五倍子内生菌的分离与鉴定

目的分离五倍子内生菌,并进行筛选和鉴定。方法分别采用牛肉膏蛋白胨固体、液体培养基,高氏1号培养基,马丁孟加拉红培养基外加4‰的国产硫酸庆大霉素(800万单位)四种培养基对五倍子内生菌进行分离。结果得到5株菌株,经菌落形态显微观察与16S rDNA序列分析鉴定,5株菌株均为革兰阳性菌;A1、A5和B1为杆菌,同属芽胞杆菌属;A3为球菌,微球菌属;A6为球菌,葡萄球菌属;A5与B1同源性最高,达到100%。结论从五倍子中分离得到5株内生细菌,将有利于五倍子的深入开发利用。     

一株拮抗香蕉枯萎镰刀菌稀有放线菌的分离及鉴定

本研究采用苯酚、干热、SDS和超声波四种不同的预处理方法从五指山原始林区采集的土样中选择性分离得到的702株稀有放线菌,共筛选出4株具有拮抗香蕉枯萎镰刀菌活性的菌株,经过复筛,获得一株高活性的拮抗菌210-1-61.通过对其进行形态鉴定、生理生化特征鉴定和16S rDNA序列分析,结果表明该菌株与M.pattaloongensis JCM12833T进化关系最近,其16S rDNA序列同源性最高,达98.89%;其形态与生理生化特性也与小单孢菌属M.pattaloongensis JCM12833T很接近.此外,我们还构建了与该菌株同源性较高的模式菌株16S rDNA序列的聚类分析图,结果发现该菌株与M.pattaloongensis JCM12833T稳定单独构成一个分支,二者亲缘关系最近,初步鉴定该菌株为Micromonospora. pattaloongensis.本研究为今后探讨小单孢菌属稀有放线菌对香蕉尖孢镰刀菌具有拮抗活性提供研究实验材料.     

诺卡氏菌属中的两个新种

由土壤中分离的两株诺卡氏菌形放线菌A-100菌株和186菌株．经鉴定,其形态和细胞壁化学组分均属诺卡氏菌属,但培养特征和生理生化特性与该属中的已知种不同。因此认为这两株菌是诺卡氏菌属中的两个新种,并分别命名为鲜黄诺卡氏菌Nocardia galba n.sp和绛红色诺卡氏菌Nocardia purpurea n. sp.。     

高产壳聚糖酶菌株的筛选及分类鉴定

目的：筛选一株高产壳聚糖酶的菌株。方法：通过形态学、生理生化及16S rDNA序列测定,对菌株进行分类鉴定。在培养基中以壳聚糖为唯一碳源,对长白山天池边的土样进行筛选。结果：获得一株产壳聚糖酶活力较高的菌株,最大酶活力达0．325U／ml。结论：经16S rDNA序列比对,该菌株与Beta proteobacterium的同源性高达99％。结合《伯杰细菌鉴定手册》（第九版）,将该菌株鉴定为Beta proteobacterium属的一个种,定名为Beta proteobacterium sp．T1。     

脱色希瓦氏菌(Shewanella decolorationis)S12T的脱色特性

从印染废水活性污泥中分离到一株高效染料脱色菌,经鉴定该菌株为希瓦氏菌属的一个新种,命名为脱色希瓦氏菌(Shewanelladecolorationis)S12T。该菌株在偶氮染料浓度为50mg/L的培养基中培养4h后,染料去除率达到96%,对偶氮染料的最高脱色浓度达到2000mg/L。在浓度为500mg/L的偶氮染料平板上生长4d后,可观察到明显的脱色圈。全波长光谱扫描的结果表明希瓦氏菌S12T以生物降解的方式对偶氮染料进行脱色。希瓦氏菌S12T的脱色酶为组成型的胞内酶。     

一株代谢煤油兼性厌氧菌的筛选鉴定和特性

从大港油田的油层水样中分离得到一株能以煤油为碳代谢生成表面活性剂、产酸和产气的菌株DG7,该菌为革兰氏阴性杆菌,兼性厌氧,运动,能在NaCl浓度为18．5％的培养基中生长,经鉴定,可能为气单杆菌属（Aeromonas sp.）中的一个新种,但学需进一步确定。     

两种栽培型广藿香内生真菌群落组成变化

为探索内生真菌与广藿香互作间对宿主活性成分形成机制的影响,该研究以成分差异较大的牌香和湛香为对象,采用传统形态学方法对所获菌株归类,通过真菌通用引物ITS1/ITS4扩增菌株rDNA-ITS序列,鉴定其分类地位并研究其多样性。结果表明：(1)用PDA和LBA培养基对苗期、分枝期和成株期广藿香茎叶组织块进行内生真菌分离,共获得3 070株菌株,其中牌香(PX)分离出1 624株,鉴定出1 319株,分属于36属;湛香(ZX)分离出1 446株,鉴定出994株,分属于33属。牌香分离出7种特有内生真菌,分别为香柱菌(Epichloe typhina)、盘长孢状刺盘孢菌(Colletotrichum gloeosporioides)、座腔孢菌(Botryosphaeria sp.)、丝核菌(Rhizoctonia sp.)及截盘多毛孢菌(Truncatella sp.),并首次分离到疫霉菌(Phytophthora sp.)和指疫霉菌(Sclerophthora sp.),这2种菌属于卵菌门内生菌。湛香分离出拟青霉菌(Paecilomyces sp.)和尾孢菌(Cercospora sp.)...     

一株产纤维素酶菌株的分离、鉴定及产酶特性

【目的】筛选并鉴定一株产纤维素酶的菌株,初步探究该菌的产酶特性,为综合利用纤维素筛选菌源。【方法】在常温条件下,采用滤纸培养基对菌种富集,采用CMC-Na初筛纤维素降解菌,采用LB培养基分离纯化菌株,经形态学、生理生化特征试验、16S r RNA基因序列测定等分析筛选菌株的系统分类地位。单因素试验确定培养时间、培养温度、初始p H及Na Cl浓度对筛选菌株产酶活力的影响。【结果】从腐烂的玉米秸秆中分离出一株在常温下产纤维素酶细菌KZ-2,根据菌落形态特征、生理生化特征鉴定以及16S r RNA基因序列分析,初步鉴定KZ-2为肠杆菌(Enterobacter sp.),为潜在新种。产酶条件实验显示:该菌使用产酶发酵培养基120 h产酶量达到最大值,在25–35°C、初始p H 4.5–5.5、Na Cl浓度1.0%–2.0%范围内为最佳产酶条件,在最适条件下酶活可达80.93 U/m L。该菌株所产纤维素酶最适反应p H为7.0,最适反应温度为50°C。【结论】KZ-2是一株具有降解纤维素能力的细菌,在常温下即可分泌纤维素酶,并且该菌株为潜在新种,具有潜在的开发价值。     

一株代谢煤油兼性厌氧菌的筛选鉴定和特性*

从大港油田的油层水样中分离得到一株能以煤油为碳源代谢生成表面活性剂、产酸和产气的菌株DG7,该菌为革兰氏阴性杆菌 ,兼性厌氧 ,运动 ,能在NaCl浓度为 18.5%的培养基中生长 ,经鉴定 ,可能为气单胞杆菌属 (Aeromonassp.)中的一个新种 ,但还需进一步确定。     

耐热碱性果胶酶产生菌的筛选及鉴定

本文以果胶为唯一碳源,在55℃下,从土壤中筛选出耐热碱性果胶酶产生菌20 株.进一步建立了果胶酶活性的定量测定方法:还原糖测定法和紫外测定法.经酶活力测定发现,4 株菌有较强碱性果胶酶活性,酶活力分别为3493、2983、2572、2561U/mL.4 株菌均为革兰阳性菌.对自行筛选的碱性果胶酶产生菌进行鉴定,其中活性最高的菌株M29 的16S rDNA 的序列分析表明与菌株Bacillus halodurans 的同源性高达99%,通过生理生化试验以及16S rDNA 的序列分析,鉴定碱性果胶酶产生菌为Bacillus halodurans M29.     

Molecular identification of alkaliphilic and halotolerant strain<Emphasis Type="Italic"> Bacillus</Emphasis> sp. FTU as<Emphasis Type="Italic"> Bacillus pseudofirmus</Emphasis> FTU

The systematic position of the alkaliphilic and halotolerant strain Bacillus sp. FTU was refined in view of the comprehensive taxonomic revision of the group of alkaliphilic and alkalitolerant Bacillus strains. Sequence analysis of almost the entire 16S rRNA gene of Bacillus sp. FTU revealed 99.8% homology with two Bacillus pseudofirmus strains. Subsequent DNA-DNA hybridization analysis confirmed the close relationship of Bacillus sp. FTU with the type strain of B. pseudofirmus (the level of homology reached 86%). Results of physiological and biochemical characterizations relevant for the group clearly underlined the positioning of strain FTU within this species. It is therefore concluded that Bacillus sp. FTU represents a strain of the alkaliphilic species B. pseudofirmus and is to be renamed as B. pseudofirmus FTU. The phylogeny of different Bacillus species is discussed using N-terminal sequence homologies of some caa (3)-type oxidase subunits.     

1株根结线虫拮抗放线菌新种的分离与鉴定

从海南东寨港红树林底泥中分离到206株放线菌。利用24孔板法进行抗线虫活性筛选,获得根结线虫拮抗菌HAlll66。该菌株16SrDNA序列与Nocardiopsis trehalosi VKM Ac-942^T相似性最高（98．3％）,并在系统发育树上聚为同一分支,二者DNA—DNA杂交率38．8％。形态和生理生化特征也表现出一定差异。基于表型与分子特征,鉴定菌株HA11166为Nocardiopsis属新种,命名为东寨港拟诺卡氏菌（Nocardiopsis dongzhaigangensis sp. nov. ）。     

响应面分析法优化(R)-扁桃酸发酵培养基

采用响应面分析法对Bacillussp.HB20菌株合成(R)-扁桃酸的培养基成分进行优化。首先利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响(R)-扁桃酸产率的三个主要因素:麦芽糖、蛋白胨和牛肉膏。在此基础上用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法进行回归分析。结果表明,麦芽糖、蛋白胨和牛肉膏浓度与(R)-扁桃酸产率存在显著的相关性,通过求解回归方程得到最佳质量浓度:蛋白胨11.507g/L,牛肉膏6.708g/L,麦芽糖10.907g/L,(R)-扁桃酸产率理论最大值达到66.87%。经模型验证,预测值与验证试验平均值接近,在优化条件下(R)-扁桃酸产率提高了25.87%。     

一株纤维蛋白溶解酶产生菌的鉴定及其产酶条件初步研究

从亚洲传统发酵食品--虾酱中筛选到一株产纤维蛋白溶解酶能力较强的菌株,通过形态和常规生理生化性质鉴定,发现该菌株与芽孢杆菌属细菌的特征很相近,结合16S rDNA序列分析,构建系统发育树,确定其分类地位,由中国典型培养物保藏中心定名为Bacillus sp.nov.SK006(CCTCC No.M 205071),并优化了发酵培养基组成及培养条件,本研究为该菌株的深入研究和广泛应用提供了理论依据.     

Molecular cloning and nucleotide sequence of the gene encoding an endo-1,4-beta-glucanase from Bacillus sp. KSM-330.

The gene encoding an acid endo-1,4-beta-glucanase from Bacillus sp. KSM-330 was cloned into the HindIII site of pBR322 and expressed in Escherichia coli HB101. The recombinant plasmid contained a 3.1 kb HindIII insert, 1.8 kb of which was sufficient for the expression of endoglucanase activity in E. coli HB101. Nucleotide sequencing of this region (1816 bp) revealed an open reading frame of 1389 bp. The protein deduced from this sequence was composed of 463 amino acids with an Mr of 51882. The deduced amino acid sequence from amino acids 56 through 75 coincided with the amino-terminal sequence of the endoglucanase, Endo-K, purified from culture of Bacillus sp. KSM-330. The deduced amino acid sequence of Endo-K had 30% homology with that of the celA enzyme from Clostridium thermocellum NCIB 10682 and 25% homology with that of the enzyme from Cellulomonas uda CB4. However, the Endo-K protein exhibited no homology with respect to either the nucleotide or the amino acid sequences of other endoglucanases from Bacillus that had been previously characterized. These results indicate that the gene for Endo-K in Bacillus sp. KSM-330 has evolved from an ancestral gene distinct from that of other Bacillus endoglucanases.     

嗜麦芽寡养单胞菌D2株2套Ⅱ型分泌系统

嗜麦芽寡养单胞菌D2株经前期研究发现有2套Ⅱ型分泌系统（T2SS）,根据嗜麦芽寡养单胞菌K279a、R551—3、JV3、D457的T2SS基因簇序列,以及D2株的部分测序结果设计引物,采用基因移步法逐一扩增2套T2SS基因序列,产物连接至T载体,经酶切鉴定后测序、拼接。发现有22个完整的开放多码框架（ORF）,比对分析后发现T2SSl的基因簇与同种属细菌相应基因簇序列同源性均在80％以上,对应氨基酸序列同源性均能达到97％以上,而T2SS2基因簇与K279a、R551—3对应基因序列和氨基酸序列的同源性均不及T2SS1高。2套T2SS的GspE、F、I基因同源性在50％以上,其他对应基因同源性在35％～68％之间不等,氨基酸序列同源性则为15％～61％。2套他ss与铜绿假单胞菌PA01的同源性高于不同科的小肠结肠炎耶尔森菌。T2SS的序列测定及同源性分析为进一步研究细菌蛋白分泌机制奠定基础。     

一株耐锌真菌CTB430-1分离鉴定及其富集特性

从某锌尾砂坝土壤中筛选分离、纯化得到一株对锌具有较强抗性的菌株,命名为CTB430-1.对菌株进行形态观察、生理生化试验,采用ITS基因序列分析并构建系统发育树,鉴定该菌为黄曲霉（Aspergillus flavus）.研究其对Zn（Ⅱ）抗性和富集特性.结果表明：Zn（Ⅱ）对该菌株的最低抑菌浓度为800 mg/L;菌株对Zn（Ⅱ）的富集量在250 mg/L时达到最大,为40.37 mg/g;采用扫描和透射电镜观察富集前后菌丝体表面形态和内部结构变化,表明Zn（Ⅱ）毒害作用可能导致生长中菌丝表面结构破坏,CTB430-1富集Zn（Ⅱ）由表面吸附和胞内富集两部分组成.     

Analysis of the flagellin (hag) gene of alkalophilic Bacillus sp. C-125.

Motility of the alkalophilic Bacillus sp. C-125, a flagellate bacterium, was demonstrated to be Na(+)- and pH-dependent. Flagellin protein from this strain was purified to homogeneity and the N-terminal sequence determined. Using the hag gene of Bacillus subtilis as a probe, the hag gene of Bacillus sp. C-125 was identified and cloned into Escherichia coli. Sequencing of this hag gene revealed that it encodes a protein of 272 amino acids (M(r) 29,995). The predicted N terminal sequence of this protein was identical to that determined by N-terminal sequencing of the flagellin protein from strain C-125. The alkalophilic Bacillus sp. C-125 flagellin shares homology with other known flagellins in both the N- and C-terminal regions. The middle portion, however, shows considerable differences, even from that of flagellin from the related species, B. subtilis.     

貂、狐、貉源犬瘟热病毒的分离鉴定与序列分析（英文）

采用能稳定表达犬信号淋巴细胞活性分子（SLAM）的Vero-DST细胞从发病貉、狐狸和水貂病料,分离获得5株病毒,经电镜形态观察、RT-PCR检测、理化特性测定和人工感染发病试验鉴定,均为犬瘟热病毒（CDV）,分别命名为HT-P（貉源）、THD1（貉源）、HD（貂源）、LN（貂源）和HB（狐源）。5个分离毒株TCID50为10-5.2～-7.3/ml;除鸡、鹅红细胞呈微弱阳性外,其余均未见血凝作用;对乳鼠的LD50分别为2×10-3.8～-4.8/ml,对实验兔无致病性,对貉有明显致病性作用。5株CDV H和N基因序列分析结果为5个分离株之间H基因nt序列同源性均达到97.5%以上,HT-P（貉源,山东青岛）与THD1（貉源,山东潍坊）的aa同源性为100%,二者与其他分离株间aa序列同源性为87.9%～99.1%;与chn等疫苗株基因nt序列和推导aa序列同源性普遍较低,分别为90.5～91.8和89.%～91.8%。5个分离株之间N基因nt序列同源性均≥94.5%,HT-P与THD1同源性最高（99.8%）,分离株之间aa序列除HT-P、THD1与HD（貂源,山东青岛）同源性较高（99.0%以上）外,其他．分离株之间同源性低。与chn等疫苗株nt序列同源性较低（90．9～93．5％）。此外,HD和LN（貂源,辽宁大连）发病区域相距较远,但具有较高的同源性,但与HB（狐源,河北沦州）具有相对较低的nt同源性,提示野毒株在易感动物上可能存在种属差异。分离毒株与疫苗株之间H和N蛋白基因差异,可能与CD免疫失败有关。