应用重组表达钙离子敏感蛋白YC2.1研究粟酒裂殖酵母细胞内钙离子浓度的分布

把重组表达钙离子敏感蛋白的YC2．1基因（yellow cameleon 2．1）导入了粟酒裂殖酵母中,观察了粟酒裂殖酵母细胞内钙离子浓度的分布。结果发现,钙离子敏感蛋白所指示的钙离子呈细胞周缘胞质较高浓度分布,而在细胞胞质中部的钙离子浓度相对低一些。通过DAPI染色实验证实这是由于胞质中部细胞核的填充而形成。fluo-3染色的裂殖酵母细胞,由于fluo-3进入到细胞器（房室化现象）,所以出现胞质的内部区域高的荧光信号,而在周缘的胞质区相对弱,不能真实反应胞质钙离子的分布。因此重组表达钙离子敏感蛋白测定钙离子的方法优于fluo-3荧光探针的方法,对于裂殖酵母细胞胞内钙离子的研究具有良好的应用前景。     

意大利蜜蜂脑神经细胞钙离子浓度测定方法的研究

本实验试图建立一套蜜蜂脑神经细胞游离钙离子浓度([Ca2+]i)的体外测定方法.采用Fura-2 acetoxy-methyl ester(Fura-2 AM)作为荧光指示剂,对体外培养的意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica Spinola脑神经细胞的[Ca2-]i测定方法进行了探索,研究了不同浓度的Fura-2 AM及不同的孵育时间对细胞钙离子测量ratio值的影响.结果测得细胞ratio值随Fura-2AM浓度的增大而降低,孵育时间也会影响ratio值,综合比较得到最佳孵育时间以及最佳染料浓度,并在此基础上制订了一套意大利蜜蜂蜜蜂脑神经细胞钙离子浓度的测定方法,这对进一步建立以蜜蜂神经细胞钙离子浓度变化作为衡量环境有毒物质对蜜蜂的风险研究具有重要意义.     

荧光指示剂测定植物细胞内游离钙离子的研究进展

对用荧光指示剂法测定植物细胞内游离钙离子的研究进展和问题进行了评述。     

钙离子浓度动态变化

目的:探讨应用激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)技术检测缺氧状态的人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)内钙离子(Ca2+)浓度动态变化的价值。方法:HPMVEC常规培养,按观察时间点不同分为5个缺氧培养组(1h hyp组、2h hyp组、4h hyp组、6h hyp组和8h hyp组)以及1个对照组(0h con组)共6个组,每组设8个复孔,应用LSCM技术测定缺氧后HPMVEC内Ca2+浓度水平及随时间推移的变化。结果:LSCM技术显示HPMVEC内Ca2+的荧光强度1h hyp组与0h con组比较、2h hyp组与1h hyp组比较、4h hyp组与2h hyp组比较、6h hyp组与4h hyp组比较、8h hyp组与6h hyp组比较有显著差异(P<0.05)。线性回归分析结果显示Ca2+荧光强度与缺氧时间成正相关(r=0.969,P<0.01)。结论:HPMVEC内Ca2+浓度随缺氧时间增长而增高;LSCM在动态检测缺氧状态下HPMVEC内的Ca2+浓度变化中具有明显优势。     

细胞转化过程中胞内钙离子浓度的变化

使用钙离子荧光探针Ｆｌｕｏ－３ＡＭ和ＤＮＡ荧光染料Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２联染细胞的方法,利用显微分光光度计ＭＰＶⅡ测量了两种温度敏感细胞—６Ｍ２和ｔｓＲＳＶＮＩＨ３Ｔ３－ＬＡ９０细胞及Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２和转化Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２细胞在不同细胞周期时相内钙的浓度,发现从Ｇ１期到Ｓ期到Ｇ２期,６ｍ２细胞当在３３℃培养时（转化状态）胞内钙的浓度〔Ｃａ＾２＋〕ｉ分别为８５．０,１３８．４２３９．０ｎｍｏｌ     

细胞生长测定方法与研究进展

准确、迅速和在线测量细胞培养过程中培养液的细胞量是深入研究细胞代谢控制的基础,无论是对科学研究,还是对工业化生产都有重要的意义。在简要阐述细胞生长不同测定方法的基础上,系统综述和评价了细胞测定方法的研究进展,提出了细胞测定方法进一步研究的几点建议。     

细胞外钙调素对百合花粉细胞内钙离子浓度的影响

以川百合（Lilium davidii Duchartre)花粉为材料,利用低温装载法在完整花粉粒中成功地装置了酯化形式的钙离子荧光指示剂fluo-3AM,利用激光共聚焦显微技术研究了细胞外钙调素对细胞内游离钙离子浓度的影响,结果发现外源纯化钙调素可以使细胞内游离钙离子的浓度升高,在一定范围内促进效果与钙调素浓度呈正相关。不能透过细胞膜的钙调素拮抗剂Ｗ７－agarose和植物钙调素抗血清处理都可 使花粉细胞质中游离钙离子浓度降低,表明内源细胞外钙调素可能在维持和促进花粉细胞质中游离离子方面具有重要作用。     

描述肝细胞中两类不同特性钙离子浓度振荡

细胞内第二信使钙离子通常以浓度振荡的方式转导多种生理学信息,影响细胞分化、成熟和凋亡等各种生理过程。肝细胞实验中看到在一定浓度范围的激动剂刺激下,细胞质钙离子浓度的变化可呈现出很不相同的图像。例如顺脱羟肾上腺素刺激下,可出现简单的周期振荡,振荡频率随激动剂浓度的不同有变化;在腺苷三磷酸刺激下,随激动剂浓度从低到高,胞质钙离子浓度的变化可以从开始出现简单振荡,到形成复杂的多峰间歇振荡。肝细胞中钙离子浓度振荡的峰值多在500nmol/L到800nmol/L范围。给出一个四为量数学模型的改进形式,可以模拟肝细胞中钙离子浓度从简单振荡向复杂振荡的变化。数值计算给出与实验结果比较一致的振荡波形和振幅。     

不同钙离子浓度对鲎腹神经光感受器二种光碰击的影响

在生理盐水中用持续的弱光（６＊１０＾６－９＊１０＾６个光子／ｃｍ＾２）刺激鲎的腹神经光感受器细胞可得到二种类型的碰击,一种称谓“标准光碰击”或“Ｃ２碰击”,它有对称的形状,信号衰退的指０数常数大于０．０１／毫秒。     

细胞内外钙离子浓度对鲎腹神经感光器光适应的影响

用细胞内记录的方法研究了由微弱持续光刺激（６×１０＾６￣９×１０＾６光子／ｃｍ＾２,１０ｓ引起鲎（Ｌｉｍｌｕｓ ｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓ）腹神经光器膜电流的变化－－光碰击。结果表明,在生理盐水（１０ｍｍｏｌ／ＬＣａ＾２＋）中光碰击的平均面积为（３９．５±１．７６）ｐＣ,微弱光适应（记录前２．５ｓ加１次光闪,９×１０＾９光子／ｃｍ＾２）使得光碰击的面积下降至（１０．５±２．２９）ｐＣ（ｎ＝４）。在低钙溶     

用Fura-2测定缺氧时海马细胞内游离钙离子浓度的变化

本文用Fura-2荧光测定技术直接监测了缺氧时大鼠海马细胞内游离钙离子浓度[Ca~(2+)]_1的变化。实验发现,缺氧可使海马细胞[Ca~(2+)]_1显著增高,并且在缺氧过程中其增高呈现明显的时相性变化。在去除细胞外钙的情况下,缺氧仍能使[Ca~(2+)]_1增高,仅增高幅度有所降低;另外[Ca~(2+)]_1不再出现时相性变化特征。结果提示,胞外Ca~(2+)的内流以及内源Ca~(2+)的释放均参与了缺氧所致海马细胞[Ca~(2+)]_1的增高过程,缺氧时[Ca~(2+)]_1升高的时相性变化为胞外Ca~(2+)内流引起。     

细胞内贮存钙释放的机制

细胞内贮存钙的释放主要由１,４,５－三磷酸肌醇（ＩＰ３）受体系统和ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体系统调控。前通过ＩＰ３与其受体结合后,诱发细胞内钙释放;后通过复杂的机制调节环腺苷二磷酸核糖含量,由ｃＡＤＰＲ直接或间接作用于ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体,进而启动由Ｃａ＾２＋诱发的Ｃａ＾２＋释放机制。上述两系统之间相互作用,共同调节细胞内贮存钙的释放。     

Fluo-3检测细胞内钙离子的条件优化

目的:优化用于检测细胞内钙离子的Fluo-3浓度条件和羧苯磺胺浓度条件,以得到最适的检测用浓度组合。方法:应用析因实验设计方法,选择32种不同的Fluo-3和羧苯磺胺浓度组合孵育CHO-K1细胞,通过FlexStation检测平台检测细胞内的钙离子浓度。结果与结论:检测信号随着Fluo-3浓度的升高而增强,同时随着羧苯磺胺浓度的升高而减弱。4μmol/L的Fluo-3和1mmol/L的羧苯磺胺浓度组合是最适用的检测条件。     

Con A刺激致T淋巴细胞胞浆游离Ca~(2+)浓度升高

本文分别应用荧光Ca~(2+)指示剂Quin2和Indo-1研究了Con A刺激的T淋巴细胞[Ca~(2+)]i升高过程及其发生机制.结果表明Con A与T淋巴细胞作用可导致细胞[Ca~(2+)]i的迅速升高.这种增加的胞内游离Ca~(2+)不仅来自胞外Ca~(2+)的内流,也来源于胞内钙库的释放.其中Ca~(2+)内流与T细胞钙通道的开放有关.可被钙通道抑制剂戊脉胺抑制,细胞的去极化及钾通道阻断剂四乙胺均不能阻断Ca~(2+)的内流,提示Ca~(2+)内流不是通过电位操纵的钙通道实现的,也与拥通道的开闭无关.Ca~(2+)内流可能是通过Con A受体活化的受体操纵的钙通道而实现的.     

细胞生长测定方法与研究进展*

准确、迅速和在线测量细胞培养过程中培养液的细胞量是深入研究细胞代谢控制的基础 ,无论是对科学研究 ,还是对工业化生产都有重要的意义。在简要阐述细胞生长不同测定方法的基础上 ,系统综述和评价了细胞测定方法的研究进展 ,提出了细胞测定方法进一步研究的几点建议。     

巨细胞病毒感染与细胞内钙离子变化相关性研究

人类受人巨细胞病毒（HCMV）感染非常普遍,但其致病机制尚不清楚,钙是细胞内最普遍而重要的信号传导成分,它在细胞活动的各种生理生化反应和疾病的发生和发展中有重要作用,HCMV感染后对受染细胞内钙离子浓度产生明显影响,这不仅有利于HCMV在胞内的复制和成熟,而且与其致病有关。     

内皮细胞电压门控钙离子通道及其功能研究进展

内皮细胞（endothelial cell,EC）作为不可兴奋细胞,早前通常被认为缺乏功能性电压门控钙离子通道（voltagegated calcium channel,VGCC）,如人脐静脉内皮细胞、牛肺动脉内皮细胞、牛主动脉内皮细胞等。随着膜片钳技术、荧光显微技术、聚合酶链式反应（PCR）技术的发展,越来越多的VGCC在各种内皮细胞中被发现,如人主动脉内皮细胞、大鼠主动脉内皮细胞、大鼠肺微血管内皮细胞等。目前对于VGCC存在与否主要有3种检测方法:利用膜片钳技术对离子通道电流的检测、利用荧光显微技术对胞内钙离子浓度变化的检测、利用PCR技术对离子通道基因或蛋白质表达的检测。内皮细胞不单单是血液和其他相邻组织细胞及基质蛋白间的物理屏障,更重要的是通过细胞膜上VGCC的开放和关闭对细胞和血管组织的生理变化产生显著的影响。一方面,VGCC对胞内钙离子浓度变化的影响,控制着一氧化氮（NO）等血管舒张因子的释放,调节血管张力的平衡。另一方面,作为钙离子内流重要途经的VGCC,经过Ras和MEK通路的诱导、磷酸化PI3K和Akt通路,影响内皮细胞迁移和增殖。此外,部分生理现象,如血管内压力产生...     

测定细胞内自由钙的显微荧光光度计的研制和应用

以ＸＳＪ－２型荧光显微镜为基础,建立了测定细胞内自由钙的显微荧光光度计,为建立这套装置,对荧光显微镜主要作了如下改动：首先,为提供稳定的激光光源,交流汞灯被换成直流氙灯;其次光路中安装了镶有两块干涉滤色片的激发滤色片转盘,使生物样品交地被两种不同波长的光激发。整套装置的运转在微机控制下,在这套装置上,成功地用Ｆｕｒａ－２测定了细胞内自由钙变化,文中提供了应用实例。     

维持细胞内铜离子浓度稳定的分子机制

对生命而言,铜是一种必须的微量元素,它以辅基的形式参与细胞内多种重要的代谢途径。赖氨酸氧化酶参与结缔组织的形成和胶原交联,超氧化物歧化酶清除胞内自由基,细胞色素氧化酶是呼吸链电子传送蛋白,酷氨酸酶参与色素形成途径,多巴胺β羟化酶则与神经传导有关。细胞内铜离子浓度过低会影响这些酶的活性及相应的生理代谢途径,影响细胞的生存。但细胞内铜离子浓度超过生理需求也会引起严重的问题。铜离子能氧化蛋白,脂类和ＤＮ