红细胞分化因子的研究进展

哺乳类红细胞在分化成熟过程中,细胞经过一个独特的自然去核过程,最终发育成为体内唯一无核但负有重要生理功能的成熟红细胞。哺乳类红细胞自然去核形式的出现可能是生物长期进化的结果,然而迄今为止有关红细胞的去核机理及其物质基础了解甚少。     

诱导小鼠红白血病细胞分化过程中钙调素水平变化

本文主要以病毒感染的小鼠红白血病细胞为模型,使用显微分光光度术,利用荧光染料ＦＩＴＣ以及ＰＩ,同时测量了在５ｍｍｏｌ／Ｌ ＨＭＢＡ诱导ＭＥＬＣ分化过程中不同周期时相单细胞内钙调素水平及ＤＮＡ含量,结果表明,在ＭＥＬＣ分化过程中细胞内钙调素水平在各周期时相均下降,这可能与ＭＥＬＣ分化和细胞增殖受到抑制。Ｇ１期延延长有关。     

破骨细胞分化因子与乳腺发育

破骨细胞分化因子 (RANKL)可以促进乳腺在妊娠中后期形成正常的小叶 腺泡结构 ,其作用机制为RANKL与其特异性受体RANK结合 ,通过IKKα促进乳腺上皮细胞CyclinD1蛋白的表达 ,从而促进乳腺上皮细胞的增生。RANKL在乳腺上皮细胞的表达受催乳素、孕激素等性激素和PTHrP的调节。而且RANKL在妊娠期骨质疏松和乳腺癌骨转移中也有重要作用 ,于是在骨代谢调节中起重要作用的RANKL就成为乳腺与骨之间的新的桥梁。     

新的红细胞分化相关基因EDRF1功能的初步研究

曾报道过通过功能筛选得到一个新的红细胞分化相关基因, 并命名为EDRF1(erythroid differentiation related factor 1, GenBank登录号为AF040247). 鉴于功能线索明确, 选择K562细胞作为模型细胞, 通过基因转染技术观察了EDRF1反义RNA表达和EDRF1过表达对细胞增殖和分化的影响, [³H]TdR掺入和半固体集落培养实验的结果显示EDRF1过表达时, 细胞增殖代谢能力有所下降. Northern印迹和RT-PCR的结果表明, 反义EDRF1表达载体转染后的K562细胞α-globin, γ-globin mRNA表达水平下降, STAT3, c-myc, GATA-1表达下调, 红细胞生成素受体(EpoR)在反义表达载体转染后表达有一定程度的上调. 说明EpoR和珠蛋白的表达调节没有内在的正协同关系, EDRF1对K562细胞增殖和分化的调节有可能是通过影响GATA-1等诸多红系特异的转录因子与顺式序列相互作用的转录活性实现的.     

红细胞分化因子诱导HL—60细胞排核过程中酪氨酸蛋白质磷酸化…

红细胞分化因子是从兔子网织红细胞中提出的一个蛋白因子,它可以使多种癌细胞株的生长受到抑制,以早幼粒白知病细胞（ＨＬ－６０）为研究其ＥＤＤＦ诱导过程中细胞内ＰＴＫ,ＰＴＰＰ及它们底物磷酸化水平的变化,实验发现：部分纯化的ＥＤＤＦ对ＨＬ－６０细胞生长有明显的抑制作用,经ＮＢＴ还原和Ｇｉｅｍｓａ染色,可见ＨＬ－６０细胞被诱导出现排核,同时,细胞的ＰＴＫ,ＰＴＰＰ酶活性明显的变化,ＰＴＰＰ和ＰＴＫ的底物蛋     

两个新的红细胞分化相关因子的cDNA克隆及功能探讨

曾报道在终末分化阶段的红细胞中可表达一些与珠蛋白基因增强子HS2序列特异结合的蛋白因子, 并利用杂交瘤技术制备了两株针对上述蛋白的单克隆抗体. 为获得编码这些因子的基因, 实验利用这两株单抗筛选构建于l gt11的人胚肝cDNA表达文库, 并获得阳性克隆. 经分析, 其中一株 cDNA克隆具有全长编码序列(EDRF1), 另一株为具有可读框的cDNA片段(EDRF2), 由它编码的氨基酸序列含有反式调节因子特有的亮氨酸拉链结构域. 与GenBank作同源比较后确定上述两株cDNA序列均未见报道. Northern印迹结果表明, 它们编码的蛋白质为红细胞分化相关蛋白. RT-PCR系统地观察了EDRF1, EDRF2在多种细胞株和组织中的表达, 提供了重要的功能线索. EDRF1和EDRF2主要在造血系统和早期的胚胎多种组织表达, 说明它与血细胞成熟和早期的组织发育相关, 也可能是传递早期造血与胚胎发育的分子语言.     

造血干细胞向红系发育的分子调控机制

造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)向红细胞(red blood cell,RBC)的分化是一个精确又复杂的过程,从谱系决定到终末分化以及去核、去细胞器的过程都受到了严格的调控.红细胞生成障碍会导致各种疾病,治疗这些疾病的关键是阐明红系发育中的调控机制.该综述主要总结了近年来在分子水平上...     

薄层细胞培养在细胞分化研究中的应用

在薄层培养中,不同的器官(如花芽、营养芽、根以及单细胞毛)可以从外植体上直接(不经过愈伤组织)分化出来。在烟草的薄层培养中,所有器官都起源于亚表皮细胞。器官的分化受控于植物激素、糖、多胺、寡聚糖等化学物质以及母体植株的生理状态。环境因素(如光)和生化因素(如核酸、酶)对器官分化影响的研究,都还处于探索性研究阶段。     

外来物种红耳龟的卵泡发育研究

2011年10月至2012年9月期间,于海南岛万泉河琼海段的沙洲岛开展外来物种红耳龟野外繁殖生态研究。通过笼捕等方法获得54个红耳龟样本,所有样本采用超声波技术检测其卵泡数量和大小。结果显示红耳龟的卵泡在9月开始生长发育,次年6月达到最大(16.6 mm±3.9 mm,n=39),随后逐渐减小,各月卵泡直径平均值大于9.0 mm(6.0³3.7 mm,n=426);卵泡数量于1月开始增加,3月份达到最多(45±4,n=4),随后逐渐减少。推测研究区域内的红耳龟年繁殖频次为2.48窝/年。     

红细胞分化因子诱导HL-60细胞排核过程中酪氨酸蛋白质磷酸化的改变

红细胞分化因子是从兔子网织红细胞中提出的一个蛋白因子,它可以使多种癌细胞株的生长受到抑制[1]．以早幼粒白血病细胞（HL-60）为材料,研究其被EDDF诱导过程中细胞内PTK,PTPP及它们底物磷酸化水平的变化．实验发现：部分纯化的EDDF对HL-60细胞生长有明显的抑制作用,经NBT还原和Giemsa染色,可见HL-60细胞被诱导出现排核．同时,细胞的PTK,PTPP酶活性有明显的变化,PTPP和PTK的底物蛋白在胞浆中酪氨酸蛋白磷酸化水平亦出现改变（但颗粒部分变化不明显）．     

微藻碳酸酐酶的特性及其环境调控

本文概述微藻碳酸酐酶的性质、种类、分布、分离纯化和环境调控的研究进展,并对未来有关微藻碳酸酐酶研究中需要探讨的问题作了展望。     

Inhibition of Bovine Carbonic Anhydrase by New Sulfonamide Compounds

Inhibitory effects of three new derivatives of 2-acetylamino-1,3,4-thiadiazole-5-sulfonamide on bovine carbonic anhydrase have been investigated. The new compounds are 2-(3-chloropropionylamino)-1,3,4-thiadiazole-5-sulfonamide, 2-(2,2-dichloroacetylamino)-1,3,4-thiadiazole-5-sulfonamide, and 2-(3-phenylpropionylamino)-1,3,4-thiadiazole-5-sulfonamide. The new compounds inhibit the esterase activity of carbonic anhydrase noncompetitively and have inhibition constants and I ₅₀ values very similar to those for 2-acetylamino-1,3,4-thiadiazole-5-sulfonamide, the latter being clinically used in the treatment of glaucoma.     

Carbonic Anhydrase in Subchloroplast Particles of Pea Plants

The partitioning of carbonic anhydrase (CA) activity in chloroplasts isolated from 10–14-day-old pea (Pisum sativum L.) seedlings was investigated. The effect of CA inhibitors on the kinetics of chlorophyll fluorescence in photosystem II (PSII) preparations was also studied. The activity of CA was detected in fractions of soluble proteins and in the polypeptide complexes of the PSI and PSII. Isolated particles of photosystems retained a high photochemical activity similar to that of intact chloroplasts and the high level of polyunsaturated fatty acids. The association of CA with the particles of PSII (PSII-CA) was also tested by Western-blot analysis using antibodies against PSII-CA (Cah3) from Chlamydomonas reinhardtii. The PSII particles isolated with Triton X-100 (T-20) showed a higher activity of the enzyme as calculated on a protein basis than the DT-20 particles isolated with digitonin and Triton X-100. This difference seems to be related to the higher degree of nativity of the chloroplast T-20 fragments as compared to DT-20 particles. The higher level of chlorophyll per reaction center as well as the higher content of chlorophyll b and lipid fatty acids as calculated on protein basis, in particular of E-16:113 acid, which stabilizes the oligomeric structure of the light-harvesting complex of the PSII, also confirms this suggestion. The activity of CA was not detected in the DT-20 preparations treated with Tris–HCl to eliminate manganese ions. This is likely to indicate that one of the extrinsic polypeptides of PSII exhibits CA activity. Specific inhibitors of CA (acetazolamide and imidazole) inhibited the photoinduced yield of chlorophyll fluorescence (F). This might be determined by damaging the water-oxidizing system or its interaction with the PSII reaction centers. The functional role of PSII-CA for ₂-concentrating in carboxylation sites as well as its role in the coupling of light and dark reactions in chloroplasts is discussed.     

杜氏盐藻两种碳酸酐酶基因启动子的克隆和功能研究

将克隆得到的杜氏盐藻DCA7和CA基因的启动子区与bar基因和NOS polyA终止子片段融合,分别构建成pMDDC-B和pMDC-B转基因杜氏盐藻表达载体。用基因枪法将两种表达载体转化人杜氏盐藻细胞,通过除草剂草丁膦筛选培养获得转化藻株,对转化藻株进行分析。对转化杜氏盐藻藻株的筛选培养结果表明：pMDDC-B和pMDC-B载体中的外源bar基因能在杜氏盐藻细胞中稳定或瞬时表达。同时在氦气压力为690kPa条件下,微弹轰击2次比微弹轰击1次或3次的效果更好。对pMDDC-B转化杜氏盐藻得到的稳定表达的转化藻株进行的PCR和Southern印迹分析的结果表明：外源的bar基因确已整合到杜氏盐藻基因组中。Northern印迹分析表明：DCA7基因启动子驱动bar基因在杜氏盐藻细胞中的表达效率受氯化钠浓度梯度调控。推测首次克隆得到的DCA7基因启动子可能是一种活性高、安全性好的高渗诱导性启动子;杜氏盐藻DCA7和CA基因启动子区的GT高度重复序列,可能与杜氏盐藻高度耐盐的分子机制有关。     

岩溶环境因子对细菌胞外碳酸酐酶表达及活性的影响

以从西南岩溶生态系统分离出的一株细菌（编号GLRT102Ca）为例,研究了温度、pH、金属离子和阴离子等主要岩溶环境因子对其胞外碳酸酐酶（CA）表达及活性的影响。结果照乐,任实验温度（10℃～50℃）和pH（5.5～9.0）范围内,实验菌株均能表达出不同程度的胞外CA活性,其中20℃～30℃以及中性偏碱性条件下的胞外酶活性较高。钙、镁、锌、钻等4种金属离子以及SO4^2-、H2PO4^-、NO3^-、NO2^-、Cl^-、Br^-、I^-和HCO3^-等8种阴离子往实验浓度范围内一般都能促进胞外酶活性的表达,但表达较高活性所需的离子浓度因不同离子而异。以上结果为进一步研究微生物碳酸酐酶的岩溶作用提供了一定的理论依据。     

不同理化因子对雨生红球藻CG-11碳酸酐酶活性的影响

以雨生红球藻CG-11为实验藻株,探讨在不同CO2、HCO3-、Zn2＋浓度以及pH和氮磷比例条件下,藻细胞的碳酸酐酶活性对这些理化因子的响应。结果表明,通入空气实验组的碳酸酐酶活性最高,为（75.20±1.53）U·mg-1（Chla）,通入5%CO2条件下的碳酸酐酶活性为（9.96±1.43）U·mg-1（Chla）;高浓度HCO3-对碳酸酐酶活性亦具有明显抑制作用,培养液中可溶性无机碳的浓度与碳酸酐酶活性呈负相关;在实验设置的pH范围内,pH9.0时碳酸酐酶活性最高,为（62.32±3.25）U·mg-1（Chla）;适当的氮磷比与Zn2＋浓度显著提高了雨生红球藻CG-11的生长速率,碳酸酐酶的活性亦有明显提高。     

土壤干旱对水稻叶片光合速率和碳酸酐酶活性的影响

以适应性广的水稻品种“汕优 6 3”为材料 ,具有较高的光合速率但适应性较差的品系“NAU30 3”为对照 ,比较了不同阶段的叶片光合机构对于干旱处理的适应性。结果表明“汕优 6 3”具有较广泛的适应性 ,在逆境条件下仍能维持较高的光合速率 ,这可能和叶片中碳酸酐酶活性对逆境的响应程度高有关。这种对干旱逆境的适应性反应只在叶片光合功能的可逆衰退阶段发生     

芸薹属中几个物种碳酸酐酶活性的比较

检测芸薹属中几种植物的碳酸酐酶在根、茎、叶中的分布和活性以及叶片净光合速率和锌元素含量的结果表明：碳酸酐酶在甘蓝型油菜的根、茎、叶中均有分布,叶中的碳酸酐酶活性最大,茎中的次之,根中的最小。不同芸薹属植物中碳酸酐酶活性的大小依序为：甘蓝型油菜〉白菜型油菜〉芜菁〉埃塞俄比亚芥。以甘蓝型油菜为例,碳酸酐酶活性的日变化呈双峰曲线,在整个生育期的变化趋势是先上升后下降,抽薹期间的碳酸酐酶活性最高。碳酸酐酶活性与净光合速率以及与锌元素含量之间均呈现显著的正相关。     

莱茵藻胞外碳酸酐酶分子定位与活性诱导

胞外碳酸酐酶是藻类CCM机制和光合作用的一个重要组分 ,藻类从高CO2 转入低CO2 浓度培养时可诱导出胞外碳酸酐酶。应用金标免疫分子定位和pH调节对胞外碳酸酐酶分子定位和CO2 诱导机制进行研究 ,结果表明 :胞外碳酸酐酶主要分布于胞壁空间 (细胞质膜与细胞壁之间 ) ,且细胞壁上也有较多分布 ,细胞壁外分布较少。说明胞外碳酸酐酶能从胞壁空间穿过细胞壁。通过CO2 诱导和pH调节(升高 ) ,均可提高碳酸酐酶活性 ,且pH提高幅度越大 ,胞外碳酸酐酶活性也越大 ,说明胞外碳酸酐酶的CO2 诱导与pH调节有一定关系     

碳酸酐酶在中肋骨条藻光合作用中的作用

探讨了在正常空气条件下生长的中肋骨条藻(Skeletonema costatum)的碳酸酐酶(CA)在其光合固碳中的作用.在中肋骨条藻的胞内和胞外均有CA活性,但胞外CA活性很低.CA抑制剂AZ(乙酰唑磺胺)对中肋骨条藻的光合放氧速率没有明显影响,而CA抑制剂EZ(乙氧苯唑胺)对其光合放氧速率有强烈的抑制作用.EZ的抑制作用使细胞最大光合速率、饱和光强和无机碳亲和力下降,无机碳的补偿点和光呼吸提高,使强光下光抑制作用增强.这些结果表明:中肋骨条藻的胞外CA在其光合作用中所起的作用较小,而其胞内CA通过催化胞内碳库中的HCO-3快速转化成CO2,提高胞内CO2的有效供给,从而提高细胞光合固碳能力和对逆境(高O2、强光和低CO2)的适应能力.