乙醇-酶体系预处理结合水提法提取灵芝中β-葡聚糖的研究

采用乙醇-酶预处理体系,结合水提法较系统地研究了灵芝子实体中β-葡聚糖的提取技术。结果表明,乙醇-酶体系预处理的关键参数为:乙醇质量分数60%(V/V),加酶量1.5%(M/V,g/m L)、酶解温度45℃、酶解p H8.0;在乙醇-酶体系预处理的基础上,进一步采用单因素试验和Box-Benhnken试验设计与响应面分析法对灵芝子实体中β-葡聚糖的热水提取工艺进行了优化。结果显示水提温度、提取时间、水料比3个因素及水提温度与水料比二者的交互作用对β-葡聚糖的提取有显著影响。经优化后获得3个核心因素的最佳水平为:提取温度80℃、提取时间2.5h、水料比35:1。在乙醇-酶预处理结合水提取条件下,灵芝子实体中β-葡聚糖的提取得率可达0.412mg/g,是传统无水乙醇回流预处理结合水提法提取β-葡聚糖得率的2.1倍。本研究为灵芝β-葡聚糖的进一步提取放大试验奠定了技术基础。     

外源物质对灵芝多糖和β-葡聚糖发酵的影响

研究了14种外源物质（化合物）对灵芝细胞生长和发酵合成多糖和β-葡聚糖的影响。结果表明,连翘水提物（3g/L）对灵芝细胞生长具有显著促进作用;薏苡仁酯（3g/L）对灵芝胞内多糖和β-葡聚糖的合成均具有促进作用;而桔梗水提物、硝酸铈铵、硝酸镨、茉莉酸甲酯和硝普钠对灵芝细胞生长和产物合成均具有抑制作用。进一步通过Box-Behnken试验设计和响应面法分析,建立了添加薏苡仁酯发酵产β-葡聚糖的二次多项式模型,经分析得到产β-葡聚糖的最优条件为：薏苡仁酯添加量10.5g/L、接种量16%、添加时间第88小时、发酵初始pH 7.00。在此条件下获得β-葡聚糖的产量可达(40.67±8.43)mg/L,与未添加薏苡仁酯的对照组相比,提高了41.86%;多糖产量为(0.99±0.21)g/L,与对照组相比,提高了31.99%。结果提示所得添加薏苡仁酯的优化条件可定向诱导灵芝β-葡聚糖的合成,同时也表明在灵芝液体发酵体系中添加薏苡仁酯发酵产多糖和β-葡聚糖具有一定的实用价值。     

灵芝液体深层发酵研究进展

用液体深层发酵技术进行工业化培养以获取灵芝活性多糖和三萜是灵芝研究和生产中的热点和方向。本文介绍了近年来灵芝液体发酵技术在培养基的组成、菌种选育、接种量、温度以及发酵模式和动力学方面的研究进展。并探讨了当前灵芝液体发酵研究中的一些问题,为今后进一步深入研究提供思路。     

灵芝菌丝体深层液体发酵培养基研究

探讨了灵芝(Ganoderma     

灵芝菌丝体中β-葡聚糖的提取

比较了热水回流法、热水-酶回流法、超声波法以及超声波-酶水解法等4种提取方法对灵芝菌丝体中β-葡聚糖提取得率的影响。结果表明,采用超声波-酶水解法所得β-葡聚糖的得率最大,影响提取的关键因素为超声波功率(A),水料比(B),p H(C)和加酶量(D)。进一步采用Box-Behnken设计及响应面分析法对这4个因素进行了优化。结果显示,因素A、B、C对β-葡聚糖提取得率的影响达到极显著水平(P0.01),但因素D和所有因素之间的交互作用并不显著(P0.05)。通过回归拟合,建立了预测灵芝β-葡聚糖提取的多项式模型。经响应面最优分析,获得4个因素的最佳水平为:超声波功率275.54W,水料比25.62:1(V/M,m L/g),p H 7.17,加酶量1.05%。经实际试验验证,在该条件下,灵芝菌丝体β-葡聚糖得率可达5.50mg/g。     

灵芝液体发酵清除自由基活性产物发酵条件的优化

以红灵芝(Ganoderma.lucidum)为实验菌株,对其液体发酵活性产物清除自由基的发酵条件进行了研究。实验考察了培养基成分对灵芝液体发酵所产生的有效产物清除自由基能力的影响。结果表明,葡萄糖、酵母粉分别为灵芝发酵活性产物清除自由基效果较合适的碳源、氮源,最佳质量浓度分别为40 g.L-1和3 g.L-1,清除自由基的能力分别为55.7%、40.8%和66.5%、50.6%;铁离子对灵芝发酵产物清除超氧阴离子具有明显的效果,适宜质量分数为70×10-6;清除超氧阴离子的能力为54.6%,而硒离子对灵芝发酵产物抑制羟自由基有明显的促进作用,最适的质量分数为90×10-6清除羟自由基的能力为67.7%。油酸能促进灵芝发酵产物的清除超氧阴离子和羟自由基的能力,适宜的质量分数为0.1%,清除两种自由基的能力分别为:73.7%,53%。     

灵芝液体发酵条件的研究

本文采用液体摇瓶培养法,对灵芝（ＧａｎｏｄｅｒｍａＬｕｃｉｄｕｍ）液体发酵的适用温度、摇瓶装量、摇瓶转速、培养基初始ｐＨ、碳、氮源及其最适浓度进行了探讨。结果表明,灵芝液体发酵的适用温度为２５℃,摇瓶装量为１００～１２０ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶,摇瓶转速为１２０～１５０ｒｐｍ,培养基初始ｐＨ为４５～５０,适用碳,氮源分别是玉米粉,黄豆饼粉,其最适浓度分别为３％、２５％     

产β-葡聚糖酶基因工程菌发酵条件的优化

目的以1株酶产量高、耐热性好的重组大肠埃希菌BL21为材料发酵生产β-葡聚糖酶。方法选用麸皮、豆粕等农副产品配制复合碳源、氮源,优化半合成发酵培养基,并通过正常试验确定最佳培养条件。结果研究得到摇瓶水平产β-葡聚糖酶的最佳培养基（g/L）为：麸皮6.7,玉米粉1.7,豆粕13.8,豆粉13.8,酵母粉7.0,NH4Cl 7.0,Na2HPO4.12H2O3.0,MgSO4.7H2O0.75,CaCl20.5,吐温80 0.8%。通过正交试验确定了产酶最佳初始pH为6.2,装样量为35 mL/250 mL,接种量为1%。采用优化后的工艺,在37℃200 r/min培养过夜,经乳糖诱导6 h后,最高酶活可达到830.7 U/mL,是初始产酶条件的3.4倍。结论该半合成培养基在重组大肠埃希菌产β-葡聚糖酶方面具有很大优势。     

灵芝液体发酵条件的优化研究

通过单因素和正交试验,优化灵芝5760深层培养的营养需求与环境条件对灵芝菌丝体生物量及次生代谢产物发酵液多糖的作用。结果表明,适宜灵芝液体菌种培养和液体发酵的培养基配方为麦麸粉5%,黄豆饼粉3%,KH2PO40.10%,MgSO40.09%;适宜的环境条件为初始pH5.5,装液量32%,生物量最大时为第8～9d;适宜接种的种龄为6d,接种量为10%;发酵周期6d,搅拌转速150r/min,消沫剂添加量可为0.20%。从硒对灵芝5760菌丝体生长及深层发酵生物量的影响,灵芝5760富硒培养适宜浓度为100μg/mL;从加硒时间对生物量的作用,在菌龄适宜时期加入即第1d。     

甘蔗纤维固定灵芝菌丝及其在液体发酵中的应用

以甘蔗纤维作为灵芝菌丝固定载体,通过扫描电子显微镜观察确定载体固定时间,通过液体发酵灵芝菌丝球大小形态、生物量、胞外多糖和胞外三萜含量确定载体形状、大小与数量。结果表明,灵芝菌丝在载体上固定时间为7d,载体为1.5cm×1.5cm（直径×高度）的圆柱体小块（Y1.5）,接种数量6块,可连续稳定发酵7代。以甘蔗纤维固定发酵制备灵芝液体发酵种子,发酵后菌丝球大小均一,生物量、胞外多糖含量和三萜含量分别提高78%、84%和60%。     

重组大肠杆菌发酵生产β1-3,1-4-葡聚糖酶培养基优化研究

通过对重组E.coliJM109发酵生产β1-3,1-4-葡聚糖酶条件的研究,发现培养基中氮源含量是影响β-葡聚糖酶产量的主要因素。优化后的培养基组成为:酵母粉12 g/L,甘油6 g/L、NaCl 10 g/L,NaNO37.21g/L,KH2PO42.4 g/L,K2HPO412.5 g/L。优化条件下,发酵30h,β-葡聚糖酶活力达到297.71 U/mL,约为初始时的14.3倍。     

灵芝液体深层发酵工艺研究初报

灵芝液体深层发酵工艺研究初报王淑华，孙翠焕，朱万琴，王恒新，冯健（辽宁省微生物研究所，朝阳１２２０００）灵芝｛ＧａｎｏｄｅｒｍａＣａｐｏｎｓ（Ｌｈｙｄ）Ｔｅｕｇｊ是祖国中医药学宝库中占有重要地位的真菌类药物。自古以来被视为“扶正固本、滋补强身”的珍品...     

灵芝深层发酵优良菌株的筛选

灵芝种类多,种间与品种间的不同均可能引起有效成分在产量表达上的差异,为了能筛选适宜深层发酵法生产的灵芝菌株,以8个灵芝菌株为研究对象,比较不同菌株在固体培养基上的菌丝体及液体发酵的菌球萌发菌丝生长速度、液体发酵产物、子实体多糖等指标。结果表明:8个菌株菌丝体生长速度有一定差异,以灵芝G9、红芝早萌发且生长速度快,甜芝、紫芝、灵芝G8、血芝其次,灵芝5760、黑芝最慢。8个菌株深层发酵产物由于生物学特性不同而有差别,同时菌株菌丝体生物量与次生代谢产物多糖之间无必然的联系,甜芝菌丝体生物量最大但自溶速度最快,灵芝5760菌球细小,速度最慢,血芝次生代谢产物多糖最高。菌丝体多糖与子实体多糖比较,各个菌株的菌丝体多糖含量均高于子实体多糖含量。提取多糖工艺以超声波辅助破壁处理后,再以热水浸提法提取多糖的得率明显提高,紫芝、黑芝提高了2倍以上。     

枯草芽孢杆菌产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的响应面优化

【目的】采用响应面法(RSM)优化枯草芽孢杆菌5 L发酵罐产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的发酵条件。【方法】利用Box-Behnken设计和方差分析。【结果】获得最佳发酵条件为:转速、通气量和培养基pH分别为500 r/min、1.05 vvm和5.08,发酵时间仅为22 h产β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力达2 294.4 U/mL。【结论】实验结果表明响应面法优化5 L发酵罐发酵产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的条件合理可行。     

灵芝液体发酵条件的研究

本文研究了某些因素对灵芝液体发酵的影响。4天菌龄的液体菌种发酵效果最好;300毫升三角瓶以装入60毫升培养液发酵较合适;蔗糖、花生饼粉分别为灵芝液体发酵的理想碳、氮源;液体发酵培养基最佳配方为:蔗糖4％、花生饼粉3％、硫酸铵0.15％、磷酸二氢钾0.15％,可得灵芝菌丝体百分干重为0.83,每100毫升发酵液得粗多糖0.3克。     

产灵芝胞外多糖培养基的优化及发酵指标变化

经单因素和正交试验优化,灵芝胞外多糖最佳发酵培养基各成分质量分数为:麦芽糖2%,黄豆粉1%,FeSO4·7H2O0.02%,KH2PO40.1%,土豆汁体积分数30%,pH自然,产量可达到86.36g·L-1(湿重)。灵芝胞外多糖产量受发酵过程各因素的影响,发酵过程中pH、总糖、还原糖和氨基氮有一定的相关性。灵芝多糖整个发酵过程需要144h左右,第6d达到发酵终点。     

虎乳灵芝液体发酵培养研究

目的:建立虎乳灵芝菌丝液体发酵培养方法。方法:采用改变培养基的pH和选择不同的碳源及氮源,通过比较虎乳灵芝菌丝的低温冷冻干燥重量,分别研究菌丝生长的最适培养基。结果:虎乳灵芝菌丝最适生长的液体培养基pH 6~7(中性微偏弱酸);菌丝生长的最好的液体培养基中的碳源为葡萄糖,氮源为酵母粉。结论:葡萄糖 酵母粉液体培养基可以作为虎乳灵芝菌丝大量发酵培养的培养基。     

哈茨木霉产β-1,3-葡聚糖内切酶的发酵工艺条件研究

对哈茨木霉(Trichoderma harzianum GIM 3.442)产β-1,3-葡聚糖内切酶的液体发酵条件进行了单因素优化实验,确定了最佳培养基成分和培养条件,在此基础上通过正交试验设计对复合碳源(葡萄糖、茯苓多糖)、胰蛋白胨、Na NO3和磷酸盐进行了L9(34)试验,研究了4种因素对哈茨木霉产酶的影响,确定了最佳培养条件:葡萄糖42.0 g/L,茯苓多糖18.0 g/L,胰蛋白胨15.0 g/L,Na NO35.0 g/L,初始p H 6.0,接种量8%,28℃,110 r/min培养6 d。优化后总酶活Etotal和β-1,3-葡聚糖内切酶Eendo活力达到了471.6 U/m L和327.4 U/m L,比优化前分别提高了7.3倍和23倍,且内切酶占总酶活的比例Eendo/Etotal由0.24增加到0.71,效果显著。     

玉米水解糖液体培养灵芝发酵条件的优化

目的：优化液体培养灵芝的发酵条件,提高多糖产量。方法：采用玉米水解糖为主要成分的培养基,通过单因素和正交实验,对赤芝G22菌株液体培养过程中影响多糖产量的发酵温度、摇床转速等工艺条件进行了研究。结果：经极差分析和方差分析确定了多糖高产的最佳发酵条件为：发酵温度27℃、摇床转速170r/min、培养基初始pH值6.5、发酵时间144 h。结论：通过优化液体发酵条件,可显著提高灵芝多糖的产量。在最佳发酵条件下液体培养G22菌株,灵芝总多糖产量由1.851g/L提高到2.439g/L,提高了31.0%。