大鼠肝纤维化过程中组织金属蛋白酶抑制因子I基因的原位表达

为了解组织金属蛋白酶抑制因子１（ＴＩＭＰ－１）基因在实验性肝纤维化形成中的作用,我们应用地高辛原位杂交技术对大鼠肝组织在四氯化碳（ＣＣｌ４）诱发肝纤维化形成过程中ＴＩＭＰ－１ｍＲ－ＮＡ的表达进行了研究。结果表明,ＣＣｌ４肝损伤早期（４周）肝组织中间质细胞（血管及窦内皮细胞及贮脂细胞）中显示ＴＩＭＰ－１的过度表达;ＣＣｌ４肝纤维化早期（８周）及肝纤维化晚期（１２周）,肝组织中间质细胞的ＴＩＭＰ－１表达持续维持在高水平。结果提示,肝间质细胞（内皮细胞及贮脂细胞）是肝内ＴＩＭＰ－１的主要来源细胞;ＴＩＭＰ－１的异常表达是大鼠肝纤维化过程中较早出现的分子变化,与肝纤维化发生有关;纤维化晚期持续高表达的ＴＩＭＰ－１通过抑制胶原酶而在肝纤维化持续进展中起重要作用。     

纤溶酶原激活物抑制因子—1蛋白分子的结构与功能

纤溶酶原激活物抑制因子－１（ＰＡＩ－１）是组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）和尿型纤溶酶原激活物（ｕ－ＰＡ）的特异性抑制剂。对ＰＡＩ－１分子的结构与功能的认识,有助于了解ＰＡＩ－１作用的机理。本综述了近年来对ＰＡＩ－１蛋白分子结构与功能研究的进展,介绍了ＰＡＩ－１分子中一些区域的作用以及影响ＰＡＩ－１抑制活性的一些因子。     

人I型胶原基因第一内含子调节转录的研究

人Ｉ型胶原α１（Ｉ）链（ＣＯＬＩＡ１）基因内含子序列在不同细胞内有不同的转录调节活性,报道了含人ＣＯＬＩＡ１基因内含子Ｉ不同区段（＋５４４～＋８５５和＋８２０～＋１０９３）的重组质粒ｐＳＣＥＰ－ＣＡＴ和ｐＳＣＩＰ－ＣＡＴ的构建并转染人胚肌腱成纤维细胞和Ｔｃａ８１１３舌癌细胞,地高辛标记抗ＣＡＴ－ＥＬＩＳＡ检测结果显示：ｐＳＣＥＰ－ＣＡＴ在两种细胞均获表达;ｐＳＣＩＰ－ＣＡＴ在人成纤维细胞未表达,但     

tPA, uPA, PAI-1和 PAI-2在人和恒河猴胎盘中的原位杂交和荧光免疫定位(英文)

用原位杂交和荧光免疫定位方法研究了组织型（ｔ）和尿激酶型（ｕ）纤溶酶原激活因子ｔＰＡ、ｕＰＡ和相应的抑制因子ＰＡＩ－１、ＰＡＩ－２在人和恒河猴胎盘中的定位和分布。结果表明：（１）激活因子ｔＰＡ、ｕＰＡ（Ｆｉｇ．１＆４）和抑制因子ＰＡＩ－１（Ｆｉｇ．２）、ＰＡＩ－２（Ｆｉｇ．３）一般都在不同程度上定位于两者胎盘的相同部位;（２）它们主要分布在绒毛干和蜕膜的血管壁、 ＲＯｈｒ’ｓ和Ｎｉｔａｂｕｃｈ’ｓ纹间的基盘外绒毛滋养层细胞、滋养壳、蜕膜细胞和腺体细胞。并且发现;ｔＰＡ和它的抑制因子ＰＡＩ－１更明显地定位于邻近母体组织离层界面的区域,而ｕＰＡ和抑制因子ＰＡＩ－１更集中在绒毛滋养层和外绒毛滋养细胞中;（３）激活因子和抑制因子的ｍＲＮＡ和蛋白的定位和分布基本上一致,但是、在绒毛核体滋养层细胞上未发现其ｍＲＮＡ表达,却有很强的免疫荧光的分布;（４）激活因子和抑制因子合成和分布部位与其作用底物,即纤蛋白类分子的产生部位一致;（５）未发现上述分子在人和恒河猴胎盘分布上的不同。上述实验结果说明,在妊娠的各个阶段 ＰＡ和它的抑制因子协同表达,局限在作用范围很小的特定产生底物的区域。它们的相互作用可能是维持正常妊娠所必需。在妊     

人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在Pichia pastoris中的表达

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）基因,与ｐＰＵＣ１８重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人ＰＡＩ－２基因．ＰＡＩ－２基因与表达载体ｐＰＩＣ９重组,构建受乙醇氧化酶１基因（ＡＯＸ１）启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化ＧＳ１１５宿主菌,经表型筛选和ＰＣＲ扩增筛选阳性克隆,用甲醇诱导表达,重组ＰＡＩ－２以分泌型表达,占分泌总蛋白的３０％,具ＰＡＩ－２抗原性,与低分子量尿激酶形成了抗ＳＤＳ复合物,具抑制纤溶的活性（９１．４ＡＩＵ／ｍｌ）．对培养条件也进行了探讨．     

ＳＰ—Ａ及其磷脂代谢的发育性调节研究进展

ＳＰ－Ａ的发育性调节及其对磷脂代谢的影响相当复杂,不同胎龄的肺Ⅱ型细胞ＳＰ－ＡmRNA有为蛋白质表达水平不同,主要受顺式作用元件和甲状腺转录因子１（ＴＴＦ－１）、蛙皮素样肽（ＢＬＰ）的调节,且人ＳＰ－Ａ与其他动物在基因结构和调节序列方面存在明显差异。随着ＳＰ－Ａ受体成熟ＳＰ－Ａ发挥多种不同的效应,ＳＰ－Ａ受体发育水平不同与ＳＰ－Ａ对肺０２８２型细胞磷脂代谢调节明显相关。     

促乳素抑制培养的大鼠颗粒细胞中卵泡素介导的组织纤溶酶原激活因子的表达

本文主要是观察促乳素（ＰＲＬ）是否曩体外培养的大鼠颗粒细胞中,组织纤溶酶原激活因子（ｔＰＡ）和Ｉ型纤溶酶原激活因子抑制因子（ＰＡＩ－Ｉ）基因表达间的协调作用。我们采用了多种方法,例如ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹等,来检测ＰＲＬ对ｔＰＡ和ＰＡＩ－Ｉ基因表达的作用。结果证实：（１）在离体条件下促乳素（ＰＲＬ）能刺激颗粒细胞（ＧＣ）中ＰＡＩ－Ｉ ｍＲＮＡ的合成,而ＦＳＨ无此作用。但ＦＳＨ可与ＰＲＬ协同增加     

重组PAI－1对u－PA抑制活性的研究

利用大肠杆菌表达的重组纤溶酶原激活物抑制因子－１（ｒＰＡＩ－１）具有许多与天然ＰＡＩ－１相同的性质,ｒＰＡＩ－１对ｕ－ＰＡ抑制活性研究的内容包括：几种化学物质（盐酸胍、尿素、硫氰酸钾、ＳＤＳ、氯化钠等）对ｒＰＡＩ－１的激活作用、盐酸胍激活ｒＰＡＩ－１的浓度与温度效应、显色底物法和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纤维蛋白自显影对ｒＰＡＩ－１活性的测定、活性态ｒＰＡＩ－１向潜状态的转变及其与盐浓度和ｐＨ值的关系。     

糖基化、非糖基化、重组PAI－1功能和性质的比较

对从ＨｅｐＧ２细胞培养液中分离得到植基化和非糖基化ＰＡＩ－１（１型纤溶酶原激活物抑制剂）,以及从ｐＹＺＨＢＩ－６６表达菌中纯化的非糖基化重组ＰＡＩ－１的某些性质和功能进行比较,结果显示,糖基化ＰＡＩ－１对ｔＰＡ（组织型纤溶酶原激活物）有较强的抑制,能较显著地被蛋白质变性剂所激活,对热有较强的稳定性,糖基化与非糖基化ＰＡＩ－１在ｐＨ２．５－９．０的范围内都相当稳定。纤维蛋白原和肝素能明显提高两者对ｔＰＡ的抑制作用。     

重组PAI—1对u—PA抑制活性的研究

利用大肠杆菌表达的重组纤溶酶原激活物抑制因子－１（ｒＰＡＩ－１）具有许多与天然ＰＡＩ－１相同的性质,ｒＰＡＩ－１对ｕ－ＰＡ抑制活性研究的内容包括：几种化学物质（盐酸胍,尿素,硫氰酸钾,ＳＤＳ,氯化钠等）对ｒＰＡＩ－１的激活作用,盐酸胍激活ｒＰＡＩ－１的浓度与温度效应,显色底物法和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纤维蛋白自显影对ｒＰＡＩ－１活性的测定,活性态ｒＰＡＩ－１向潜状态的转变及其与盐浓度和ｐＨ值的关系。     

重组PAI－1在大肠杆菌中的高效表达

纤溶酶原激活物抑制因子－１（ＰＡＩ－１）在天然状态下含量很低。为了进行ＰＡＩ－１的结构与功能的研究,构建了表达重组ＰＡＩ－１的质粒ｐＢＶ２２０／ＰＡＩ－１,并在大肠杆菌中得到了高效表达。最高表达量为菌体总蛋白量的４９％以上,经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｉｎｇ检测,得到了分子量为４３．０ｋＤａ的反应条带。对形成包涵体的表达产物进行变、复性处理及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５的初步纯化,得到了潜伏态的重组Ｐ     

氧化应激与cfos和cjun转录和AP－1激活

激活剂蛋白－１（ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ－１,ＡＰ－１）是近年来受到关注的与氧化应激基因表达调控有关的转录因子,文章就氧化应激与ｃｆｏｓ和ｃｊｕｎ基因表达,ＡＰ－１的激活,ＡＰ－１对氧化应激反应的调控,ＡＰ－１与亲电子反应元件等有关内容作了简要的综述。     

小干扰RNA沉默瘦素揭示了瘦素在大鼠肝纤维化中的作用

目的观察靶向瘦素(leptin)小干扰RNA(interference,siRNA)真核细胞表达质粒对大鼠肝纤维化的影响。方法采用已构建的重组Leptin-siRNA真核细胞表达质粒,用脂质体包埋法通过腹腔注射将其导入大鼠肝纤维化模型体内。通过HE染色观察肝脏病理形态学变化;Western Blot检测leptin、I型胶原和STAT3蛋白表达变化;半定量RT-PCR检测leptin mRNA表达。结果与正常对照组相比,肝纤维化组(CCl4)和质粒空载体组(CCl4(+)K)肝纤维化程度较重,纤维化评分多为Ⅳ级(P0.01),同时肝脏leptin、I型胶原和STAT3含量明显上升(P0.05);而与肝纤维化组(CCl4)和质粒空载体组(CCl4(+)K)比,leptin-siRNA质粒转染组(The CCl4(+)L)肝纤维化程度减轻,纤维化程度多为Ⅰ-Ⅱ级,肝脏leptin、I型胶原和STAT3表达均显著抑制(P0.05)。正常对照组和leptin-siRNA质粒组(The CCl4(+)L)在组织学及leptin、I型胶原和STAT3基因转录和表达水平无统计学差异(P0.05)。结论 leptin-siRNA表达质粒降低I型胶原和STAT3含量、抑制leptin表达,阻抑肝纤维化;Leptin有望成为肝纤维化基因治疗的新靶位点。     

亲和层析纯化HepG_2细胞分泌的PAI－1

本文报道用抗ＰＡＩ－１单克隆抗体（ＭｃＡｂ）亲和层析建立了纯化ＰＡＩ－１的简便方法。经免疫亲和层析,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００凝胶过滤,从ＨｅｐＧ２细胞培液中分离到糖基化和非糖基化两种形式的ＰＡＩ－１,回收率为８４％,ＰＡＩ－１比活性６．１×１０４ＩＵ／ｍｇ。糖基化ＰＡＩ－１分子量为５０ｋＤ,比活性５．８×１０４ＩＵ／ｍｇ。非糖基化ＰＡＩ－１分子量４３ｋＤ,占总ＰＡＩ－１３０％,仍具有ＰＡＩ－１活性。用ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析进一步纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯的糖基化ＰＡＩ－１。     

缺氧诱导因子1研究进展

缺氧诱导因子１（ＨＩＦ－１）在缺氧诱导的哺乳动物细胞中广泛表达,为缺氧应答的全局性调控因子。ＨＩＦ－１由ＨＩＦ－１α和ＨＩＦ－１β两亚基组成,为异源二聚体转录因子。ＨＩＦ－１α的ｂＨＬＨ和ＰＡＳ结构域与二聚化及ＤＮＡ结合活性有关,ＴＡＤ结构域则主要参与转录激 活。ＨＩＦ－１α的全长基因已克隆并在人和小鼠中定位。通过作用于靶基因的缺氧反应元件（ＨＲＥ０,ＨＩＦ－１参与缺氧诱导的一系列基因的表达调控。     

猪血清攻击后肝纤维化大鼠α-SMA、TIMP-1在肝组织内持续表达

目的猪血清法肝纤维化模型中,致纤维化因子停止作用于肝脏后α-SMA、TIMP-1阳性HSCs表型与组织中I型胶原表达的相关性。方法猪血清10周法制作大鼠肝纤维化模型,于造模6周、10周、14周和20周,免疫组织化学观察α-SMA、I型胶原,肝组织原位杂交法检测TIMP-1阳性表型HSCs在肝组织中的分布,计算机图像分析系统测定阳性比率,SPSS11.0分析各参数在肝纤维化进程中相关性。结果α-SMA于造模第6周、10周即有表达,主要分布于汇管区血管或中央静脉内膜下。于造模第14周、20周时持续表达。TIMP-1于造成模第6周时,表达也限于汇管区血管和中央静脉内膜下。造模第10周、14周时阳性表达率明显增加,向肝组织内伸展,并持续维持高阳性表达至造模第20周。α-SMA和TIMP-1在造模过程中随肝纤维化的进程呈显著正相关（r=0.989,P=0.000）,二者分别与Ⅰ型胶原呈显著正相关（r=0.893,P=0.000;r=0.923,P=0.000）。结论猪血清攻击法肝纤维化大鼠模型中,致纤维化因子启动肝纤维化进程,但不随致纤维化因子的终止而终止。所以,抗肝纤维化治疗成为治疗本病的关键。     

人类T细胞白血病病毒I型pX基因反式调节和致白血病机理的研究进展

人类Ｔ细胞白血病病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）是成人Ｔ细胞白血病（ＡＴＬ）的病因。ＨＴＬＶ－Ｉ基因组中的ｐＸ基因区域编码ｐ４０＾ｔａｘ和ｐ２７＾ｒｅｘ蛋白,前者可反式激活病毒的ＬＴＲ和ＩＬ－２Ｒ及ｃ－ｆｏｓ、ＴＧＦβ１等细胞基因,加强转录过程,在白血病发生中发挥重要作用。ｐ２７＾ｒｅｘ蛋白则在转录后水平进行反馈性调节。白血病的发生机理是多因子参加的多步骤过程。     

蝮蛇抗栓酶对不稳定性心绞痛患者血中部分凝血及纤溶指标的影响

测定３８例不稳定性心绞痛（ＵＡＰ）患者血中纤维蛋白原（Ｆｇ）含量、组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）活性、血管性假血友病因子（ｖＷＦ）活性和血小板聚集率水平（ＰＡｇＴ）并与２１名正常人对比。患者中１８例用蝮蛇抗栓酶治疗,２０例行常规治疗。结果显示：ＵＡＰ患者血中ＰＡＩ－１、ｖＷＦ以及ＰＡｇＴ水平明显增高,ｔ－ＰＡ水平明显降低;蝮蛇抗栓酶组治疗后血中Ｆｇ、ＰＡＩ－１、ＰＡｇＴ水平均明显下降,使ｔ－ＰＡ水平明显升高;常规治疗组治疗前后各项指标无明显变化。认为蝮蛇抗栓酶对ＵＡＰ有可靠疗效     

人肝纤维化中肌纤维母细胞的组织原位研究

本文以α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）作为肌纤维母细胞（ＭＦｂ）的标志,对７３例人肝组织作免疫组化研究,观察α－ＳＭＡ阳性细胞与Ⅰ、Ⅲ型胶原以及炎症细胞的关系。发现在各种慢性肝病的肝组织中α－ＳＭＡ、Ⅰ、Ⅲ型胶原阳性率均明显高于对照组;尤其在慢性活动性病变时,α－ＳＭＡ阳性细胞数与Ⅲ型胶原量均多,而在慢性非活动性病例中Ⅰ型胶原量较多;且各组显示α－ＳＭＡ阳性细胞量的曲线与Ⅲ型胶原基本一致。α－ＳＭＡ阳性细胞的增生及分布与炎症细胞的浸润也密切相关。因此,可籍ＭＦｂ（α－ＳＭＡ阳性）的定位检测来判断人肝纤维化的进展情况。     

人肝癌细胞的IGF—BP1分子特性及内源性蛋白酶对其降解的研究

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、质谱等方法,研究了人肝癌细胞（ＨｅｐＧ２）分泌的胰岛素样生长因子结合蛋白－１（＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１）的分子结构、特性,及其被内源性蛋白酶降解的特点,＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１的经抗体免疫沉淀、生化分离,纯化为均一体,其分子是由多个亚构成的蛋白质,分子量约为２７ｋＤ;细胞ＵＭＲ、ＨｅｐＧ２、Ｈ３５ＢＲＬ３Ａ分泌的蛋白酶能将＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１催