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相似文献
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1.
在化猪肝微粒体磷脂酰肌醇-4-激酶(PI-4-K)的基础上,制备该酶的免疫血清,提纯IgG,并建立了PI4-K的ELISA,进行不同组织中PI4-K的免疫沉淀分析和免疫定量。结果证明:猪肝微粒体PI4-K的抗血清或抗体IgG可沉淀猪肾和猪肺的微粒膜,猪肝细胞膜和人中性粒细胞细胞膜TritonX-100增溶液(TXSM)中的PI4-K表明不同组织,不同亚细胞和不同种属的PI4-K有相似的抗原性。猪肝  相似文献   

2.
许多真核细胞膜表面蛋白 (例如CD1 4、CD1 6b、CD2 4、CD48、CD5 2、CD5 9、CD5 5 /DAF、CD5 8 /LFA 3、CD6 6、CD6 7、CD73、CD87、CD90 /Thy 1、CD1 5 7、Ly 6等 )通过糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚着于细胞膜上 ,称为GPI锚定蛋白 (GPI anchoredproteins,GPI AP) ,它们没有跨膜区和胞内部分 ,不能直接与胞内发生联系。但用特异性抗体结合这些结构上不同的膜蛋白或膜糖鞘脂 (glycosphingolipi…  相似文献   

3.
采用在碱性条件下正丁醇抽提的人胎盘膜上的碱性磷酸酶(ALP)作底物, 检测血清中糖基磷脂酰肌醇- 特异性的磷脂酶D (GPI-PLD) 的活性水平. 这种ALP 含疏水的GPI锚定膜结构(anchor), 与血清保温后能被其中的GPI-PLD降解成亲水的不含GPI-锚定的ALP. 采用Triton X-114 二相分离法和梯度凝胶电泳法来分离含GPI的ALP和不含GPI的ALP, 计算出转化率(% ), 用来表示GPI-PLD酶活性. 对这两种方法进行比较后, 表明在一般实验室条件下, 二相分离法更为简便, 并对其影响因素进行了全面探讨.  相似文献   

4.
在纯化猪肝微粒体磷脂酰肌醇-4-激酶(PI-4-K)的基础上,制备该酶的免疫血清、提纯IgG,并建立了PI4-K的ELISA,进行不同组织中PI4-K的免疫沉淀分析和免疫定量。结果证明:猪肝微粒体PI4-K的抗血清或抗体IgG可沉淀猪肾和猪肺的微粒体膜、猪肝细胞膜和人中性粒细胞细胞膜TritonX-100增溶液(TXSM)中的PI4-K,表明不同组织、不同亚细胞器和不同种属的PI4-K有相似的抗原性。猪肝、肾、肺、胃、小肠和大肠TXSM中PI4-K的活力和酶蛋白含量相仿,急性中性粒细胞白血病患者的中性粒细胞膜上PI4-K的含量和活力都增加3.5倍左右.加上PI4-K抗体沉淀各组织PI4-K活力和酶蛋白的百分率基本相同,支持文献报道组织中微粒体或细胞膜中的PIK主要是PI4-K,而免疫性不同的PI3-K含量极少的观点.  相似文献   

5.
地衣芽孢杆菌1Baciuus Licheniformis)BL-306产生的胞外β-甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,DEAE-纤维素柱层析。Sephadex-G100柱凝胶过滤和DEAE-纤维素柱再层析分离纯化,得到SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)均一样品。用SDS-PAGE测得纯化后β-甘露聚糖酶分子量为26000道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳(PAGEIEF)测得等电点PI为5.0。该酶  相似文献   

6.
黑子南瓜甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆及序列分析   总被引:6,自引:3,他引:3  
依据国外报道的南瓜甘油-3-磷酸转酰酶(GPAT)基因的cDNA序列合成相应引物,用RT-PCR技术,成功地分离了黑子南瓜(Cucurbitaficifolia)GPAT基因的cDNA片段,并亚克隆到了pGEM-T载体系统的多克隆位点上,序列分析表明黑子南瓜GPAT基因的cDNA序列及递推的氨基酸序列与南瓜(Cucurbitamoschata)相比分别具有98%和965%的同源性。在1188bp中有22个核苷酸发生变化,导致13个氨基酸的改变  相似文献   

7.
GSTs同工酶基因在乳腺癌中的扩增与基因的表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
采用DNA和RNA的斑点杂交分析方法,对32例乳腺癌和相应的癌旁正常组织中GST-π,GST-α和GST-μ基因的DNA扩增和RNA转录表达情况进行研究,发现GST-π在乳腺癌中存在基因扩增和明显的mRNA表达升高,GST-π基因表达调控主要在转录水平进行了;GST-α和GST-μ在乳腺癌中表达水平较低,但仍可见α和μ类GST同工酶mRNA转录在肿瘤和正常组织中发生了较大的变化。结合乳腺癌中雌激素  相似文献   

8.
利用来自假单胞菌的GL-7-ACA酰化酶的信号肽和表达元件基因片段构建了GL-07-ACA酰化酶的分泌型高表达质粒pTrcCA1S和pKKCA1S,其中pTrcCA1S为IPTG诱导型质粒,pKKCA1S为组成型质粒。pTrcCA1S和pKKCA1S转入受体菌TG1中都可高表达GL-7-ACA酰化酶基因并将表达产物转运到周质空间,完整细胞酰楷酶比活力分别为23.9单位每克菌体和18.3单位每克菌体  相似文献   

9.
Chen JP 《生理科学进展》1999,30(3):227-230
本课题研究RA538、反义c-ymc重组腺病毒对人胃癌(SGC7901)、食管癌(E C109、EC8712)、正常人胚肺2BS(2BS)及bcl-2高表达细胞第的体仙外生物学作用及其分子机制。结果显示Ad-RA538及Ad-ASc-myc对SGC7901细胞体内外均具有明显的生长抑制及凋亡诱导作用,并能抑制其c-myc、bcl-2、cyclinD1基因的表达及刺激bax基因的表达。对EC109、EC8  相似文献   

10.
通过微机对bcl-2RNA二级结构的分析,设计针对bcl-2片段5'CGCGACCCGGUCGCCAGGACCUCG3'的“锤头状”(Hammerhead)核酶(Ribozyme,RD)基因,平端连接于pGEM-3Zf(-)HincⅡ位点,克隆后经测序表明序列正确,bcl-2和Ribozyme基因经体外转录,50℃作用2h,从1656-1657(C-G)位之间切断bcl-2RNA片段.  相似文献   

11.
亚洲棉GAE6—3A上游序列的分离及其在烟草中的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
根据E6基因保守域设计引物,PCR扩增出亚洲棉(Gassypium arboreum L.)GAE6基因长约400bp片段,序列分析表明该片段与海棉(G.bargbadense)E6基因同源性达96.8%。进一步合成2个反向引物协助进行PCR-96孔板筛库分离到亚洲板棉GAE6-3A克隆。酶切鉴定其插入片段长约8.0kb,序列测定及分析结果表明其上游和约1.5kb,将GAE6-3A上游序列克 含有  相似文献   

12.
糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白是一种新型细胞表面蛋白,它只通过GPI结构锚定于细胞膜表面而不跨越其磷脂膜双层结构;当它与细胞共同孵育时,可自动整合至细胞膜表面。GPI锚定蛋白转化法利用GPI锚定信号将目的蛋白直接整合至靶细胞表面,超越了目的蛋白靶细胞自身合成的机制,具有对靶细胞选择性不高,转化过程迅速等优点,在抗原提呈细胞工程,肿瘤疫苗及移植物抗排斥反应等研究领域得到了广泛应用。  相似文献   

13.
为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAL-1抗性的新型t-PA溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44~Ser50置换为纤粘蛋白Ⅰ型F区间连接序列GluSerLysProGluAlaGluGlu的t-PA组合突变体FrGGI,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明,FrGGI在大鼠血浆中的半衰期延长了15倍,并获得了PAI-1抗性,是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。  相似文献   

14.
为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAI-1抗性的新型t-PA溶性剂,利用基因重组及定位突变技术构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44 ̄Ser50置换为纤粘蛋白I型F区间连接序列Glu Ser Lys Pro Glu Ala Glu Glu的t-PA组合突变体FrGGI,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达,对表达产物的生物学特性分析表明  相似文献   

15.
为了探讨解偶联蛋白(UCP)基因-3826多态性与UCPmRNA表达水平之间可能存在的联系,应用RT-PCR方法测定了UCP基因-3826多态性野生型(AA),杂合子(AG)和突变纯合子(GG)3组人群脂肪组织中UCPmRNA的表达水平.定量结果指出:3种基因型(AA、AG和GG)携带者腹膜内脂肪的UCPmRNA表达水平存在极显著差异(P<0.01),并显示突变等位基因(G)的数量与UCPmRNA表达水平呈负相关.此结果表明UCP基因A→G(-3826)变异与UCPmRNA表达水平降低密切相关.但该变异导致UCPmRNA表达水平降低的机制还有待进一步研究  相似文献   

16.
采用DNA和RNA的斑点杂交分析方法,对32例乳腺癌和相应的癌旁正常组织中GST-π、GST-α和GST-μ基因的DNA扩增和RNA转录表达情况进行研究,发现GST-π在乳腺癌中存在基因扩增和明显的mRNA表达升高,GST-π基因表达调控主要在转录水平进行的;GST-α和GST-μ在乳腺癌中表达水平较低,但仍可见α和μ类GST同工酶mRNA转录在肿瘤和正常组织中发生了较大的变化。结合乳腺癌中雌激素受体(ER)表达情况还发现GST-π表达水平与ER的表达存在负相关性。  相似文献   

17.
野生型及启动子区突变的HPFHAγ基因在MEL细胞中的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
研究了野生型Aγ珠蛋白基因、中国型胎儿血红蛋白持续存在综合症(HPFH)Aγ基因(启动子区-196C-T突变)及希腊型HPFHAγ基因(-117G-A突变)在鼠红白血病(MEL)GM979细胞中的表达,比较每个整合的Aγ基因明显增加的表达水平,而-117G-A196C-T突变Aγ基因未显示比野生型Aγ基因明显增加的表达水平,而-117G-A空变Aγ基因在未分化的及HMBA或丁酸钠诱导分化的MELG  相似文献   

18.
大多数枯草杆菌载体在表达外源基因时会出现分离或结构不稳定,而将目的基因整合至染色体上的基因整合方法,近年来得到人们的普遍关注。通过构建一套整合载体,将β-环状糊精葡基转移酶基因随机整合至枯草杆菌1A289的染色体上,从表达氯霉素抗性及β-CGTase阳性株中选得菌株Bs2,其氯霉素抗性为5γ/ml,β-CGTase酶活为266μ/ml。后又经多次整合及更高浓度氯霉素抗性的选择,获得一株Bs16-7  相似文献   

19.
β2糖蛋白Ⅰ(beta-2-glycoprotein Ⅰ,β2GPI)是一分子量为50 kD的糖蛋白.从抗磷脂抗体综合症(Antiphospholipid antibodies syndrom ,APS)患者身上获得的抗体可直接与β2GPI作用.以β2GPI为目标分子,在噬菌体十五肽库中筛选抗β2糖蛋白Ⅰ抗体的小肽抑制剂.通过四轮亲和性筛选,噬菌体的回收率从1.26×10- 4% 增加到3.19×10- 2% .随机挑取噬菌体克隆测定其与β2GPI的结合活性及其对β2GPI与自身抗体结合的抑制活性,其中部分噬菌体克隆表现出40% 的抑制活性.经DNA 序列测定,得到一组相关序列.该结果为研究β2GPI的抗原表位奠定了良好的基础.  相似文献   

20.
人血管生成素基因的优化表达及活性测定   总被引:3,自引:0,他引:3  
血管生成素(angiogenin,ANG)广泛存在于多种肿瘤组织中,在肿瘤发生的不同刺激新生血管的形成。利用基因工程技术生产血管生成素,对于研究血管生成素的作用机制及寻找抗血管生成素的药物具有重大价值。倡该基因在大肠杆菌中不能直接表达,本文根据原核翻译起序列的局部二级结构自由能设计了AUG上下游序列,并利用RT-PCR方法从人肺癌细胞系A549中扩增出起始区改造的ang基因,成功构建了人ANG的高  相似文献   

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