鼻咽癌与miRNAs

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC）是一种多基因遗传性疾病,好发生于我国华南、东南亚及部分非洲地区。近年来随着分子生物学及其技术的迅速发展,人们对鼻咽癌发生、发展及其生物学行为的研究已进入基因水平。microRNA（miRNA）是一类广泛存在于动植物体内的非编码小RNA,主要参与基因转录后水平调控。随着对miRNA研究的深入,发现肿瘤的细胞分化障碍、增殖失控、细胞永生化与miRNA密切相关。人类肿瘤组织与正常细胞组织间的miRNA表达水平和类型存在明显差异,提示miRNA可能是一类新的参与肿瘤发生的重要分子。本文就鼻咽癌与miRNA相关的研究进展作一综述。     

脂肪组织中的miRNAs研究进展

miRNA是近年来发现的一类长约22 nt的内源性非编码RNA,在动物中主要通过抑制靶mRNA翻译,在转录后水平调控基因表达。大量研究表明脂肪组织中的miRNAs参与了脂肪细胞分化、脂代谢等多种生物过程调控,其自身也受到转录因子、脂肪细胞因子和环境因子等调控,这些复杂的相互作用关系构成了脂肪组织中miRNA的调控网络,循环miRNA的发现为这个网络加入了新元素。对肥胖等代谢疾病的研究,应该从这个复杂的动态网络中寻找答案。文中综述了脂肪组织中miRNA的最新研究进展,以期为利用miRNA进行肥胖等相关代谢失调疾病的治疗提供新思路。     

生物信息学预测植物miRNAs的方法

MicroRNA又称miRNA,是一类广泛存在于动植物体内、大小为21~25nt左右的内源性非编码单链小分子RNA。在植物体中,miRNA主要负责调控转录后基因的表达,在机体发育、生长和应答胁迫方面发挥着重要的调节作用。近年来,miRNA已成为分子生物学领域的研究热点。本文介绍了几种发现和研究miRNA的方法,重点阐述了生物信息学预测miRNA方法的流程和策略,并对各过程中采用的方法及信息学软件的优劣性进行比较和分析,为预测miRNA提供新的思路。     

昆虫miRNAs功能研究进展

miRNA是一类长度在18～25个碱基的具有调控作用的RNA核酸小分子。在各种生物学过程的调控中均起着举足轻重的作用。近年来,随着miRNA研究技术的飞速发展,昆虫miRNA研究取得了许多重要成果。该文主要综述了miRNA在昆虫免疫、生殖、凋亡及神经发育等生物学过程中功能的研究进展,以期为相关研究提供参考。     

姜黄素通过调控miRNAs发挥抗癌作用的研究进展

姜黄素（curcumin）是近年来发现的一种具有多种生物学活性的中药单体,研究表明姜黄素能够杀伤多种肿瘤细胞,显示出良好的防癌和抗癌作用,美国国立卫生（nationalinstituteofhealth,N／H）已将姜黄素列为第三代化学预防药,相关的临床试验已经展开。微小RNA（micmRNA,miRNA）是细胞内高度保守的非编码RNA,参与了包括肿瘤在内的多个病理生理过程。最新研究表明姜黄素通过调控miRNA机制发挥抗癌作用,我们的研究亦证实姜黄素影响肺癌细胞特异性miRNA表达引起肿瘤细胞凋亡和逆转耐药。总结最新研究进展,本文就姜黄素在不同系统肿瘤细胞中通过调控特异性miRNA发挥抗癌作用的机制作一综述。     

拟南芥响应高钙的miRNAs的筛选与鉴定

喀斯特地区土壤中钙含量较高。土壤钙含量过高会抑制植物生长,进而影响农作物产量和质量。目前,对植物应答和耐受高钙胁迫的机理研究还不深入。miRNAs在植物对生物和非生物胁迫的响应中起重要调控作用。本文应用转录组测序,对高钙响应拟南芥根部miRNAs进行分析,筛选到受高钙胁迫显著影响的12个miRNAs,并对其靶基因进行了预测和分析。实时定量PCR分析证实,大部分差异表达miRNAs和其靶基因表达负相关。本研究为进一步揭示miRNAs在植物响应高钙胁迫过程中的调控作用奠定了基础。     

血清miRNAs作为食管鳞癌新的生物标志物

食管鳞癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。由于缺乏有效的早期诊断方法,大多数食管鳞癌患者在确诊时已到中晚期并预后不良。MicroRNAs(miRNAs)是一类可通过抑制其特异性靶基因表达从而调控食管鳞癌发生发展的非编码内源性小RNA。相比于传统的生物标志物(例如mRNA和蛋白质),miRNAs更加稳定并易于筛选及精确地定量分析,从而成为理想的新一代癌症早期诊断和预后评估的生物标志物。近来的研究结果显示,食管鳞癌病人血清中的一些miRNAs表达水平的变化与病情诊断及预后的结果显著相关。文章综述了食管鳞癌病人血清中miRNAs的变化规律,讨论了检测这些miRNAs的表达水平变化作为一种新的方法应用于食管鳞癌的早期诊断和预后评估的可能性。值得注意的是,不同的血清miRNAs的检测方法所产生的结果是不完全一致的,文章还对这些差异产生的原因进行了讨论。     

调节猪TNF-α表达的miRNAs鉴定

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是脂肪细胞的分泌产物之一,在脂肪中行使着复杂的调节功能,为了研究猪脂肪组织中TNF-α的表达受到哪些miRNA的调控,从猪脂肪组织基因组中获得猪TNF-α3'端非翻译区(UTR)序列,与荧光素酶质粒PGL3-control连接构建猪TNF-α的萤光素酶表达质粒PGL3-TNF-α3'UTR。生物信息学预测miR-19a,miR-124,miR-130a,miR-301,miR-506等miRNAs均靶向猪TNF-α,将这些miRNA分别与PGL3-TNF-α3'UTR质粒共转到细胞中,以乱序序列作为阴性对照(NC),检测miRNA对质粒荧光素酶活性的作用。结果发现miR-19a,miR-124和miR-130a均能够显著抑制萤光素酶的活性(P<0.01),为了验证这3个miRNA是否通过各自种子序列起调控作用,突变了PGL3-TNF-α3'UTR中这3个miRNA种子序列的结合位点,结果发现miRNAs对突变质粒中的荧光素酶均无明显抑制作用(P>0.05)。结果证明,miR-19a,miR-124和miR-130a与猪TNF-α均有直接的靶向关系并通过各自种子序列抑制TNF-α的表达。     

调节猪TNF-α表达的miRNAs鉴定

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是脂肪细胞的分泌产物之一,在脂肪中行使着复杂的调节功能,为了研究猪脂肪组织中TNF-α的表达受到哪些miRNA的调控,从猪脂肪组织基因组中获得猪TNF-α3'端非翻译区(UTR)序列,与荧光素酶质粒PGL3-control连接构建猪TNF-α的萤光素酶表达质粒PGL3-TNF-α3'UTR。生物信息学预测miR-19a,miR-124,miR-130a,miR-301,miR-506等miRNAs均靶向猪TNF-α,将这些miRNA分别与PGL3-TNF-α3'UTR质粒共转到细胞中,以乱序序列作为阴性对照(NC),检测miRNA对质粒荧光素酶活性的作用。结果发现miR-19a,miR-124和miR-130a均能够显著抑制萤光素酶的活性(P0.01),为了验证这3个miRNA是否通过各自种子序列起调控作用,突变了PGL3-TNF-α3'UTR中这3个miRNA种子序列的结合位点,结果发现miRNAs对突变质粒中的荧光素酶均无明显抑制作用(P0.05)。结果证明,miR-19a,miR-124和miR-130a与猪TNF-α均有直接的靶向关系并通过各自种子序列抑制TNF-α的表达。     

miRNAs芯片数据的聚类分析与羽扇豆醇抗癌途径预测

羽扇豆醇是一种植物天然提取物,具有高效低毒的抗癌活性,对于药物开发领域有很高价值。目前对其抗癌机制还不是十分明确。使用TaqMan MicroRNA Assay芯片技术,从羽扇豆醇处理的hela细胞中miRNA的差异表达入手,探索扇豆醇抗癌分子途径。运用聚类分析等统计学方法和targetscan,RNAfold等序列分析工具进行信号组分的预测筛选,再结合对NC-BI,Gene Ontology等大型生物信息数据库的检索,最终在生物信息学层面上,分析得到hela细胞中羽扇豆醇抗癌的分子调控途径,即以受体酪氨酸激酶ERBB4介导的,hsa-miR-23b,hsa-miR-200b等几种miRNA参与的分子通路。     

MiRNA与肾上腺皮质癌

miRNA是一类长度约22个核苷酸的非编码小分子RNA,具有调控基因表达的作用,参与多种生物学过程,包括早期发育、细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化等,与糖尿病、免疫或神经退行性疾病以及癌症有关。研究发现,miRNA与肾上腺皮质癌关系密切:首先,miRNA可影响肾上腺皮质癌细胞增殖、侵袭及转移;其次,miRNA可作为肾上腺皮质癌早期诊断的重要标志物;最后,miRNA还是判断肾上腺皮质癌疗效及预后的重要指标。本文就miRNA与肾上腺皮质癌发生发展的关系以及miRNA在预后判断和早期诊断中的应用做一综述。     

E-cadherin在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的：检测鼻咽癌组织中上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）的表达情况,探讨E-cad与肿瘤侵袭、转移的关系。方法：收集临床确诊的存档鼻咽低分化鳞癌石蜡标本40例,鼻炎标本20例。将每个标本的4长切片分别进行HE染色、免疫组化PV二步法及阴性对照。HE确认病理类型,结合临床资病例料进行TNM分期,根据PV二步法染色结果检测E-cadherin的表达,所得结果用SPSSl7．0进行统计学检验。结果：E-cadherin在鼻咽癌组织对比中呈不同程度的降低（P=0．002）,与性别、年龄无明显相关,与T分期（P=0．023）、淋巴结转移（P=0．001）、TNM分期（P=0．000）显著相关。结论：1：E-cadherin在鼻咽癌组和对照组的表达有显著的差别,可能参与了鼻咽癌的发生发展。2：E-cadherin的表达与肿瘤的淋巴结转移和病理分期有相关性,但与年龄和性别无相关性。E-cadherin的表达缺失是肿瘤远处转移的重要指标。3：E-cadherin表达水平可能作为肿瘤侵袭,预测鼻咽癌颈部淋巴结隐匿性转移的潜在肿瘤标志物。     

E-cadherin 在鼻咽癌组织中的表达及临床意义*

摘要目的：检测鼻咽癌组织中上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）的表达情况,探讨E-cad 与肿瘤侵袭、转移的关系。方法：收集临床 确诊的存档鼻咽低分化鳞癌石蜡标本40例,鼻炎标本20 例。将每个标本的4 长切片分别进行HE染色、免疫组化PV 二步法及 阴性对照。HE 确认病理类型,结合临床资病例料进行TNM分期,根据PV 二步法染色结果检测E-cadherin 的表达,所得结果用 SPSS17.0 进行统计学检验。结果：E-cadherin 在鼻咽癌组织对比中呈不同程度的降低（P=0.002）,与性别、年龄无明显相关,与T 分 期（P=0.023）、淋巴结转移（P=0.001）、TNM 分期（P=0.000）显著相关。结论：1：E-cadherin 在鼻咽癌组和对照组的表达有显著的差 别,可能参与了鼻咽癌的发生发展。2：E-cadherin 的表达与肿瘤的淋巴结转移和病理分期有相关性,但与年龄和性别无相关性。 E-cadherin 的表达缺失是肿瘤远处转移的重要指标。3：E-cadherin 表达水平可能作为肿瘤侵袭,预测鼻咽癌颈部淋巴结隐匿性转 移的潜在肿瘤标志物。     

植物 miRNA

植物RNA家族中最近发现和研究的一个新种类miRNA,它与动物体内的miRNA有相似点,但也有不同。它参与指导mRNA的剪切,影响转座子,目前在拟南芥中发现了19种miRNA,由Dicer酶和Argonaute蛋白作用下产生的,通过与目标序列的互补影响mRNA剪切和DNA甲基化,引起相关生理过程的发生。     

鼻咽癌原代培养细胞分泌性蛋白图谱的初步研究

目的:建立细胞分泌性蛋白的蛋白质组学研究方法,在此基础上初步建立鼻咽癌细胞分泌蛋白图谱。方法:通过组织块法进行鼻咽癌细胞原代培养,收集细胞上清,超滤法脱盐并浓缩上清蛋白质,双向凝胶电泳技术建立细胞分泌性蛋白图谱。结果:鼻咽癌细胞原代培养取得成功,并初步建立了鼻咽癌细胞分泌性蛋白的双向凝胶电泳图谱。结论:建立了细胞分泌性蛋白的蛋白质组学研究方法,开展了鼻咽癌细胞分泌组学研究,为阐述鼻咽癌癌变机制提供了依据,也为后续研究打下了坚实的实验基础。     

鼻息肉与鼻咽癌标本VEGF水平及微血管密度对比及其临床意义

目的:对比研究鼻咽癌和鼻息肉标本中VEGF表达强度及MVD差异,同时分析VEGF、MVD和鼻咽癌临床特征的相关性。方法:纳入我科就诊的鼻咽癌患者57例,鼻息肉患者50例。采用免疫组化SABC法检测癌组织、癌旁组织、及息肉组织中中VEGF蛋白的表达,及MVD强度。分析VEGF、MVD和鼻咽癌患者性别、临床分期、颈部淋巴结转移、远处转移、血清EBV-Ig A阳性、WHO病理分型相关性。统计分析随访结果,对可能影响鼻咽癌预后的因素进行Cox回归模型分析。结果:鼻咽癌组织、鼻咽癌旁组织、鼻息肉组织中VEGF表达、MVD强度具有明显差异(p0.05)。不同鼻咽癌临床分期、是否发生远处转移、不同WHO病理分型和VEGF表达、MVD强度具有明显差异(p0.05)。Cox回归方程显示,远处转移、病理分型、VEGF表达强度是影响鼻咽癌生存的独立危险因素(p0.05)。结论:鼻咽癌高表达VEGF,促进新生血管,形成高密度微小血管,和鼻咽癌远处转移密切相关,降低其生存率。     

miRNA 的生物合成过程

MicroRNA (miRNA) 是一类真核生物内源性的小分子单链 RNA ,通常为 18 ～ 25 nt 长,能够通过与靶 mRNA 特异性的碱基配对引起靶 mRNA 的降解或者抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控 . 近几年来,在动物细胞和植物组织中,上百种 miRNA 被陆续发现 . 这些小分子调控 RNA 是从 60 ～ 200 nt 的具有发夹状结构的前体中被切割出来而成熟的,在动物细胞中, miRNA 基因的转录初产物 (pri-miRMA) 很快被一种核糖核酸酶Ⅲ Drosha 加工成为 miRNA 前体 (pre-miRNA) ,然后由细胞核转运至细胞质中,经另一种核糖核酸酶Ⅲ Dicer 识别剪切为成熟 miRNA. 对这一过程进行了简要的综述,并且对植物 miRNA 的成熟过程也进行了探讨 . 对 miRNA 的生物合成过程的深入了解,将有助于研究这一类起重要调控作用的 RNA 是如何行使功能的,从而进一步研究其在生长发育及各种疾病中所起的重要作用 .     

交替放化疗对晚期鼻咽癌患者疗效与影响因素分析

目的:评估交替放化疗(CRT)对晚期鼻咽癌(NPC)患者的疗效与影响因素。方法:选取在我院耳鼻喉科治疗的102例鼻咽癌患者。交替使用放疗,化疗进行治疗。在102例患者中,83例接受顺铂(50 mg/m2/d,d1-2)和5-氟尿嘧啶(5-Fu;800 mg/m2/d,d1-5),而19例患者接受卡铂(20 mg/m2/d,d6)和5-FU。结果:72(70.6%)例患者完成全部3个化疗疗程。交替放化疗的总时间为92(82-102)天。中位随访时间54个月,5年无进展生存期(PFS)为70.5%。多因素分析显示,体重减轻和化疗疗程数对PFS有显著影响。结论:化疗与放疗交替治疗的NPC患者依从性好,适应性强,值得临床推广。