2—型纤深酶原激活抑制剂研究进展

２－型纤溶酶原激活抑制剂（ＰＡＩ－２）是尿激酶型纤溶酶原激活剂的高效专一抑制剂。ＰＡＩ－２具有较高的稳定性,可以发生自我聚合。ＰＡＩ－２可与细胞内的细胞型纤溶酶原激活剂、纤连蛋白、谷氨酶胺转移酶等多种分子发生反应。ＰＡＩ－２与尿激酶型纤深酶原激活剂的反应遵循丝氨酸蛋白酶抑制剂的作用机制,其自我聚合的发生可能遵循环－片层机制。ＰＡＩ－２在肿瘤的侵润和扩散、皮肤组织受伤和治疗、炎症以及多种疾病的发生过     

纤溶酶原激活剂抑制物2型抑制细胞凋亡的研究进展

纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）是一种多功能蛋白质,除了能有效抑制尿激酶（ｕＰＡ）和双链组织型纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）而调节纤溶活性外,还参与了很多其它的生理病理过程,例如组织重建、胚胎发育、感染、免疫系统发育、肿瘤浸润和迁移等。更有研究表明胞内型ＰＡＩ－２在抑制细胞凋亡方面也发挥着重要作用。本文就近年来ＰＡＩ－２抑制细胞凋亡的研究进展作一综述。     

重组PAI－2对肿瘤细胞降解细胞外基质的影响

重组ＰＡＩ－２对肿瘤细胞降解细胞外基质的影响曹祥荣（南京师范大学生物系,２１００２４）关键词纤溶酶原激活剂抑制剂－２,基因重组,细胞外基质降解肿瘤细胞转移过程中最重要的因素是肿瘤细胞侵袭能力,其生化过程即为细胞外基质（ＥＯＭ）降解作用。纤溶酶系统（纤...     

几类天然产物对纤溶系统的作用

在初筛天然来源的小分子ＰＡＩ－１抑制剂过程中发现一些天然产物显示出活性苗头,进一步试验和选择性试验表明这些化合物都不同程度别对纤溶系统中存在的不同的酶具有抑制作用。化合物１（ｅｘｐｏｘｙｒｏｌｉｎ Ｂ）对纤溶酶有一定的抑制,化合物２（ｍｕｒｉｃａｔｉｎｃ）对ＰＡＩ－１具有一定的抑制作用且有较好的选择性。化合物４（ｃｈｅｒｉｍｏｌｉｎ－２）对纤溶酶较强的抑制。化合物５（ｍｏｒｉｎｄｏｎｅ）对凝血酶、     

精制溶栓酶对家兔血浆t－PA和PAI的影响

精制溶栓酶对家兔血浆ｔ－ＰＡ和ＰＡＩ的影响雷丹青广西医科大学蛇毒研究所南宁５３００２１纤溶系统是机体阻止血栓形成的屏障,ｔ－ＰＡ（纤溶酶原激活剂）是纤溶系统的关键物质,ｔ－ＰＡ对纤维蛋白原有极高的亲和力,它能选择性的激活血凝块中的纤溶酶原生成纤溶酶,...     

人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在Pichia pastoris中的表达

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）基因,与ｐＰＵＣ１８重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人ＰＡＩ－２基因．ＰＡＩ－２基因与表达载体ｐＰＩＣ９重组,构建受乙醇氧化酶１基因（ＡＯＸ１）启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化ＧＳ１１５宿主菌,经表型筛选和ＰＣＲ扩增筛选阳性克隆,用甲醇诱导表达,重组ＰＡＩ－２以分泌型表达,占分泌总蛋白的３０％,具ＰＡＩ－２抗原性,与低分子量尿激酶形成了抗ＳＤＳ复合物,具抑制纤溶的活性（９１．４ＡＩＵ／ｍｌ）．对培养条件也进行了探讨．     

糖基化、非糖基化、重组PAI－1功能和性质的比较

对从ＨｅｐＧ２细胞培养液中分离得到植基化和非糖基化ＰＡＩ－１（１型纤溶酶原激活物抑制剂）,以及从ｐＹＺＨＢＩ－６６表达菌中纯化的非糖基化重组ＰＡＩ－１的某些性质和功能进行比较,结果显示,糖基化ＰＡＩ－１对ｔＰＡ（组织型纤溶酶原激活物）有较强的抑制,能较显著地被蛋白质变性剂所激活,对热有较强的稳定性,糖基化与非糖基化ＰＡＩ－１在ｐＨ２．５－９．０的范围内都相当稳定。纤维蛋白原和肝素能明显提高两者对ｔＰＡ的抑制作用。     

t-PA K1区的同源模建及Kringle区与Lysine相互作用的研究

利用同源模建方法预测了ｔ－ＰＡＫ１区的三维结构。通过结构叠合确定了ｔ－ＰＡＫ１、Ｋ２区,纤溶酶原Ｋ１、Ｋ４区及ＵＫ Ｋ区的Ｌｙｓｉｎｅ结合口袋。静电势计算及疏水性分析表明,在ｔ－ＰＡ Ｋ２Ｃ Ａ２区以及纤溶酶原Ｋ１、Ｋ４区与纤维蛋白裸露的Ｌｙｓｉｎｅ之间在明显的的静电势互补和疏水面契合。确定了Ｋｒｉｎｇｌｅ区结合口袋与Ｌｙｓｉｎｅ亲和重要所基酸,分析了ｔ－ＰＡＫ１区,ＵＫ Ｋ区不能结合Ｌｙｓｉｎｅ     

夏威环毛蚓纤溶酶的分离纯化及部分性质研究

以夏威环毛蚓（Ｐｈｅｒｅｔｉｍａ ｈａｗａｙａｎａ）为材料,采用磷酸盐缓冲液抽提、（ＮＨ４）２ＳＯ４分段盐析,离子交换树脂 Ｄ２９０、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００和 ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０三种连续柱层析方法得到一种在 ＰＡＧＥ上显示单一区带的纤溶酶组份。采用凝胶柱层析和 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测其分子量为 １２ ０００和 １２３００,由一条肽链组成。该酶具有强烈的纤溶活力和水解ＢＡＥＥ的活力,能直接作用纤维蛋白和间接激活纤溶酶原。其最适反应温度为４５℃,最适反应ｐＨ为８．０。该酶水解ＢＡＥＥ的活力可被Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｈｇ２＋、金属离子和ＥＤＴＡ、巯基乙醇抑制,Ｃａ＋则有激活作用。该酶中性糖含量为５％,氨基酸组成中Ａｒｇ、Ｌｅｎ含量较多．     

组织纤溶酶活剂突变体在转基因小鼠乳腺中的表达

组织纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ）是一种较理想的溶血栓药物,本研究采用其突变体－长效组织纤溶酶原激活剂（ＬＡｔＰＡ）的ｃＤＮＡ作为目的基因,将它插入羊β－乳球蛋白（ＢＬＧ）基因起始密码之前,使ＬＡｔＰＡ的转录、翻译受控于ＢＬＧ基因的５＇、３＇序列,再将所构建的ＢＬＧ－ＬＡｔＰＡ用显微注射方法建立转基因鼠,经点杂交筛选和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹鉴定,获得２只ＬＡｔＰＡ基因整合阳性鼠,并在阳性母鼠乳汁中检测到有     

人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在大肠杆菌中的表达和分离纯化

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）ｃＤＮＡ,与ｐＵＣ１８重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人ＰＡＩ－２ｃＤＮＡ．ＰＡＩ－２ｃＤＮＡ与原核表达载体重组,构建原核表达质粒并转化大肠杆菌．经温度诱导表达,重组ＰＡＩ－２占全菌总蛋白的１４％,以可溶性形式存在,具纤溶抑制活性．工程菌发酵、压榨后,用硫酸铵分级沉淀,沉淀物经分子筛、离子交换和疏水性色谱的分离,每升菌液可获得约３０ｍｇ纯度达９０％的蛋白质,比活性为１１８６６ＡＩＵ／ｍｇ蛋白质,得率为１９．２％．     

大鼠胸部照射后支气管肺泡灌洗液成分和肺组织纤溶活力的变化

大鼠胸部照射γ射线２０Ｇｙ,照射后观察支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中蛋白质含量、细胞总数和分类及巨噬细胞存活率,肺指数及肺组织纤溶活力,并做了大体解剖和组织学检查。结果为：照射后２周开始ＢＡＬＦ中蛋白质含量、细胞总数和中性粒细胞即明显增多,照射后１——２个月持续处于高水平,高峰在１．５─２个月,照射后３─４个月有所下降,肺指数有相应变化;肺组织纤溶活力则相反,从照射后２周开始持续下降,至照射后２个月已降至最低,接近于零。形态学观察也见到有早期肺水肿和晚期肺萎缩等变化。由上结果可见,大鼠胸部照射后的早期主要为渗出性病变和纤溶活力的降低。文中讨论了照射后血管内皮细胞的损伤在放射性肺损伤发病中的作用。     

PAI—2及其突变体的生物化学性质

为研究和比较纤深酶原激活剂抑制物２型（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｙｐｅ ２,ＰＡＩ－２）及其突变体的生物化学性质,用ＰＣＲ、体外定点突变技术构建ＰＡＩ－２突变体ＰＡＩ－２ＣＤ和ＰＡＩ－２ＱｃＤＮＡ,将突变体ｃＤＮＡ与原核表达载体重组并转化怕杆菌。经诱导表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实表达出相应蛋白质,均占全菌总蛋白的１４％。Ｗｅｔｅｒｎ印迹、溶圈抑制及纤维蛋白翻转板     

大鼠胸部照射后支气管肺泡灌洗液成分和肺组织纤溶活力…

大鼠脑部照射γ射线２０ＧＹ，照射后观察支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中蛋白质含量、细胞总数和分类及巨噬细胞存活率，肺指数及肺组织纤溶活力，并做了大体解剖和组织学检查。结果为：照射后２周后开始ＢＡＬＦ中蛋白质含量、细胞总和中性粒细胞即明显增多，照射后１－２个月持续处于高水平，高峰在１．５－２个月，照射后３－４个月有所下降，肺指数有相应变化；肺组织纤溶活力则相反，从照射后２周开始持续下降，至照射后２个月     

uPA与其抑制剂复合物的受体介导内吞及其应用

尿激酶型纤溶酶原激活物 (ｕＰＡ)是参与细胞外基质降解的重要成分 ,在肿瘤细胞的侵袭和转移中起着重要作用。人们对ｕＰＡ的结构、功能以及它与纤溶酶原激活抑制物 1 (ＰＡＩ 1 )、ｕＰＡ受体 (ｕＰＡＲ)的相互作用都进行了深入的研究。单链ｕＰＡ是一种糖蛋白 ,含有 41 1个氨基酸。其结构可分为四部分 ,依次为 :上皮生长因子区、环状结构区、连接区和丝氨酸蛋白酶区。纤溶酶可裂解Ｌｙｓ1 5 8 Ｉｌｅ1 5 9之间的肽键 ,使单链ｕＰＡ转变为双链ｕＰＡ。ｕＰＡ与其细胞表面受体结合后激活纤溶酶原 ,自身激活也增强。结合在细胞膜上的ｕＰＡ…     

重组纤溶酶原激活剂抑制剂－2基因在HT1080亚克隆中的表达

重组纤溶酶原激活剂抑制剂－２基因在ＨＴ１０８０亚克隆中的表达曹祥荣（南京师范大学生物学系,２１００２４）关键词纤溶酶原激活剂,基因重组,纤溶酶原激活剂抑制剂活性表达目前认为纤溶酶系统是肿瘤细胞浸润和转移蛋白水解过程中重要的酶,纤溶酶能直接水解细胞外间...     

纤溶酶原激活物抑制因子—1蛋白分子的结构与功能

纤溶酶原激活物抑制因子－１（ＰＡＩ－１）是组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）和尿型纤溶酶原激活物（ｕ－ＰＡ）的特异性抑制剂。对ＰＡＩ－１分子的结构与功能的认识,有助于了解ＰＡＩ－１作用的机理。本综述了近年来对ＰＡＩ－１蛋白分子结构与功能研究的进展,介绍了ＰＡＩ－１分子中一些区域的作用以及影响ＰＡＩ－１抑制活性的一些因子。     

杭州虻纤溶酶的纯化及其生物活性分析

经过７５％硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤层析、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析、Ｂ ｅｎｚａｍｉｄｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,从杭州虻（Ｔａｂａｎｕｓ ｈｏｎｇｃｈｏｗｅｎｓｉｓ）腹部匀浆液中分离纯化出分子量约为３６．５ｋＤ的纤溶酶ＴＨＦＥ。经纤维蛋白平板测定表明,ＴＨＦＥ既具有纤溶酶作用,又具有激活纤溶酶原的作用。ＴＨＦＥ能分解纤溶酶原激活剂的生色底既具有纤     

华广虻(Tabanusamaenus Walker)溶纤活性蛋白的纯化及生物活性分析

经过 ７５％ 饱和度硫酸铵沉淀、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ ７５ 凝胶过滤层析、 Ｌｙｓ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ 亲和层析和电泳制备洗脱,从华广虻（ Ｔａｂａｎｕｓ ａｍ ａｅｎｕｓ Ｗ ａｌｋｅｒ）腹部组织匀浆液中分离纯化出分子量约为 ６７ｋ Ｄ 的溶纤活性蛋白 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ经纤维蛋白平板测定表明, Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 只具有纤溶酶作用,不具有激活纤溶酶原的作用;但 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 能分解纤溶酶原激活剂的生色底物—— Ｃｈｒｏｍ ｏｚｙｍ Ｕ Ｋ 及 Ｓ ２２８８还能水解胰蛋白酶专一底物 Ｂｚ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｎ Ａ 及 Ｃ Ｂ Ｚ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｎ Ａ,表明 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ具有类胰蛋白酶活性,专一水解精氨酸形成的酰胺键（或肽键） Ｔ Ａ Ｆ Ｐ无胰凝乳蛋白酶活性      

蚯蚓纤溶酶的纯化及稳定性研究

蚯蚓纤溶酶（ＥＰＡ）抽提液经３０％ ～７０％ 饱和度的（ＮＨ４）２ＳＯ４ 盐析、ＤＥＡＥ—纤维素柱层析、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５葡聚糖凝胶过滤等纯化步骤,得到了具有纤溶活性的洗脱峰,置凝胶电泳后,得到四个活性组分,它们经５０℃保温６ｈ,活力上升６４％ ;在２ ｍ ｏｌ／Ｌ盐酸胍存在时,活力仅保存７．２％ ,当其浓度降低时,活力可恢复至９０％ ;在１％ ＳＤＳ存在时,活力仅保存１２．１％ ,但当ＳＤＳ除去时,活力又可恢复。因此,盐酸胍、ＳＤＳ均为ＥＰＡ 可逆性抑制剂。另外,ＥＰＡ 中含有较高的糖链（占总量的４５％ ）,具有良好的抵抗自水解作用。