产L-白氨酸突变株的选育及发酵条件的研究

钝齿棒状杆菌(Corysebacterium crenatum) AS 1.542经亚硝基胍连续诱变处理,选育出产大量L-白氨酸的突变株AS 1.1004。该菌以生物素为必需生长因子,酪蛋白水解物对生长有促进作用。当培养基中含生物素5—50徽克／升时,L-白氨酸的积累随生物素含量增加而提高;葡萄糖和醋酸铵是大量产生L-白氨酸的最适碳源和氯源。在含葡萄糖1 0％,硫酸铵2％,醋酸铵2％,KH2PO40．1％．MgSO47H2O 0.04％,FeSO4 7H2O2毫克／升,MnSO4 4H2O2毫克／升,生物素50微克／升,硫胺素·HCl 300欹克／升,蛋白胨0.3％,酵母膏0.3％,CaCO,2％,pH7.0的培养基中,于旋转式摇床上,28℃培养4天,产L-白氨酸14毫克／毫升以上。用强酸性阳离子交换树脂(H+型)提取的产品,经红外吸收光谱,薄层色谱,比旋光度,元素分析和生物测定法检定,证明该产品系L．白氨酸。     

珊瑚色诺卡氏菌No．11降解丙烯腈活力的诱导形成

珊瑚色诺卡氏菌No. 11能利用丙烯腈、正一丁腈、二甲氨基丙腈以及乙酰胺和丙烯酰胺作为生长的碳源和氮源,而其它腈化物如乙腈、苯乙腩、β一β氧二丙腈和2一羟基丙腈只能作为菌生长的氮源。呼吸试验表明,在丙烯肮基顾中,经丙烯腈诱导的适应细胞的耗氧量比未适应细胞高6—7倍。适应细晦对丙烯酰胺或丙烯酸的耗氧虽也比未适应细胞高得多,推坝4这些化合物可能是丙烯脯代谢的中间产物。在其它脯化物中适应细胞的耗氧盈均低于丙烯鹪,由此可见,耗氧量的挝高是由于诱导的皇lli粜。适应细胞述可耐受商浓度的丙烯腈,当丙烯脯浓度高达20,00毫克／升时,耗氧量才有明显降低。     

降解硫氰酸和丙烯腈的一种新型混合细菌培养物

从腈纶废水生物粘膜中选育到能降解硫氰酸钠、丙烯腈、异丙醇和丙酮的新型混合细菌培养物。SAT13,其降解硫氰酸钠和丙烯腈的能力分别为1800mg／l和120 mg／l。该培养物由自养菌和异养菌组成,包括排硫杆菌(Thiobacillus thioparus)、中间硫杆菌(Thiobacillus interm-edius)、假单胞杆菌(Ptldomonas sp-)、节杆菌Arthrobacter sp和固氯菌(Az。Tobacter sp．)。这些细菌是净化腈纶废水中污染物的主要微生物,其中降解硫氰酸钠的主要细菌为排硫杆菌、中间硫杆菌和假单胞杆菌。降解丙烯腈的主要细菌是中间硫杆菌和节细菌。固氮菌对这两种污染物无降解作用。     

枯草芽孢杆菌突变体在合成培养基中的生长和肌苷合成的研究

用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产肌苷突变体24—36,在合成培养基巾探讨了核陵碱基等成份对肌苷积聚的影响,结果表明： 1．在所试验的7种碱基中,腺嘌呤对肌苷积聚影响最大,它的最适含量为200毫克／升,超过400毫克／升时肌苷积聚显著降低,但生长量达到最大值。 2．在腺嘌呤含丘为200毫克／升的培养基中加入适量尿嘧啶能促进菌帮本生长和肌侍积聚。 3．在腺嘌呤过量存在时,加入0．3％次黄嘌呤,肌苷积聚量可达最适腺螵呤时的合成量。 4．硫胺素营养缺陷型与其自发回复突变株积聚肌苷的能力无明显区别。 5．葡萄糖,(NH4)2SO45尿 素。L-谷氨酸对该菌生长和肌苷积聚均有一定影响,但以L-谷氨酸庄培养基中的含量影响最大。     

转化三硝基甲苯(a-TNT)的细菌及其应用

从长期被TNT粉尘及废水污染的土壤及生活污永中,分离筛选出93株好氧、厌氧及兼性好氧细菌。它们能将浓度为100一130毫克／升的TNT 90％以上转化。其中部分菌株能利用TNT作为生长的唯一碳源和氮源。我们对47株好氧及兼性好氧细菌进行了鉴定,分别属于柠檬杆菌属(Citrobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、肠杆菌属(Enterobacter)、克氏杆菌属(Klebsiella)、埃希氏杆菌属(Escherichia)和假单胞葭属(Pseudomon~)。各属选一代表菌株进行培养试验,考察它们转化TNT的生理条件及转化rNT的速度。从其中选出10株菌应用于TNT废水生化处理小型试验,取得较好效果。出水的TNT、BOD、COD等项指标均低于国家的排放标准。     

微生物转化丙烯腈生产丙烯酰胺I．菌种筛选及丙烯腈的微生物转化

从长期被睛化物污染的土壤及含腈废水中筛选到9 7株腈化物的同化菌,其中丁腈同化菌ZBB-21休眠细胞显示了很高的丙烯酰胺形成活性,经鉴定该菌为棒状杆菌(Corynebacrerium sp．)。研究了该菌的最适生长条件,及其休眠细胞的最适水合反应条件。在选定条件下,连续反应4.5h,反应液中积累丙烯酰胺达270g／L,并且未检测出丙烯酸的生成。丙烯腈转化率和丙烯酰胺形成选择性均接近100％。     

真养产碱杆菌聚羟基烷酸合成酶基因在欧文氏菌中的表达

将含有真养产碱杆菌(Alcaligenes eutrophus)合成聚羟基烷酸(PHA)基因(phaCA3)的质粒pTZl8U—PHB改造成为具有卡那霉素抗性的质粒pJMCl．并以电击法将pJMCl引入利用碳源广泛的胡罗卜软腐欧文氏茵(Erwinia carotovora)非致病菌系(Eccl3B)中,phaCAB可获得高效表达,膨大的转基因菌[Eccl3B(pJMCl)]细胞内几乎充满PHA颗粒。以蔗糖为碳源,初步在5L发酵罐中对转基因菌进行分批补料培养35h,菌体干重达28g／L,PHA占菌体干重的68％,具有生产潜力。将该菌合成的PHA提取纯化(纯度达99％)后,进行核磁共振分析,发现它只有单一的聚-β-羟基丁酸(PHB)组分。     

曲酸发酵的研究I．紫外线照射对黄曲霉产生曲酸的影响

用曲酸生产菌株黄曲霉 Aspergtllus flavus Link AS 3.2789为出发菌株进行紫外线诱变,从73个突变株中选出UI 1202,产曲酸达34.7毫克／毫升,比原始菌株提高50.8％。再以UI 1202进行第二次紫外线照射,从183个突变株中选出UII 1223,产曲酸达46．5毫克／毫升,比原始菌株提高78．8％。说明以紫外线为诱变剂,可以提高曲酸产量,并有积累诱变效果。将UII 1223在5000升发酵罐进行工业水平生产[实际装置4000升,搅拌速度160转／分,通风量每分钟1：0.5(体积：体积),温度31--33℃,发酵120小时左右],说明经二次紫外线诱变后的突变株性能比原始菌株有不少优越性,不仅提高了曲酸产量,而且性能稳定,不产毒素,降低了原料消耗,节约生产时间,已在生产中正式使用。     

福堤霉素产生菌小单孢菌sp．SIPI 4812原生质体的再生及其产量的提高

以福堤霉素产生菌——小单孢菌(Micromonospora)sp．SIPl4812为材料进行的研究表明,0．05％以上甘氨酸能抑制它的孢子发芽,适当培养的菌丝体在含有消色肽酶和溶菌酶的溶菌系统中可分离原生质体达10⁹／ml以上,该菌的原生质体在营养成分相对贫乏的高氏一号合成培养基(补充高渗剂)上再生,再生频率可达5％以上。再生菌落的产量分布较自然分离分散,其中一株达到原株生产能力的280％。     

炼油厂冷却器管道生物垢中铁细菌、硫细菌及硫酸盐还原菌的分离和鉴定

炼油厂污水经活性污泥处理及砂滤后,在冷却水系统中循环使用,冷却器管壁上有深棕色软垢形成。从垢中分离到11株铁细菌,经鉴定其中5株为锈色纤毛菌(Leplothrix ochracea);3株为浮游球衣细菌(Sphaerotilus natans);1株为大单鞘铁细菌(Sideromonas major);2株为有鞘丝状铁细菌,按其所具氧化铁及氧化锰的能力属于纤毛菌属,但其培养及形态特征与该属中已知种比较有较显著的差别。     

制备13β-乙基-3-甲氧基-8，14-开链-1，3，5(10)，9(11)-雌四烯-17β-醇-14-酮的微生物学研究

调查了10属酵母共104株形成一种光学活性的13β-乙基-3-甲氧基-8,14-开链-1,3,5(10),9(11)一雌四烯-17β-醇-14-酮的能力。发现酵母属酵母具较强的活性。啤酒酵母AS2.346是一株最好的菌,它能使底物几乎全部转化成产物。用这株菌研究了酵母细胞的培养和转化条件。在发酵过程中,观察到了“假结晶发酵”现象。在最适条件下,[葡萄糖4—4.5％和玉米浆2—2.5％,微酸性条件下培养的幼龄酵母细胞,转化pH中性,31屯并通气,乙醇浓度不高于3％(体积／体积)。]产物收率达85—90％。     

肌苷产生菌枯草杆菌7171-6-1菌株的选育

本文报告由枯草杆菌(Bacillus subtilis) No．101野生型为出发菌株,经过硫酸二乙酯(Dicthyl Sulfate,DES)、8-氮杂鸟嘌呤(8-Azagnaninc,8-AG)处理获得了一株腺嘌呤、硫胺素双重营养缺陷型突变株7171-6-1,在以葡萄糖为碳源的发酵培养基中,经60—72小时、30—32℃发酵,肌苷产量达11．65克／升。     

解脂假丝酵母8-2利用液体石蜡发酵生产工业用柠檬酸

果园土壤筛选出一株能利用液体石蜡生成柠檬酸的酵母菌,经鉴定为解脂假丝酵母(Candida lipolytica) 8—2。在该菌所产生总酸中约50％为柠檬酸。摇瓶及500升发酵罐试验证明,8—2菌在含10—12％液体石蜡、0.25—0.5％玉米浆及6％CaCO,作中和剂的培养基中,一般能生成7％以上的柠檬酸,最高可达10．72％。此种工艺可生产工业用柠檬酸。     

贫铀矿石细菌浸出的研究

从矿山的酸性矿水中分离出亚铁氧化细菌O-D菌株,属于氧化铁硫杆菌(Thiobaeillusferrooxidans)。靠细菌的生物氧化作用,可以浸出某些含黄铁矿的贫铀矿石中的铀(矿物主要为铀黑、铀钙云母及沥青铀矿)。品位为0．01 7％,粒度--30毫米的含铀矿石,用pH1.5的细菌-Fe,(SO4),溶液柱浸或堆积浸出,经40天后浸出率可达50％以上,而用-10毫米粒度的矿石,则浸出率达60％以上。与2％H2SO4溶液浸出相比较,在同样的时间内,可以达到同样的提取率,但细菌法酸耗只有0．08％,可节省90％以上的硫酸。浸出液中的铀和钼离子在一定浓度下抑制细菌的生长及亚铁的氧化。通过菌种选育,可以得到耐铀1000毫克／升,耐铝200毫克／升的菌株。     

色氨酸发酵的初步研究

我们从271株酵母菌中,选出一株可利用邻氨基苯甲酸为前体产生色氨酸的优良菌株——阿保利假丝酵母(Candida arborea AS 2．566)。对该菌的发酵条件进行了初步研究,发现通气量、邻氨基苯甲酸浓度等与色氨酸产量有密切关系。采用乙醇一邻氨基苯甲酸混合分次追加的方式,可提高色氨酸的产量。用30升发酵罐试验,色氨酸产量达5克／升以上。     

异源nifAC对根癌土壤杆菌nif基因表达的调节作用

三亲交配方法分别将载有褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)呈组成型表达的nifAC的质粒pCK5和肺炎克氏杆菌(Kldosiella pneumoniae)含有nifAc和nifA—ntrc基因的质粒pcK3．pSZ36和pSZ23-CA导入根癌土壤杆菌Agrobacterium tumefaciem)C58／pGV3850,所得转移接合子的生长速率和野生型相似。在10mmol／L,NH₄⁺浓度下,Western blotting测出A．Tumefaciens C58／pGV3850(pCK5)有固氮酶合成,乙炔还原法测定固氮酶活性恢复分别为73％．24％,11％和62％。这些结果表明,褐球固氨菌和肺炎克氏杆菌的固氮调节基因对土壤杆菌同氮基因表达有调节作用。其中．褐球固氮菌nifAc的调节功能最强(73％),其次是肺炎克氏杆菌nifA和nrrC的融合子(62％),肺炎克氏杆菌nifAc的调节功能较弱(24％。11％)。     

利用丝状绿藻处理含汞污水的试验

用刚毛藻科的丝状绿藻为材料,进行了藻类处理含汞(HgCl2)污水的试验。Hg 浓度为0．5,1．0,2．0,5．0和10．0毫克／升,鲜藻与污水的重量之比为1：100,4小时内,汞的去除率为70％。进行了藻类连续去汞能力的测定,10克鲜藻依次放入4个含汞污水的水样中(水量均为1升,Hg 浓度平均为3．61毫克／升),在每个水样停留时间为6小时,结果汞的去除率分别为76．8,78．4,61．8,53．1％,平均为67．5％,藻类含汞浓度以鲜重计算达到970ppm。、利用藻类四级串联处理含汞量为4．0毫克／升的污水,停留时间共计24小时,总去除率达94％。从试验结果看来,藻类对汞的去除,主要是借助于表面吸附与细胞积累作用,与藻类的光合作用无关。但是0．1—10毫克／升的汞,都明显地抑制藻类的光合放氧,这种抑制作用在藻类接触汞4小时以后表现出来。     

降解三硝基甲苯的酵母和类酵母菌的研究

从受三硝基甲苯（TNT）严重污染的土壤和废水中分离筛选到17株可降解TNT的酵母菌和白地霉。其中6株为克鲁斯假丝酵母（Candidakrusei）,4株为橡树假丝酵母（C.quercitrusa）,一株为无名假丝酵母（C.famata）,一株为伯杰汉逊酵母（Hansenulabeijerinckii）,一株为亚膜汉逊酵母（H.subpelliculosa）,4株为白地霉（Geotrichumcandidum）。对其中6株菌进行了降解TNT的条件实验,发现降解TNT的适宜pH为7,温度为37～40℃。在含75～80mg／LTNT的培养基中,40h内能降解TNT56～74mg／L,去除率达71％～93％。在培养基中加入0．01％～0．05％的葡萄糖作碳源,或加入0.01％～0．1％的酵母膏对6株菌降解TNT的能力略有促进作用。加入铵盐作为氮源则明显抑制这些菌对TNT的降解。     

棒状杆菌原生质体的形成、再生以及融合的初步探讨

Corynebacterium 属中的一些种是生产氨基酸的重要菌株。它们对蛋清I容菌酶和其他几种酶均不敏感。作者用0.4—0.8u／ml青霉素G处理对数期菌令菌体,可明显增加对蛋清溶菌酶的敏感性。继而用0.5—1.0mg／ml的蛋清溶菌酶,于37℃,12—15小时保温,渗透压敏感细胞可达99％以上。在丁二酸钠高渗完全培养平皿上,原生质体再生率可达20％。C. pekinenseAS 1.563与C. crenutum 82原生质体融合率为3×10-4 每对原生质体。融合菌株不稳定呈现出不同程度的分离现象。对融合菌株发酵产物——氨基酸进行了纸层析,70％的融合株同时产生两亲株所产的氨基酸,10％菌株不产生两亲株所产的氨基酸。通过光学显微镜和电镜技术,观察了原生质体的形成、再生和原生质体聚集现象。     

细菌浸出高硫锰矿及菱锰矿的试验

本报告用氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans)把硫酸亚铁氧化产生酸性硫酸高铁溶液。在Fcs+浓度25克／升,pH1．8,矿石粒度120目,矿浆浓度7％,浸矿温度60℃条件下搅拌浸出高硫锰矿及菱锰矿,2．5和4小时锰浸出率分别达82％及98％。硫锰矿石中除硅酸锰不能浸出外,矿石中可溶浸的锰矿物浸出了99．2％。硫酸高铁在程矿反应时全部水解为氧氧化铁沉淀,不能矬续循环使用。但以氢氧化铁吸收高硫锰矿焙烧脱硫时排出的含低浓度二氧化硫烟道废气,使还原为亚铁。亚铁液经加温等处理后,由新接种的细菌氧化再生成硫酸高铁,反髭浸矿,如此循环。