反基因策略：基因治疗的新方向

合成的富含嘌呤或嘧啶的脱氧寡核苷酸可与双链ＤＮＡ内特定的同聚嘌呤、同聚嘧啶序列结合形成稳定的三螺旋结构（三链ＤＮＡ）。已在体外及体内证实了在靶基因内形成的局部三链ＤＮＡ可抑制其转录,这给肿瘤和病毒感染性疾病的治疗提示了新的方向,人们称之为反基因策略。然而,三链ＤＮＡ的稳定性不够理想和靶序列的选择范围较窄等问题的存在,在一定程度上限制了反基因策略的应用。     

三链DNA与反基因技术的研究进展

三链ＤＮＡ与反基因技术的研究进展方晔,白春礼（中国科学院化学研究所北京１０００８０）寡聚核苷酸及其衍生物能通过几个战略来实现选择性地调节基因表达［１］,在反义技术中,寡聚核苷酸以信使ＲＮＡ的专一性序列作为靶物,并由此阻止信使ＲＮＡ将信息翻译成蛋白质;...     

反基因策略及其靶序列的选择

反基因策略及其靶序列的选择刘定燮,王昌才,黄建生（第一军医大学分子生物学研究所,广州５１０５１５）关键词三链ＤＮＡ,反基因策略合成的脱氧寡核苷酸在一定条件下可缠绕于ＤＮＡ双螺旋的大沟内并以氢键与其相互作用形成三链ＤＮＡ结构。一般把这类能形成三链结构的...     

反基因技术中识别多聚嘌呤靶序列嘧啶断点的寡核苷酸

识别CG断点的寡核苷酸包括T^*CG配对的顺向嘧啶（TC）和T^*CG配对的反向嘌呤（G、GA、GT）寡核苷酸,其中以T^*CG配对的反向GT寡核苷酸亲和性最高。识别TA断点的寡核苷酸包括G^*TA配对的顺向嘧啶（TC、TG）和C^*TA配对的反向嘌呤（GA、GT）寡核苷酸,其中以C^*TA配对的反向GA寡核苷酸亲和性最高。识别CG和TA断点的同时存在的寡核苷酸包括T^*CG和G^*TA配对的反向GA和T^*CG和T^*TA配对的反向GT寡核苷酸,以T^*CCG和G^*TA配对反向GA寡核苷酸亲活性较高。     

三链形成寡聚核苷酸的反基因作用机制

1957年Ｆｅｌｓｅｎｆｅｌｄ等发现一条ＰｏｌｙＡ链能跟两条ＰｏｌｙＵ链形成三螺旋 ,这是三链形成寡聚核苷酸 (ｔｒｉｐｌｅ ｆｏｒｍｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ,ＴＦＯ)研究的开始[1] 。随着ＤＮＡ合成技术的进展 ,人们能合成各种序列的寡聚核苷酸。1 987年ＬｅＤｏａｎ等[2 ] 发现聚嘌呤或聚嘧啶寡聚核苷酸能序列特异地结合于同聚嘌呤 /同聚嘧啶ＤＮＡ双链的大沟内 ,识别的机制包括形成Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ和反Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ氢键。现在常用的包括含 (Ｇ、Ａ) ,含 (Ｇ、Ｔ)或含 (Ｃ、Ｔ)的 3种ＴＦＯ以及它们的类似物。…     

三链DNA的形成抑制DNA结合蛋白与启动子的结合

电泳迁移分析方法及DNaseⅠ足迹实验表明21nt脱氧寡核苷酸G3TG2T GT2G5TG2TGT(CP1)与乙肝病毒(HBV)核心启动子(Cp)片段之间三链DNA的形成有较高的特异性及稳定性.凝胶滞留实验显示, 在大鼠肝细胞核提取物体外转录系统中, CP1可特异地抑制DNA结合蛋白与Cp片段的结合, 而不能与Cp结合形成三链DNA的脱氧寡核苷酸CP3(TGTG2TG5T2GTG2TG3)对蛋白与Cp的结合并无抑制作用.这些结果表明, 三链DNA的形成有可能抑制HBV DNA的转录.     

抑制启动子的三链DNA的结构模建及稳定性研究

在IRIS Indigo2(SGI公司)工作站上,利用InsightⅡ/MSI软件包,以TAT三链DNA为模板,采用同源模建的方法,分别建立起两个含21nt的脱氧寡核苷酸CP1(G3TG2TGT2G5TG2TGT)和CP3(TGTG2TG5T2GTG2TG3)的三维结构.采用分子力学方法进行能量优化,将得到的能量最低结构作为分子的优势构象.研究结果显示,CP1的能量低于CP3的能量,即前者的结构较后者稳定.从而证明了CP1与乙肝病毒（HBV）的核心启动子（Cp）片段之间能稳定地形成三链DNA,并能特异性地抑制DNA结合蛋白与Cp片段的结合.这些结果表明,三链DNA的形成有可能抑制DNA的转录.     

基因药物的前沿技术

基因药物的直接体内基因治疗发展迅速,新型基因药物不断产生。本文讨论了效果比较肯定的基因疫苗、反义ＲＮＡ药物、三链ＤＮＡ药物这三种新型基因药物技术的基本方法。分析了它们各自存在的优点和问题,并介绍了它们的应用范围及应用研究进展。     

NIH专家小组批准更多的基因治疗计划

一九九○年十月,美国国立健康研究所(NIH)重组DNA咨询委员会(RAC)同意在NIH和安阿伯的密歇根大学进行人基因治疗试验,但不同意在纽约州的罗切斯特大学进行试验。 在基因疗法的检查工作中,RAC依据人     

养虾池好氧反硝化细菌新菌株的分离鉴定及特征

利用间歇曝气选择性富集并对所获菌株的好氧反硝化活性进行检测。筛选到一株亚硝酸盐去除活性较高的好氧反硝化细菌。在溶解氧（D0）为3.80-5．21mg／L的培养条件下。该菌株10h内将亚硝态氮由26．18mg／L降至0;在盐度为0—25之间20h内均可达到同样的去除效果。通过形态学特征、生理生化反应及部分长度16SrDNA序列分析对筛选菌株进行鉴定,初步判定它为嗜麦芽寡养单胞菌Stertotrophomonas maltophilia。亚硝酸盐还原酶基因分析结果表明。该菌株只含亚硝酸盐还原酶nitS基因,其序列与Alcaligenes faecalis A15（后来被重新鉴定为Pseudomonas stutzeri）的nirS基因序列相似。