GRP94和CD8在宫颈病变组织中的表达及意义

目的：探讨葡萄糖调节蛋白94（glucose—regulated protein94,GRP94）和CD8在宫颈病变组织中的表达及与HPV感染的关系。方法：采用免疫组化S—P法检测32例原发宫颈癌、27例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia, CIN）及40例慢性宫颈炎组织中GRP94和CD8的表达及定位;采用western blot技术检测6例宫颈癌及6例正常宫颈组织中GRP94和CD8的表达。结果：①在宫颈癌、CIN2／3、CIN1及慢性宫颈炎组织中,GRP94的阳性表达率分别为87．5％、82．4％、40％和22．5％;CD8的阳性表达率分别为28．1％、64．7％、90％和97．5％;GRP94在宫颈癌和CIN2／3中的表达均显著高于慢性宫颈炎和CIN1组织（P均〈0．05）;CD8在宫颈癌组的表达显著低于慢性宫颈炎组、CIN1组及CIN2／3组（P均〈0．05）。②Western blot结果示GRP94在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织（P〈0．01）;CD8在宫颈癌组织中的表达显著低于正常宫颈组织（P〈0．01）。③GRP94的表达与宫颈癌分化程度、有无脉管侵袭有关（P〈0．05）,而与年龄、病理类型、临床分期及有无淋巴结转移无关（P〉0．05）;CD8的表达与有无脉管侵袭有关（P〈0．05）,而与年龄、病理类型、临床分期、分化程度及有无淋巴结转移无关（P〉0．05）。④宫颈病变组织中,GRP94的表达与HPV感染呈正相关（rs=0．377,P=0．000）;cD8的表达与HPV感染呈负相关（rs=-0．395,P=0．000）;GRP94与CD8的表达呈负相关（rs=-0．608,P=0．000）。结论：GRP94表达可能是宫颈CIN进展及宫颈癌预后判断的重要预测指标。     

c-fos和c-jun在宫颈癌、CIN及宫颈炎中的表达及意义

目的:检测c-fos蛋白和c-jun蛋白在宫颈癌、CIN以及宫颈炎组织中的表达,并探讨其意义.方法:免疫组织化学S-P法检测23例宫颈癌、11例CINⅢ、13例CINⅡ、20例CINⅠ、10例宫颈炎组织标本中c-fos和c-jun蛋白的表达.结果:①c-fos蛋白在宫颈癌、CINⅢ、CINⅡ和CINⅠ以及宫颈炎中的表达分别为82.6%(19/23)、65.2%(7/11)、46.2%(6/13)、35.0%(7/20)、0.0%(0/10);②c-jun蛋白在宫颈癌、CINⅢ、CINⅡ、CINⅠ以及宫颈炎中的阳性表达率分别为78.3%(18/23)、54.5%(6/11)、38.5%(5/13)、30.0%(6/20)、0.0%(0/10);③c-fos和c-jun在宫颈癌、宫颈癌前病变、宫颈炎中的表达均有显著差异(H=0.000,P＜0.05);经秩相关检验分析,c-fos和c-jun在宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌中的表达呈正相关(r=0.581,P=0.000).结论:c-fos和c-jun蛋白的表达可能与宫颈癌前病变、宫颈癌的发生密切相关,两者可能在宫颈癌的发生过程中起一定的协同作用.     

P21蛋白在不同级别宫颈组织中的表达及其与高危HPV感染相关性的研究

目的通过检测宫颈组织中p21waf基因表达与高危HPV感染的情况,研究P21蛋白与高危HPV感染在宫颈组织恶性转化过程中的作用及其相互关系。方法应用免疫组化检测P21蛋白及基因杂交捕获Ⅱ代技术(HC-Ⅱ)检测高危HPV在正常宫颈组、宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及宫颈癌组这4组中的表达情况。结果在正常宫颈组、宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、及宫颈癌组中P21的阳性表达率分别为11.8%、15.4%、39.1%和57.7%;高危HPV的阳性表达率分别为20%、23.5%、65.2%和88.5%,这两项指标在CIN、宫颈癌组有明显的升高趋势且与正常宫颈和宫颈炎两组相比差异具有显著性统计学意义(P<0.05);各级别宫颈组织中高危HPV阳性组的P21蛋白阳性率明显高于阴性组的P21蛋白阳性率。差异在统计学上具有显著性意义(P<0.05)。结论P21蛋白的表达和高危HPV感染与宫颈病变的恶化均有高度的相关性,其检出率和阳性表达率随着宫颈病变恶性程度的增加而升高。在CIN向宫颈癌恶性转化过程中,P21与高危HPV共同促进肿瘤的发生。     

宫颈癌中端粒酶的表达和高危型人乳头瘤病毒感染

目的:研究不同程度子宫颈病变中高危型人乳头瘤病毒HR-HPV感染和端粒酶活性的表达,以探讨两者在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的作用及相关性。方法:采用第二代杂交捕获技术检测宫颈脱落细胞HPV-DNA含量,并用免疫组织化学EnVision二步法检测宫颈组织标本中端粒酶的表达。结果:(1)端粒酶阳性表达率在对照组、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌组分别为10.00%、16.67%、40.00%、70.00%、95.00%,宫颈癌组高于CINⅢ,CINⅢ高于CINⅡ,CINⅡ高于CINⅠ,差异均有统计学意义(x2=4.329,P=0.037;x2=4.327,P=0.038;x2=4.022,P=0.045)。(2)随着宫颈病变级别的增加,高危型HPV的阳性率和病毒负荷量均增高。高危型HPV的阳性率在宫颈癌和CINⅢ组明显高于对照组、CINⅠ及CINⅡ(x2=29.501~7.414,P<0.01)。高危型HPV的病毒负荷量在对照组与其他4组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);CINⅠ组分别与CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)随着宫颈病变级别的增加,高危型HPV的阳性率和端粒酶阳性表达率依次递增,两者有明显的相关性(r=0.943,P<0.01)。结论:高危型HPV感染和端粒酶活性均与宫颈癌前病变及宫颈癌的发生发展密切相关,有望作为子宫颈癌前病变和宫颈癌筛查的监测指标。     

宫颈不同疾病患者合并HPV感染的 病原菌感染状况及免疫功能

目的调查分析宫颈不同疾病患者合并人乳头瘤病毒(HPV)感染的病原菌感染状况及免疫功能。方法选择2015年3月至2018年1月在我院就诊的96例宫颈不同疾病患者为研究组,其中宫颈炎组18例,宫颈上皮内瘤变组54例(CINⅠ组15例,CINⅡ组17例,CINⅢ组22例),宫颈癌组24例;并以同期在我院进行体检的80例健康女性为对照组,检测所有研究对象的HPV感染、阴道菌群情况和宫颈分泌物CD_4~+、CD_8~+细胞数。结果研究组HPV感染率明显高于对照组(P0.05);宫颈炎组、CIN组、宫颈癌组HPV感染率呈上升趋势,组间两两比较差异均有统计学意义(Ps0.05)。宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、宫颈癌组细菌性阴道病(BV)、解脲支原体(UU)和衣原体(CT)感染率呈上升趋势,宫颈癌组与宫颈炎组比较差异有统计学意义(P0.05);各组间人型支原体(MH)、滴虫和霉菌的感染率差异无统计学意义(P0.05)。宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、宫颈癌组CD_4~+T细胞表达阳性率呈下降趋势,宫颈癌组与宫颈炎组、CINⅠ组比较差异有统计学意义(P0.05),CINⅢ组与宫颈炎组比较差异有统计学意义(P0.05);CD_8~+T细胞表达阳性率呈上升趋势,组间比较差异无统计学意义(P0.05);CD_4~+/CD_8~+1患者所占比例呈上升趋势,宫颈癌组、CINⅢ组、CINⅡ组与宫颈炎组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 HPV感染、病原菌感染及免疫功能下降与宫颈病变发生发展密切相关,临床中应给予足够重视并及时进行有效干预。     

高危型HPV 感染对宫颈病变组织IFN-r、IL-10表达的影响

目的：探讨高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染对宫颈病变组织干扰素-r(IFN-r)、白细胞介素-10(IL-10)的影响。方法：收集我 院2013 年1 月到2015 年1 月妇科门诊行宫颈活检患者150 例,根据病理检查结果,将患者分为观察组（宫颈癌33 例、CINⅠ期 26 例、CINⅡ期28 例、CINⅢ期23 例）110 例,对照组（慢性宫颈炎患者）40 例。提取两组患者宫颈组织标本,检测观察组 HPV-DNA、HPV 分型,及两组IFN-r、IL-10 蛋白及mRNA 表达,分析高危型HPV感染与宫颈病变组织IFN-r、IL-10 表达的关系。 结果：观察组HPV-DNA阳性87 例（79.1%）,其中HPV16 型47 例（42.7%）、HPV18 型20 例（18.2%）感染率最高;且HPV16、18 感 染率在CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期以及宫颈癌组中的感染率差异均有统计学意义（P<0.05）,Spearman相关性分析显示,HPV16、 18 与宫颈病变程度均呈现正相关关系（r=0.896,0.786;均P<0.05）。IFN-r、IL-10 表达水平在CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期、宫颈 癌、对照组表达水平差异均具有统计学意义（P<0.05）,Spearman 相关性分析显示,IFN-r与宫颈病变程度呈现负相关关系（r=-0. 567,P<0.05）,IL-10 呈现正相关关系（r=0.678,P<0.05）。且HPV16、HPV18 感染率与IFN-r表达呈现负相关关系（rHPV16/18=-0. 678,-0.675,均P<0.05）,与IL-10 呈现正相关关系（rHPV16/18=0.582,0.778,均P<0.05）。结论：IFN-r表达随着宫颈病变加重或者 HPV16、HPV18 感染率升高逐渐降低,IL-10 则逐渐升高。     

高危型HPV感染对宫颈病变组织IFN-γ、IL-10表达的影响

目的:探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染对宫颈病变组织干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)的影响。方法:收集我院2013年1月到2015年1月妇科门诊行宫颈活检患者150例,根据病理检查结果,将患者分为观察组(宫颈癌33例、CINⅠ期26例、CINⅡ期28例、CINⅢ期23例)110例,对照组(慢性宫颈炎患者)40例。提取两组患者宫颈组织标本,检测观察组HPV-DNA、HPV分型,及两组IFN-γ、IL-10蛋白及m RNA表达,分析高危型HPV感染与宫颈病变组织IFN-γ、IL-10表达的关系。结果:观察组HPV-DNA阳性87例(79.1%),其中HPV16型47例(42.7%)、HPV18型20例(18.2%)感染率最高;且HPV16、18感染率在CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期以及宫颈癌组中的感染率差异均有统计学意义(P0.05),Spearman相关性分析显示,HPV16、18与宫颈病变程度均呈现正相关关系(r=0.896,0.786;均P0.05)。IFN-γ、IL-10表达水平在CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期、宫颈癌、对照组表达水平差异均具有统计学意义(P0.05),Spearman相关性分析显示,IFN-γ与宫颈病变程度呈现负相关关系(r=-0.567,P0.05),IL-10呈现正相关关系(r=0.678,P0.05)。且HPV16、HPV18感染率与IFN-γ表达呈现负相关关系(r HPV16/18=-0.678,-0.675,均P0.05),与IL-10呈现正相关关系(r HPV16/18=0.582,0.778,均P0.05)。结论:IFN-γ表达随着宫颈病变加重或者HPV16、HPV18感染率升高逐渐降低,IL-10则逐渐升高。     

APOBEC3G在宫颈癌发生发展中的表达及意义

目的探讨载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotain B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide 3 protein,APOBEC3G)在维吾尔族女性患者宫颈癌(uterine cervical carcinoma,UCC)发生发展的各个阶段中的表达及意义。方法选择2015年1月—2017年12月在新疆维吾尔自治区人民医院妇科门诊和病区进行宫颈液基薄层细胞学检查和HC-Ⅱ高危型HPV检测联合筛查,并同时进行阴道镜活检和组织病理学诊断的维吾尔族女性患者190例,其中高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)阴性慢性宫颈炎41例、高危型HPV阳性慢性宫颈炎40例、UCC前病变(宫颈上皮内瘤变I~III级)41例、UCC 68例。提取宫颈组织中的RNA和蛋白质,并采用Real-Time PCR检测APOBEC3G mRNA转录水平,采用Western blot检测APOBEC3G蛋白表达水平。结果APOBEC3GmRNA在HPV阴性宫颈炎、HPV阳性宫颈炎、UCC前病变、UCC各组表达水平差异均有统计学意义(F=11.00,P=0.000 1);组间两两比较,UCC组表达量是HPV阴性宫颈炎组的1.70倍,HPV阳性宫颈炎组的1.33倍,差异均有统计学意义(P0.05);UCC前病变组表达量是HPV阴性宫颈炎组的3.00倍,HPV阳性性宫颈炎组的1.65倍,差异均有统计学意义(P0.05);APOBEC3G在HPV阴性宫颈炎、HPV阳性宫颈炎、UCC前病变、UCC各组蛋白表达水平差异均有统计学意义(F=213.15,P=0.000 1);组间两两比较,HPV阴性宫颈炎、HPV阳性宫颈炎、UCC前病变、UCC组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论 APOBEC3G在维吾尔族女性患者UCC发生发展各个阶段均有不同程度的表达,提示APOBEC3G在其UCC发展进程中发挥一定作用。     

HLA-Ⅰ表达与维吾尔族妇女宫颈癌前病变及HPV16感染的关系研究

目的:现察人白细胞相关抗原Ⅰ(human leukocyte antigen class Ⅰ, HLA-Ⅰ)表达与维吾尔族妇女宫颈癌前病变进程及高危型HPV16的关系.方法:收集维吾尔族妇女宫颈炎、宫颈内上皮瘤样病(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)和宫颈鳞癌患者的石蜡包埋组织标本共148例,提取组织DNA,应用PCR的方法检测HPV阳性及HPV16型别;同时采用免疫组织化学SP法检测HLA-Ⅰ蛋白表达水平.结果:(1)在维吾尔族妇女中HLA-Ⅰ抗原在宫颈炎、CIN Ⅰ-Ⅱ、CIN Ⅲ、SCC组中阳性表达逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.001).(2)HLA-Ⅰ的阳性表达下降趋势与宫颈癌临床分期、组织分化程度和淋巴结转移密切相关.(3)HPV在宫颈炎、CIN Ⅰ-Ⅱ、CIN Ⅲ、宫颈癌中的感染率分别为13%、46%、82%、95%,差异有统计学(P<0.001).(4)HPV16在宫颈炎、CIN Ⅰ-Ⅱ、CINⅢ、宫颈癌中的感染率分别为4%、30%、68%、85%,差异有统计学(P<0.001).(5)在HPV 16阳性标本中,存在HLA-Ⅰ表达缺失的占71%(58/82),HPV16感染与HLA-Ⅰ表达呈负相关(r=-0.625,P<0.001).结论:(1)HLA-Ⅰ表达缺陷可能是宫颈病变进展的重要标志,对宫颈癌的预测预警提供依据.(2)HPV16感染在宫颈病变的发展过程中起到了极大的促进作用,是一个很强的致癌因素.(3)HPV16感染与HLA-Ⅰ表达之间的关系对揭示宫颈癌发病机制提供了客观依据.     

MICA/B蛋白在不同宫颈病变组织中的表达及意义

目的:探讨主要组织相容性复合物I类相关蛋白A/B(MICA/B)在不同宫颈病变组织及宫颈细胞系中的表达及定位。方法:采用免疫组织化学SP法检测宫颈炎症组织、高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions, HSIL)及宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma, CSCC)组织中MICA/B蛋白的表达情况。采用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术结合的方法研究3种宫颈癌细胞系C33a(HPV-)、Siha(HPV16+)、Hela(HPV18+)及正常宫颈上皮细胞系H8中MICA/B的表达和定位。结果:MICA/B蛋白主要表达定位于细胞浆,部分细胞核,在宫颈鳞癌组织中阳性表达率(83.3%、81.8%)高于宫颈炎症组织(39.3%、44.0%),差异具有统计学意义(均有P0.001);MICA蛋白在HSIL组织的阳性表达率(81.8%)高于宫颈炎症组织(39.3%),差异具有统计学意义(P=0.002);与分化程度、临床分期、淋巴结转移等临床病理参数之间比较无统计学差异(P0.05)。结论:MICA蛋白随着宫颈组织病变的加重阳性表达率逐渐增高,MICB蛋白在宫颈癌组织的表达高于宫颈炎症组织。提示MICA/B蛋白可为宫颈癌的诊断及靶向治疗提供新方向。     

GRP78 的表达与非小细胞肺癌生物学特性及预后的关系

目的:探讨GRP78在非小细胞肺癌和癌旁组织中的表达情况,并研究其与生物学特征及临床预后的关系 方法:收集非小细胞肺癌术后切除标本88例,及其癌旁组织20例作为对照.采用免疫组织化学方法检测GRP78的表达.结果:GRP78在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达有统计学差异.GRP78的表达与非小细胞肺癌的临床分期、分化程度有关,而与患者性别、年龄和病理类型无关.非小细胞肺癌中GRP78高表达的患者生存时间短于GRP78低表达的患者.GRP78的表达情况是影响非小细胞肺癌患者手术预后的独立危险因素.结论:非小细胞肺癌患者的GRP78的表达可能与肿瘤细胞的发生及发展有关,GRP78可以作为一个预测非小细胞肺癌患者预后的分子标志物.     

Re-examination of CD91 function in GRP94 (glycoprotein 96) surface binding, uptake, and peptide cross-presentation

GRP94 (gp96)-peptide complexes can be internalized by APCs and their associated peptides cross-presented to yield activation of CD8(+) T cells. Investigations into the identity (or identities) of GRP94 surface receptors have yielded conflicting results, particularly with respect to CD91 (LRP1), which has been proposed to be essential for GRP94 recognition and uptake. To assess CD91 function in GRP94 surface binding and endocytosis, these parameters were examined in mouse embryonic fibroblast (MEF) cell lines whose expression of CD91 was either reduced via RNA interference or eliminated by genetic disruption of the CD91 locus. Reduction or loss of CD91 expression abrogated the binding and uptake of receptor-associated protein, an established CD91 ligand. Surface binding and uptake of an N-terminal domain of GRP94 (GRP94.NTD) was unaffected. GRP94.NTD surface binding was markedly suppressed after treatment of MEF cell lines with heparin, sodium chlorate, or heparinase II, demonstrating that heparin sulfate proteoglycans can function in GRP94.NTD surface binding. The role of CD91 in the cross-presentation of GRP94-associated peptides was examined in the DC2.4 dendritic cell line. In DC2.4 cells, which express CD91, GRP94.NTD-peptide cross-presentation was insensitive to the CD91 ligands receptor-associated protein or activated α(2)-macroglobulin and occurred primarily via a fluid-phase, rather than receptor-mediated, uptake pathway. These data clarify conflicting data on CD91 function in GRP94 surface binding, endocytosis, and peptide cross-presentation and identify a role for heparin sulfate proteoglycans in GRP94 surface binding.     

变异性分化抗原簇44（CD44v17）对宫颈癌的临床诊断意义

目的:探讨CD44v17对宫颈癌的临床诊断意义。方法:将CD44v17si RNA、CD44v17、生理盐水转染至传代后的人宫颈癌细胞。检测细胞转染后存活率;检测细胞凋亡率。在裸鼠左肩背部注入人宫颈癌细胞悬液,随机分为CD44v17组、CD44v17si RNA组、对照组。在CD44v17组、CD44v17si RNA组裸鼠瘤体内分别注入CD44v17病毒颗粒、CD44v17si RNA病毒颗粒。检测瘤体的质量与体积。选取疑有宫颈病变患者阴道镜下活检组织80例,正常宫颈组织15例、宫颈上皮内瘤变(CIN)I级组织l5例、CIN II级15例、CIN III级组织15例和宫颈癌组织20例。检测CD44v17在不同组织中的表达量。结果:CD44v17si RNA转染的宫颈癌细胞凋亡率(19.20±2.14%)高于CD44v17转染的宫颈癌细胞凋亡率(6.13±1.08%)(P0.05)。CD44v17组裸鼠瘤体质量(15.9±3.4)g高于对照组裸鼠瘤体质量(11.8±2.7)g(P0.05)。CD44v17在不同组织中的表达量,按正常宫颈、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈癌发展过程呈递增趋势(P0.05)。结论:CD44v17能抑制宫颈癌细胞凋亡,促进宫颈癌细胞的生长、增殖。通过降低CD44v17表达量可能是遏制CIN向宫颈癌发展的一个手段。     

信号转导与转录因子3和表皮生长因子受体在宫颈不同病变组织中的表达及其临床意义

目的:探讨信号转导与转录因子3(STAT3)与表皮生长因子受体(EGFR)在宫颈不同病变组织中的表达变化及其临床意义。方法:采用Western blot与免疫组化的方法检测100例上皮内瘤样病变(CIN)组织、60例宫颈癌组织及40例正常宫颈组织中STAT3与EGFR的表达;分析STAT3与EGFR的表达与宫颈癌组织病理特征的关系;对宫颈癌组织中STAT3与EGFR的表达的相关性进行分析。结果:宫颈癌组织以及CIN组织中STAT3、EGFR的表达量和阳性率显著高于正常宫颈组织(P0.05),且宫颈癌组织中STAT3、EGFR的表达量和阳性率高于CIN组织,差异有统计学意义(P0.05);STAT3与EGFR在宫颈癌组织中的染色强度较正常宫颈组织以及CIN组织显著增强;STAT3与EGFR的异常表达与宫颈癌患者的组织学分级、临床分期以及是否发生淋巴结转移有关(P0.05),而与年龄以及病理分型无关(P0.05);宫颈癌组织中STAT3和EGFR表达呈正相关(P0.05)。结论:STAT3与EGFR表达与CIN、宫颈癌的进展紧密相关,且与宫颈癌部分病理特征相关,二者有可能作为宫颈癌诊断及预后的参考指标。     

GRP94 生物学特点与肿瘤的关系的研究进展

葡萄糖调节蛋白94又叫做内质网蛋白99,是一种内质网分子伴侣蛋白,与HSP90有50%的同源性。GRP94蛋白可以和Ca2+结合具有蛋白伴侣特性,能协助新合成的多肽转位、折叠、寡聚体的组装、降解,抑制错误折叠蛋白的分泌;GRP94还具有抗原呈递的作用,可以作为肿瘤细胞的伴侣蛋白,参与肿瘤细胞的新陈代谢,保护肿瘤细胞免受有害因素的侵害。GRP94可能与人类多种肿瘤的发生有关,其表达的增高可能是肿瘤发生发展的一个重要因素。GRP94在肿瘤组织中高表达提示相关研究者,应用基因手段抑制GRP94的表达可能能够抑制肿瘤细胞的生长、侵袭和转移、增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性等,并且利用GRP94作为一种新的肿瘤治疗的靶分子或介质可能为肿瘤的基因治疗带来更广泛的应用前景。     

Glucose-regulated protein 94/glycoprotein 96 elicits bystander activation of CD4+ T cell Th1 cytokine production in vivo

Glucose-regulated protein 94 (GRP94/gp96), the endoplasmic reticulum heat shock protein 90 paralog, elicits both innate and adaptive immune responses. Regarding the former, GRP94/gp96 stimulates APC cytokine expression and dendritic cell maturation. The adaptive component of GRP94/gp96 function reflects a proposed peptide-binding activity and, consequently, a role for native GRP94/gp96-peptide complexes in cross-presentation. It is by this mechanism that tumor-derived GRP94/gp96 is thought to suppress tumor growth and metastasis. Recent data have demonstrated that GRP94/gp96-elicited innate immune responses can be sufficient to suppress tumor growth and metastasis. However, the immunological processes activated in response to tumor Ag-negative sources of GRP94/gp96 are currently unknown. We have examined the in vivo immunological response to nontumor sources of GRP94/gp96 and report that administration of syngeneic GRP94/gp96- or GRP94/gp96-N-terminal domain-secreting KBALB fibroblasts to BALB/c mice stimulates CD11b(+) and CD11c(+) APC function and promotes bystander activation of CD4(+) T cell Th1 cytokine production. Only modest activation of CD8(+) T cell or NK cell cytolytic function was observed. The GRP94/gp96-dependent induction of CD4(+) T cell cytokine production was markedly inhibited by carrageenan, indicating an essential role for APC in this response. These results identify the bystander activation of CD4(+) T lymphocytes as a previously unappreciated immunological consequence of GRP94/gp96 administration and demonstrate that GRP94/gp96-elicited alterations in the in vivo cytokine environment influence the development of CD4(+) T cell effector functions, independently of its proposed function as a peptide chaperone.     

Overexpression of GRP78 and GRP94 is involved in colorectal carcinogenesis

Glucose-related proteins (GRPs) are ubiquitously expressed in the endoplasmic reticulum and assist in protein folding and assembly, consequently considered to be molecular chaperones. GRP78 and GRP94 expression was induced by glucose starvation and up-regulated in samples taken from several different malignant tissues. To clarify the roles of both molecules in tumorigenesis and progression of colorectal carcinomas, immunohistochemistry (IHC) was performed on tissue microarrays containing colorectal carcinomas, adenomas and the non-neoplastic mucosa (NNM) using antibodies against GRP78 and GRP94. Their expression was correlated with the clinicopathological parameters of carcinomas. Both proteins were also studied in colorectal carcinoma cell lines (DLD-1, HCT-15, SW480 and WiDr) by IHC and Western blot. There was a gradually increased GRP78 expression from colorectal NNMs, carcinomas, to low-grade and high-grade adenomas (P<0.05), while up-regulated GRP94 expression from NNM, low-grade adenoma, high-grade adenoma, to carcinoma (P<0.05). The expression was similar in all the carcinoma cell lines. GRP78 expression was negatively correlated with lymphatic invasion or low GRP94 expression of the carcinomas (P<0.05), while there was no correlation of GRP94 expression with other parameters of carcinomas (P>0.05). Multivariate analysis showed that venous invasion, lymph node metastasis and UICC staging (P<0.05), but not age, sex, tumor size, differentiation, depth of invasion, lymphatic invasion, GRP78 and GRP94 expression (P>0.05), were independent prognostic factors for carcinomas. It is suggested that up-regulated expression of GRP78 and GRP94 could possibly be involved in the pathogenesis of colorectal carcinomas.     

Cutting edge: CD91-independent cross-presentation of GRP94(gp96)-associated peptides

GRP94(gp96) elicits CD8(+) T cell responses against its bound peptides, a process requiring access of its associated peptides into the MHC class I cross-presentation pathway of APCs. Entry into this pathway requires receptor-mediated endocytosis, and CD91 (low-density lipoprotein receptor-related protein) has been reported to be the receptor mediating GRP94 uptake into APC. However, a direct role for CD91 in chaperone-based peptide Ag re-presentation has not been demonstrated. We investigated the contribution of CD91 to GRP94 cell surface binding, internalization, and trafficking in APCs. Whereas a clear role for CD91 in alpha(2)-macroglobulin binding and uptake was readily obtained, the addition of excess CD91 ligand, activated alpha(2)-macroglobulin, or receptor-associated protein, an antagonist of all known CD91 ligands, did not affect GRP94 cell surface binding, receptor-mediated endocytosis, or peptide re-presentation. These data identify a CD91-independent, GRP94 internalization pathway that functions in peptide Ag re-presentation.