸聚古罗糖醛酸。薄层层析(TLC)结果显示,该菌株胞内酶降解海藻酸钠的产物为三糖。结果表明,X511是一株盐耐受性较强、生长周期较短且能同时以海藻酸钠、聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸为碳源生长的海洋细菌。     

酶法协同超声波提取赤芝菌丝体多糖条件的优化

目的:本研究旨在优化赤芝菌丝体多糖提取条件。方法:采用酶法协同超声波法提取赤芝菌丝体多糖,以赤芝菌丝体粗多糖提取率为考察目标,通过单因素试验和正交试验,确定赤芝菌丝体多糖提取的最佳条件。结果酶法最佳提取条件为:果胶酶用量2.0%,酶解温度45℃,p H值为6.0,酶解时间60 min,多糖提取率为2.38%。在酶法处理基础上,进行超声波处理,超声处理最佳提取条件是:超声功率550 W,超声时间30 min(占空比5s/5s),料液比为1:35,多糖提取率为3.12%。     

红托竹荪菌托多糖提取工艺及抗氧化降血糖活性

为利用红托竹荪菌托,采用酶解法提取菌托多糖,优化多糖提取工艺,并测定多糖分子量、单糖组成、抗氧化及降血糖活性。结果表明,最佳酶解法提取工艺为纤维素酶2.5%、果胶酶0.4%、木瓜蛋白酶1.5%,50 ℃酶解1 h,料液比1:60、提取温度80 ℃、时间3 h,该条件下多糖提取率达15.37%,比热水浸提法提高39.60%。酶解法多糖分子量为3 344 Da (Mn)、522 208 Da (Mw)、2 929 Da (Mp),主要由葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖和岩藻糖等组成,葡萄糖占最高,达48.82%。菌托多糖为2.0 mg/mL时,DPPH·清除率为93.83%,Fe³⁺还原能力为0.140 7,α-葡萄糖苷酶活性抑制率为54.62%、α-淀粉酶活性抑制率为56.45%,与热水浸提法相比差异极显著或显著。酶解法提取红托竹荪菌托多糖,提取率较高,具有较高的抗氧化、降血糖活性,具有推广应用价值。     

米曲霉氨基酰化酶的双水相萃取研究

本文利用聚乙二醇和磷酸盐组成的水溶液双相系统,从米曲霉(Aspergillus oryzae)中提取氨基酰化酶。通过实验对影响氨基酰化酶分配的各参数进行了研究,确定了最适体系:PEC-1540 10％(W/V),K_2HPO_418％(W/V),pH8.5;PEG-154010％(W/V),K_2HPO_412％(W/V),NaCl 0.5mol/L,pH8.5。二步萃取收率90％,纯化倍数9。为实验室和工业上采用双水相系统萃取氨基酰化酶提供了一个新方法。     

联合提取铁皮石斛中生物碱及多糖的研究

为提高铁皮石斛有效成分的综合利用效率,本研究利用闪式提取法对其中的生物碱、结合多糖与游离多糖进行了联合提取,并对酶解条件进行了优化。通过单因素试验所确定的最佳酶解条件为:料液比1∶30、纤维素酶添加量32 U/g、木瓜蛋白酶添加量39200 U/g、酶解时间2.5 h。生物碱、结合多糖及游离多糖的得率分别为0.136%、4.2%及19.3%;纯度分别为78.2%、81.3%及90.6%。利用GPC测定所提取的结合多糖及游离多糖的重均分子量分别为2373 Da、17987 Da。本研究确定了利用铁皮石斛联合制备生物碱及多糖的工艺,本工艺方法简便、成本低廉,适于工业化生产。     

几种蛋白酶对文蛤肉的酶解工艺条件研究

以文蛤为原料,水解度为指标,从胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,胃蛋白酶和风味蛋白酶中选出水解效果较好的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶.并通过实验确定了胰蛋白酶,木瓜蛋白酶单酶水解及两者组合复合酶解文蛤肉的最佳工艺.结果表明:复合水解效果最佳.最佳工艺:先添加胰酶6000 u/g(原料),水解温度50℃,固液比1:3(V/W),pH 8.0,在此条件下水解6 h;然后改变条件,温度55℃,pH 5.5,底物浓度1:3(V/W),添加木瓜蛋白酶2000 u/g(原料),在此条件下水解2 h.通过实验验证,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组合在该条件下对文蛤肉蛋白具有较好的水解效果,其水解度为28.15%.     

Alkalitalea saponilacus产木聚糖酶的碳源优化及酶学特性

【目的】确定厌氧盐碱细菌Alkalitalea saponilacus产木聚糖酶所需的碳源,优化木聚糖粗酶的提取条件并分析酶学性质。【方法】应用GC技术分析A.saponilacus发酵木聚糖的主要产物;利用二硝基水杨酸法(DNS)测定木聚糖酶活力以获得最优的碳源、提取粗酶的最佳条件及其酶学特性。【结果】A.saponilacus以不同来源木聚糖为底物时,发酵产生的主要产物丙酸含量都在80%以上。若以0.4%(W/V)蔗糖+0.1%(W/V)桦木木聚糖为复合碳源时,木聚糖酶活力是以桦木木聚糖或者蔗糖为单一碳源时的3.2倍。木聚糖酶的酶活力在盐度2%–6%、pH 7.0和55°C达到最佳且在该条件下的酶活力为590 IU/mg。此外,该酶活力在0.2%Tween 20存在时增加,而在5 mmol/L Mg~(2+)和0.2%Triton X-100存在时无显著影响,但在Cu~(2+)、Fe3+和Ni~(2+)等金属离子存在时则被显著抑制。【结论】A.saponilacus发酵主产物丙酸以及生物合成的木聚糖酶在工业生产中具有广泛的应用前景。     

酶法提取葡萄穗轴中原花色素、白藜芦醇的研究

将纤维素酶用于葡萄穗轴中原花色素和白藜芦醇的提取工艺中.即在乙醇提取前,先用纤维素酶处理葡萄穗轴粗粉.通过实验确定最佳的酶解条件为:酶解体系pH 6,酶解温度30 ℃,酶解时间80 min,m(纤维素酶):m(葡萄穗轴粗粉)=1∶ 250.实验还对酶解后乙醇提取条件进行优化:40%乙醇溶液为提取剂,提取温度80 ℃,提取时间120 min.提取液通过溶剂萃取进行分离,用香草醛-盐酸法和紫外分光光度法分别测定其中原花色素和白藜芦醇的含量.与传统直接醇提法相比,原花色素的提取率提高了近4倍,白藜芦醇的提取率也有所提高.     

小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备与再生研究

旨在获得数目多且活力高的小花棘豆Embellisia内生真菌的原生质体,分析和探讨该内生真菌原生质体制备与再生的最佳条件,为后续外源基因转化奠定基础。利用酶解法对制备小花棘豆Embellisia内生真菌菌丝的原生质体,研究酶解液成分、p H、温度、渗透压稳定剂、酶解时间及菌龄对原生质体制备和再生的影响;原生质体在TB3培养基上再生后,研究酶解时间对原生质体再生的影响。结果显示,2.5%(W/V)lysing enzymes、2%(W/V)纤维素酶和3%(W/V)蜗牛酶3种混合酶处理,菌龄为10 d,当酶解温度为30℃、p H5.8、1.2 mol/L Mg SO4为渗透压稳定剂,在80 r/min水平摇床酶解8 h时,原生质体浓度较高,达4.42×105个/m L;酶解时间6 h时再生率最高,达46.7%。     

响应面分析法优化乙酸乙酯萃取番茄红素条件的研究

采用响应面方法对番茄酱提取番茄红素过程中的乙醇预处理方法、萃取剂萃取时间等工艺条件进行了优化。采用Central Composite Design(CCD)设计法,对超声波提取法和微波提取法中的乙醇预处理、萃取剂萃取时间、超声波或微波萃取功率、溶剂量4个因素对番茄红素提取率的影响进行评价。结果显示,最佳提取方法为超声波提取法,无水乙醇∶番茄酱的2.05∶1(V/W);乙酸乙酯∶番茄酱10.1∶1(V/W);提取时间为490 s;超声波提取功率为405 W;提取率为94.42%。微波提取最佳方法为,无水乙醇∶番茄酱的2.11∶1(V/W);乙酸乙酯∶番茄酱10.1∶1(V/W);提取时间为372.6 s;微波提取功率为569.5 W;提取率为81.51%。     

具有ACE抑制活性的霞水母酶解肽制备条件优化

目的:采用胰蛋白酶制备霞水母ACE抑制肽,并以响应面法优化酶解肽制备工艺,通过超滤分离获得具有ACE抑制作用的酶解肽活性部位。方法:单因素实验以ACE抑制率为指标,考察温度、酶解时间、pH、加酶量,进一步通过响应面法优化酶解工艺,以不同截留分子量的纤维膜进行分离。结果:胰蛋白酶水解霞水母制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶解温度:49.6℃,加酶量为0.69%,pH为7.8,酶解时间2.0h,酶解产物的平均ACE抑制率为56.79%,与预测值57.20%的相对误差为0.41%,经过超滤分离获得分子量1k Da的酶解产物,ACE抑制活性最高,其IC50为66.58μg/ml。结论:确定霞水母酶解肽的制备工艺,其中分子量1kDa的部分为主要效应物质基础。     

发酵透明质酸寡糖兽疫链球菌工程菌株的构建

透明质酸(HA)广泛应用于医学、化妆品、食品等领域。HA的生物活性取决于其分子量(M_w)。透明质酸寡糖由于具有重要的生理活性与特殊生理功能,在医药领域具有重要的应用前景。兽疫链球菌因其发酵周期短、生产强度较强的特点,在商业生产HA上具有广泛的应用。为了高效发酵合成透明质酸寡糖和解决发酵过程的溶氧问题,文中通过在兽疫链球菌WSH-24中过表达透明质酸合酶HasA以及优化表达水蛭来源的透明质酸酶LHAase。重组菌株摇瓶发酵24h,透明质酸寡糖积累至0.97g/L,比野生菌提高了182.0%。在3L发酵罐中发酵24 h,透明质酸寡糖生产强度为294.2 mg/(L·h),HA积累至7.06 g/L,比野生菌的罐上水平提高了112.4%。文中所构建的发酵合成透明质酸寡糖的兽疫链球菌重组菌株具有重要的应用前景。     

工业废羊毛酸解工艺条件选择

毛发蛋白盐酸水解提取胱氨酸时 ,温度、毛酸比、时间等因素影响到毛发蛋白的水解率和产品胱氨酸的总收率。通过正交试验法 ,进行了废羊毛酸解工艺参数的试验研究 ,确定了最佳酸解工艺参数为 :温度 1 0 5℃ ,毛酸比(W/V) 1∶1 .7,连续水解时间 7.0h。     

纤维素酶提取红景天总黄酮的研究

以总黄酮为考察指标,确定纤维素酶提取红景天有效成分的最佳工艺.研究酶解条件对总黄酮浸出率的影响,并对不同提取方法的提取效果和粗提物的DPPH清除活性进行了比较.纤维素酶提取法的最佳工艺条件为:加酶量为1.95%(以原料干重计),液料比为70∶1(mL∶g),pH值为5.5,酶解温度为40℃,酶解时间为5 h,红景天总黄酮的浸出率为4.385%.酶解技术可明显提高红景天总黄酮的浸出率,粗提物得率高且DPPH清除活性较强.     

马齿苋提取物制备工艺、安全性及抗敏功效的研究

以透明质酸酶抑制率为考察指标,通过正交实验,确定了最佳醇提工艺:乙醇浓度为75%(体积分数),料液比1∶10,提取温度60℃,提取时间1 h,提取液过滤脱色浓缩冷冻干燥后,得到马齿苋醇提物。同浓度下的马齿苋醇提物的透明质酸酶抑制率远高于水提物,红细胞溶血实验说明马齿苋水提物和醇提物的刺激性低,安全性高。人体斑贴实验表明,马齿苋醇提物能减轻或抑制常见致敏源对皮肤的刺激作用,减弱皮肤炎症反应,增强皮肤的屏障功能。     

产脂肪酶嗜碱细菌的筛选及酶学性质研究

目的:筛选产脂肪酶嗜碱细菌,并研究其酶学性质.方法:以豆油为唯一碳源的固体平板筛选产酶菌株,16S rDNA同源性分析确定微生物菌属,单因素实验优化产酶条件、研究酶学性质.结果:筛选出1株产脂肪酶的嗜碱菌株,鉴定为假单胞菌(Pseudomonas),命名为Pseudomonas sp.C-36.菌株产酶的最佳培养条件为:甘油2%(V/V).蛋白胨0.7%(W/V),酵母提取物0.5%(W/V),K2HPO4 0.2%(W/V),MsS04·7H2O 0.05%(W/V),NaCl 0.3%(W/V),Triton X-100 0.01%(W/V),pH 9.5,转速180r/min,37℃下培养24h,产酶量为2.782 IU/ml.该酶的最适温度和pH分别为40℃和9.0,50℃时酶活半衰期为2h.Ca2+等金属离子对该酶酶活具有促进作用,而Zn2+对酶活的抑制作用明显.有机溶剂的耐受性实验表明,该酶在疏水性有机溶剂中稳定性良好.结论:筛选得到1株嗜碱的脂肪酶产生菌C-36,并鉴定为Pseudomonas.     

超声辅助水酶法提取月见草籽油的研究

月见草籽油在医药、保健及食品工业领域具有重要价值。本文对超声辅助水酶法提取月见草籽油进行了研究,采用超声及粉碎处理方式对月见草籽进行预处理,确定最佳预处理条件：超声功率300W、超声时间30min、超声温度60℃;采用Alcalase 2.4L碱性蛋白酶进行酶解,利用响应面优化试验,确定最优的月见草籽油脂提取工艺：料液比为5.4（w/w）、酶添加量为1.38（v/w）、酶解温度为62.5℃、酶解时间2.8h,响应面有最优值为84.32%;测定油脂的基本组成及相关品质指标,结果表明,不同提取方法对月见草籽油的皂化值、折射率、色泽的影响不显著,但酸值及磷脂含量均低于溶剂法月见草籽油。优化的工艺简便可行、提取率高,为超声辅助水酶法提取月见草籽油提取工艺的产业化提供理论依据。     

右旋糖酐发酵液酶解制备右旋糖酐40中氮的控制

右旋糖酐发酵液经过吸附除杂和陶瓷膜过滤后处理,在右旋糖酐酶的作用下降解制备右旋糖酐40,对氮进行过程控制,达到右旋糖酐40国家标准。首先以蛋白质作为检测目标,对右旋糖酐发酵液进行吸附条件研究,利用最佳吸附条件进行右旋糖酐发酵液的吸附除杂,氮的去除率达到57%以上,氮含量降至0.09%以下;然后通过陶瓷膜过滤将右旋糖酐与果糖等杂糖分离,并进一步去除氮,氮的去除率达到45%以上,氮含量降至0.040%以下;最后利用右旋糖酐酶对右旋糖酐发酵液处理液进行酶解,右旋糖酐酶解液经过乙醇分级沉淀分离制备右旋糖酐40,氮的去除率达到89%以上,氮含量降至0.003%以下,达到≤0.007%的国家标准。右旋糖酐发酵液酶解制备右旋糖酐40工艺过程氮的控制可以使氮去除率达到98%以上,产品氮含量达到国家标准(≤0.007%),分子量分布有所改善,重均分子量35 000以上,10%小分子＞7 000。