虎物种特异性鉴定的 PCR 方法研究

为了建立可对虎DNA 进行特异性检测的PCR 方法, 应用在野外调查中获得的虎疑似样品和保护执法工作中难以检查辨认的虎产品进行物种鉴定, 从Genbank 数据库下载5 个虎亚种及其它6 种猫科动物和6 种鹿科动物的mtDNA 细胞色素b 基因序列, 并用Wdnasis (V2.5) 软件对上述不同动物的该基因碱基序列进行比较。在此基础上, 综合考虑了设计引物的基本原则, 选择了虎与其它动物碱基序列上差异位点较多的两个片段, 设计出PCR 引物(引物1、2) 。用该对引物分别对从东北虎、华南虎及8 种猫科动物和6 种非猫科动物的肌肉、脏器组织、皮或毛发中提取的DNA 进行PCR (聚合酶链反应) 扩增。结果表明, 所设计的引物对虎DNA 具有特异性,从而达到了对该物种进行特异性检测鉴定的目的。     

2种块菌的物种分子鉴定与系统地位分析

以采自内蒙古贺兰山地区的2种块菌为实验材料,分别运用形态学和分子生物学方法进行物种鉴定,并通过与GenBank数据库信息比对,利用Mega5.1软件构建系统进化树,分析其进化关系并确定2种块菌的进化地位。结果表明:两菌株子囊果都为地下生;其中,菌株order-a为灰黄色,近球形到不规则形,较硬,表面被覆微绒毛;菌株tuber-b呈黄褐色,质地均匀,表面有疣状物,顶端呈凹陷状,全株带有干果般特殊的香气。经分子生物学方法分析认为菌株order-a为块菌属的一种,tuber-b为冬块菌(Tuber brumale),并初步确定为内蒙古新记录种。     

DNA条形码：物种分类和鉴定技术

当前,一项称为“生命的条形码”计划正在欧美等国展开,其目的是实现对地球上现存的约1000万物种进行快速和准确的鉴定。DNA条形码是一种利用短的DNA序列对物种进行鉴定的技术。对DNA条形码的概念和原理进行了介绍,举例说明了其在物种分类、遗传多样性及物种鉴定研究中广泛的利用价值,阐述了当前该领域的研究现状,对未来的发展方向进行了展望。     

居群内连续型变异的特点及其在物种鉴定中的运用

本文重点讨论了居群内连续型变异,依据其钟型分布的特点,得出了一个有实用性的推论,生活在同一地区、同一环境中的相似个体群如果所有数量性都呈钟型分布,则应认为这个个体群为一个居群,而不考察特定个体间的差异是多么明显,最后,以一实例对是述推论作了系统的说明,其间还尝试地运用极大似然法,估算了居群中具有一定变异量个体的出现频率。     

冬虫夏草的研究进展

冬虫夏草是著名的传统中药,具有多种药用功效。综述了近几年国内外冬虫夏草在无性型的确证、液体发酵、活性成分分离分析、药理学等方面的研究进展。     

一头妊娠小须鲸的物种鉴定及外部形态测量

A dead whale was found by local fishermen on the coast of Zhangzi Island, Changhai County, Dalian, Liaoning on April 16, 2019. According to the following information (1) discovery location, (2) prominent ridges on head, 256 pairs of white baleen in the mouth and the white transverse band on the fin limb, (3) characteristics of Cytochrome b (Cyt b) gene sequence, the whale was identified as the North Pacific minke whale (Balaenoptera acutorostrata acutorostrata). It was found that the whale was in pregnancy. The results showed that the body length of minke whale was 640.0 cm and the body weight was 3350.0 kg. The fetus was a 7-8 months old male, with its body length 123.0 cm and body weight 26.3 kg. The body length of dead minke whale was less than the minimum value of the previous recorded pregnant minke whale. Our study is to record the morphological characteristics of the dead minke whale samples and enrich the basic biological data of large cetaceans in China.     

物种分布模型在大型真菌红色名录评估及保护中的应用: 以冬虫夏草为例

我国大型真菌资源丰富, 由于受气候变化和人类活动等的影响, 近年来很多物种受到不同程度的威胁, 亟待保护。红色名录评估是物种保护的第一步, 为有效保护我国大型真菌多样性, 2016年生态环境部和中国科学院联合启动中国大型真菌红色名录评估项目。合理的评估依赖于完善的物种地理分布、种群数量规模及其动态变化信息。大型真菌评估信息较少, 需要引入新的方法解决评估信息不足的问题。冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)是一种重要的食药用菌, 具有较高的经济价值, 受到全世界的广泛关注, 评估信息相对充足, 此次被评为易危物种。利用物种分布模型对冬虫夏草未来分布区变化的预测在评估过程中发挥了重要作用。为了将物种分布模型分析方法引入大型真菌的受威胁等级评估, 本文以此前我们利用物种分布模型预测冬虫夏草的潜在分布区及其对气候变化响应的研究为例, 介绍了应用物种分布模型预测大型真菌的潜在分布区、未来气候变化情景下分布区变化趋势的方法和流程, 以及在应用中可能存在的问题和解决方案。通过本文的分析, 我们认为物种分布模型在大型真菌的红色名录评估和保护中具有重要的应用潜力, 值得推广应用。     

DNA技术在海洋食品物种鉴定中的应用

随着分子生物学技术的发展, 海洋食品物种鉴定方法由原来的蛋白质水平深入到了DNA水平。目前应用于海洋食品物种鉴定的DNA技术主要是FINS(Forensically informative nucleotide sequencing)、PCR-RFLP和物种特异性PCR标记技术等, 能够实现对新鲜、冰冻、腌制或灌装食品物种进行鉴定, 而对混合样本的鉴定及量化分析是尚待解决的一个问题。基因数据库对物种鉴定的影响也越来越大, 是海洋加工食品物种鉴定可利用的另一种重要信息资源。文章综述了DNA技术在海洋食品物种鉴定中的应用研究进展, 并展望DNA技术在海洋食品检测中的发展趋势。     

冬虫夏草的质量和功能研究进展

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis是名贵的药用与食用菌,具有抗氧化、抗细菌、抗肿瘤及免疫调节等多种功能。冬虫夏草的正确鉴别、质量和功能评价有助于这一珍贵资源的研发。本文从如下方面综述冬虫夏草在质量和功能方面的研究进展:1)性状特征和真假鉴别;2)主要成分;3)药效功能;4)质量评价。     

Advances in research of the artificial cultivation of Ophiocordyceps sinensis in China

Abstract

Ophiocordyceps sinensis (syn. Cordyceps sinensis), a traditional Chinese medicine called DongChongXiaCao (DCXC) in Chinese, is well known and has been used in Asia countries since the fifteenth century, and it contains some valuable medicinal component defined by modern pharmacological science. DCXC only appears at high altitudes on the Qinghai-Tibetan Plateau. Consequently, it is difficult to find and harvest. Because of its rarity and medicinal value, DCXC has always been one of the most expensive medicines known. As the price of DCXC has risen in recent years, thousands of migrants have entered into the various grasslands to search for them in season, which makes ecological environments of the grassland more fragile. In order to relieve the environmental pressures and protect this valuable resource, the artificial cultivation of DCXC involving two aspects of the genus Hepialus and the fungi of the host larvae should be employed and applied at the first available time point. In this article, the reproduction of moth larvae of the genus Hepialus is first described, which includes their ecological characteristics and the methods of artificial feeding. Second, the generation and isolation method of the fungi from DCXC are subsequently summarized, and then the mechanism of fungal spores to attack the moth larvae are restated. Finally, the basic model of artificial cultivation of DCXC is introduced; meanwhile, the potential application of modern biotechnology to the artificial cultivation is analyzed in prospect. This review article will not only expand people’s knowledge regarding the artificial cultivation of DCXC, but also hopefully provide an informative reference for the development of this valuable resource and the environmental protection of alpine meadows.     

青海省冬虫夏草资源特征分析

冬虫夏草作为青藏高原特有的生物资源,对生长环境有着极其特殊的要求.通过调查青海省冬虫夏草资源分布状况,选取玉树、果洛、黄南、海南等地区的冬虫夏草进行氨基酸、微量元素含量检测,以反映冬虫夏草资源特征.研究结果表明,青海省冬虫夏草含有丰富的氨基酸和微量元素,且冬虫夏草不同部位的氨基酸、微量元素含量有明显差别.将青海省冬虫夏草与其他产区的冬虫夏草氨基酸含量进行对比分析,青海省冬虫夏草氨基酸含量低于四川、云南产区的冬虫夏草,和西藏产区的冬虫夏草氨基酸含量基本一致.     

糖类对冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis芽生孢子产量及毒力的影响

冬虫夏草Chinese cordyceps是食药两用的传统名贵资源。其人工培养需要冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis的优质芽生孢子。为获得高产量及高感染力芽生孢子,本研究测定不同糖类培养基对冬虫夏草菌芽生孢子产量及毒力（对小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis幼虫的存活率、携菌率和僵虫率）的影响。两个冬虫夏草菌株于含6种糖（葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖）的液体培养基中分别培养30、45和60 d,计数芽生孢子产量并将收集的孢子注射感染两个品系的小金蝠蛾6龄幼虫,置于不同温度下观察幼虫的存活率、携菌率及僵虫率。结果显示：不同糖源培养基中芽生孢子的产量差异显著,其中含麦芽糖培养基中芽生孢子产量最高;注射菌株和幼虫品系对被注射幼虫的存活率无显著差异;不同糖源培养基获得的芽生孢子对蝠蛾幼虫的存活率无显著差异,对携菌率和僵虫率产生影响;以含麦芽糖为糖源的培养基、芽生孢子培养时间显著影响被注射幼虫的存活率与僵虫率,其中培养30 d的冬虫夏草菌所注射的幼虫的存活率、僵虫率显著高于60 d的;温度也显著影响被注射幼虫的存活率、僵虫率,10℃的幼虫存活率和僵虫率显著高于14℃、18℃的。研究结果为培养优质冬虫夏草芽生孢子,提高被侵染蝙蝠蛾幼虫僵虫率提供了参考。     

冬虫夏草产业化实践和思考

冬虫夏草产业化是众多企业及研究人员关注的热点。本论文基于人工繁育实践,结合相关报道,阐述冬虫夏草产业化现状及存在的问题,旨在展示冬虫夏草人工繁育研究成果,为实现冬虫夏草产业化发展提供思路和参考。     

蝙蝠蛾幼虫肠道中的冬虫夏草菌体研究

西藏林芝地区冬虫夏草天然产区野生虫草蝙蝠蛾幼虫的肠道液pH范围为9.69-10.99,体外在此pH下培养冬虫夏草菌长势较差。同时,在该pH的体外模拟中肠液中,虫菌体也会在极短的时间内消亡,而对自然侵染的蝙蝠蛾幼虫的血淋巴、消化道及其“反吐物”（肠液）进行切片和显微镜检却发现,蝙蝠蛾幼虫消化道、呕吐物中均存在与血淋巴中相同的冬虫夏草菌菌体形态,生存状态良好,正常增殖,表明蝙蝠蛾幼虫肠道的生理状态可以维系并支撑冬虫夏草菌菌体某种形态的存在与生长,并证实冬虫夏草菌由口器及消化道入侵蝙蝠蛾幼虫的可能性;肠道虫菌体与血淋巴虫菌体不一定同时存在,表明冬虫夏草菌对蝙蝠蛾幼虫的侵染可能同时存在表皮侵染和肠道侵染两种途径。本文为冬虫夏草菌对蝙蝠蛾幼虫的侵染途径研究提供更加多样化的信息支持。     

应用ISSR技术分析不同分离方法获得的冬虫夏草菌株的遗传多样性

从60个引物中筛选出7个扩增条带清晰且多态性好的ISSR引物,并摸索合适的PCR反应条件,用于40株冬虫夏草的无性型——中国被毛孢菌株的PCR反应,共得到62条带,其中多态性条带38条,多态性百分率仅为61.29%,遗传相似系数范围在0.78¹.00之间。非加权配对算术平均法(UPGMA)聚类分析的结果表明:40株中冬虫夏草无性型菌株并没有完全按照不同的分离方法聚为3个类型;单子囊孢子分离法获得的菌株,明显区别于其他菌株而单独聚为一类,其他菌株则混合聚类。     

冬虫夏草固态培养菌丝中纤溶酶的纯化和酶学性质

【背景】血栓性疾病发病率逐年递增,发病人群呈现低龄化趋势,严重地影响着人们的身心健康。因此研发高效、安全、特异性强的溶栓药物具有重要的意义,是血栓性疾病预防与治疗研究领域的热点。【目的】对冬虫夏草菌丝固态培养过程中产生的纤溶酶进行分离纯化,并对纯化的纤溶酶进行酶学性质分析。【方法】通过硫酸铵盐析、阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶过滤色谱分离纯化虫草纤溶酶。采用Bradford法测定样品中总蛋白质浓度,纤维蛋白平板法测定纤溶酶活性,Native-PAGE检测纯度,SDS-PAGE测定相对分子量。【结果】在固态培养中冬虫夏草菌丝可以产生至少两种纤溶酶,分别命名为OSP-1和OSP-2。纯化后OSP-1比活力达到4186.25U/mg,纯化倍数为41.69倍。OSP-1由两个亚基构成,相对分子量分别为27.60k D和23.83k D,是一种丝氨蛋白酶。酶学性质分析表明,该酶最适作用温度为40°C,最适pH为4.0。Cu2+可促进OSP-1酶活,而Zn2+会抑制酶活。除了具有较高的纤溶酶活性,OSP-1还可发挥激活纤维蛋白酶原的作用。在水解纤维蛋白原的过程中,该酶可依次降解γ、Aα、Bβ链。【结论】研究发现的OSP-1具有开发成新型溶栓药物的潜力。     

冬虫夏草产区土壤特征和微生物组成分析

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis是我国珍稀濒危药材,具有严格的分布区域,而特定的生态系统更是冬虫夏草资源生长条件苛刻的重要因素。本研究采集11个冬虫夏草主产区的土样,测定土壤理化性质与菌群结构及其对冬虫夏草产量的影响并对关键因子进行验证。结果表明：（1）各产区土壤N、P、K、pH、EC和H2O等参数差异不显著,土壤微生物群落中以酸杆菌门Acidobacteria（28.6%~36.5%）、变形菌门Proteobacteria（21.5%~32.2%）为主要优势菌门,且土壤氮元素含量与变形菌门和硝化菌门Nitrospirae的菌群丰度正相关（0.665和0.668）。（2）对影响虫草产量的关键因子拆分,己科河菌门Rokubacteria及酸杆菌门分别提供了0.2620和0.0986的贡献度。（3）通过对己科河菌门菌群功能分析,合成抗生素是其核心功能,功能表达丰度最高可达28%。（4）进一步对富含己科河菌门的土样中含有的病原菌鉴定,被孢霉属Mortierella链格孢属Alternaria等丰度分别降低了0.054和0.002,踏查样区（25 m×25 m）内虫草产量也可达到31根。综上,冬虫夏草产区之间的生境参数虽然具有相似性,但在富含己科河菌门的土壤中,病原菌种类及丰度呈现下降趋势,推测对虫草产出有重要贡献。