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利用单克隆抗体免疫磁珠吸附方法脐血CD34+细胞,并观察了IL-3/GM-CSF融合蛋白(PIXY-321)对脐血CD34+细胞的刺激作用。PIXY-321对脐血CD34+细胞扩增作用大于IL-3和GM-CSF单独及联合应用,在液体培养条件下,每毫升20ngPIXY-321可有效地扩增脐血造血祖细胞,适宜扩增时间为5-8天,扩增后造血细胞的数量可达扩增前的8-10倍,从而初步建立了一种简单可行的脐 相似文献
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随机扩增多态性对白色念珠菌分型的估价 总被引:8,自引:0,他引:8
利用随机扩增多态性(RAPD-PCR)的方法对48株白念珠菌Candida albicans Berkh进行了分析。由初步试验中,随机选用了18种引物?筛选出OPA-14引物,该引物扩增的带型清晰可辨,不同菌株之间扩增的带数6-12条不等,共有6条主带。扩增片段的长度粗略估计在300-2000bp左右。除个别菌株的带型相同以外,大多数菌株之间呈多态性分布,其带型数目和扩增的片段存在差异。对简单的D 相似文献
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昆虫杆状病毒衣壳主蛋白基因的PCR扩增,克隆和定位 总被引:1,自引:0,他引:1
用PCR技术成功地扩增了苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的衣壳主蛋白基因(vp39基因),并克隆了该基因,利用纯的vp39基因探针,在低严谨杂交条件下,已将粘虫核型多角体病毒(LsNPV)的vp39基固定位在PstI-F,BamHI-C,EcoRI-C,XhoI-D,I,EcoRV-H,X等片段上。PCR反应时,在扩增出预期的包括完整vp39基因的1406bp片段的同时也扩增出一条Ca.400bp的片段,本文讨论了PCR的特异性扩增和非特异性扩增。 相似文献
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牛β-酪蛋白5′端上游调控序列的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
该文用PCR扩增了牛β-酪蛋白基因5′-端上游调控序列,并对其进行了克隆和序列分析。采集成年母牛肝,提取DNA。在牛β-酪蛋白基因外显子1和上游调控区内设计引物,扩增其上游调控序列。两条引物长均为19个核苷酸,引物间跨度为635bp。以牛肝DNA为模板,进行PCR扩增,扩增产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,可见特异的目的条带。从凝胶中回收目的片段,克隆到pGEM-T载体中。重组质粒提取DNA,进行序列分析。测序结果与文献发表的类似序列相比,仅有4个碱基不同,同源性达99.4%。表明获得了牛β-酪蛋白基因5′-端上游调控序列的克隆。 相似文献
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FL对脐血造血细胞长期液体培养的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
用脐血进行干细胞移植有许多优点,但有一个主要的缺点是可获得的细胞数量有限,因此脐血干细胞的体外扩增对于其临床应用具有重要意义。考察了Flt-3配体(FL)和干细胞因子(SCF),白介素3(IL-3),IL-6,粒细胞集落刺激因子(G-CSF),粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的组合对脐血细胞扩增和分化的影响,培养42d,总细胞最多扩增了385.30±163.51倍(FL+SCF+G-CS 相似文献
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噬菌体抗体库技术 总被引:3,自引:0,他引:3
徐伟文 《国外医学:分子生物学分册》1998,20(5):218-222
噬菌体抗体库技术用PCR扩增出抗体的全套可变区基因,通过噬菌体表面表达技术,把Fab段或单链抗体表达在噬菌体表面,经过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集特异性抗体。 相似文献
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以蚕豆根尖为材料,采用改良方法制备染色体标本,在光镜下切割分离一段大M染色体核仁组织区(NOR)特定区段,通过单一引物--聚合酶链式反应法随机扩同切DNA后,获得近60μgDNA。经琼脂糖电泳分析测定扩增产物分子片段大小介于200-900bp。以地主新标记蚕豆总体DNA。作为探针与扩增产物进行Southern杂交,证实扩增得到的DNA与蚕豆DNA同源,来自微切染色体。部分扩增产物经EcoRI酶切后 相似文献
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用Southern杂交技术检查了32例胃癌组织和4株胃癌细胞系中原癌基因met、erbB2、EGFR、AKT-2、Ras和myc的扩增,发现met基因扩增6例,EGFR扩增1例、缺失2例,AKT-2扩增2例,没有发现Ras基因和myc基因的扩增.有癌基因异常的病例多为低分化、临床分期为Ⅲ、Ⅳ期的个体,提示癌基因扩增是肿瘤发展的晚期事件。 相似文献
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采用聚合酶链式反应(PCR)技术,对HPV-18序列中引物HP1、HP2之间的片段(F)进行扩增,通过两组阴、阳性对照实验证明扩增片段的特异性。用不同Mg^++浓度的缓冲系统进行PCR反应发现,缓冲系统中Mg^++浓度高低是影响HPV-18/HP1、HP2特异扩增的重要因素,高浓度Mg^++导致扩增特异性降低。对17例宫颈癌组织DNA进行PCR检测,有9例检出F出段,其检出率是53%,为HPV-1 相似文献
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生长因子受体类癌基因的扩增与胃癌癌变的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
用Southern杂交技术检查了32例胃癌组织和4株胃癌细胞系中原癌基因met、erbB2、EGFR、AKT-2、Ras和myc的扩增,发现met基因扩增6例,EGFR扩增1例、缺失2例、AKT-2扩增2例,没有发现Ras基因和myc基因的扩增。有癌基因异常的病例多为低分化、临床分期为Ⅲ、Ⅳ期的个体,提示癌基因扩增是肿瘤发展的晚期事件。 相似文献
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采用聚合酶链式反应(PCR)技术,对HPV-18序列中引物HP_1、HP_2之间的片段(F)进行扩增,通过两组阴、阳性对照实验证明扩增片段的特异性。用不同Mg浓度的缓冲系统进行PCR反应发现,缓冲系统中Mg浓度高低是影响HPV-18/HP_1、HP_2特异扩增的重要因素,高浓度Mg导致扩增特异性降低。对17例宫颈癌组织DNA进行PCR检测,有9例检出F片段,其检出率是53%,为HPV-18与宫颈癌的相关性提供证据。 相似文献
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本文通过利用RAPD(随机扩增多态DNA)方法,选用20种10bp的随机引物(OPC-01-OPC—20),用于虹鳟鱼基因组DNA多态性分析,其中发现一种引物(OPC-02)在虹鳟鱼群体中能扩增出多条带,说明该引物能反映其基因组DNA的多态性,可用于检测出不同品系间的差异。 相似文献
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将本室鸡传染性支气管炎病毒(IBV)江苏省地方分离肾型毒株JS/95/03接种鸡胚,分离、纯化病毒,提取单股RNA做为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的扩增模板。用Genbank公开序列多重比较后设计一对引物,使用单管RT-PCR方法,物异扩增IBV核蛋白(N)基因5'端854bp的片段,扩增产物纯化后测,序列分析表明,IBV N基因也存在较大变异,此毒株与呼吸型疫苗株M41序列同源性最高。 相似文献
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利用单克隆抗体免疫磁珠吸附方法分离脐血CD34+细胞,并观察了IL3/GMCSF融合蛋白(PIXY321)对脐血CD34+细胞的刺激作用。PIXY321对脐血CD34+细胞扩增作用大于IL3和GMCSF单独及联合应用。在液体培养条件下,每毫升20ngPIXY321可有效地扩增脐血造血祖细胞,适宜扩增时间为5-8天,扩增后造血祖细胞的数量可达扩增前的8-10倍,从而初步建立了一种简单可行的脐血造血细胞扩增方法。 相似文献
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BT型细胞质雄性不育水稻及其三系的线粒体DNA研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用RAPD技术对BT型水稻胞质雄性不育系秀A及其保持系秀B、恢复系湘晴以及杂种F1代的线粒体DNA进行了比较分析。结果表明不育系与其保持系间存在显著差异;不育系与其F1之间mtDNA也存在差异。在引物OPJ-08的扩增产物中,秀A扩增出一条分子量为800bp的多态性片段,在引物OPK-10的扩增产物中,杂种F1扩增出一条分子量为900bp的片段。把这两片段回收、克隆并制备探针,OPJ-08800的Southern杂交结果显示不育系与其F1杂交图谱存在多态性;OPK-10900的Suthern杂交结果显示不育系与其保持系同存在差异。推测这两片段与育性可能有一定的联系。 相似文献
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HLA—DRB1基因位点多态性的PCR—RFLP分析 总被引:8,自引:0,他引:8
设计并建立了一套适合国内应用的改良PCR-RFLR方法,分5组特异性扩增DNA样品,随后进行酶切定型分析,准确检测了编码DR抗原特异性HLA-DRB1基因位点的多态性,该法采用分组扩增,不发生与其它DRB位点等位基因的交叉扩增,不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品。 相似文献