赫赛汀联合姜黄素对卵巢癌细胞系SKOV3的抑制作用

目的：探讨赫赛汀联合姜黄素对HER2阳性卵巢癌细胞系SKOV3增殖能力的影响。方法：体外培养至对数生长期的人卵巢癌细胞系SKOV3细胞分为对照组、赫赛汀治疗组、姜黄素治疗组以及赫赛汀联合黄素治疗组,利用四唑盐（MTT）比色法和平板集落形成试验比较各组细胞增殖能力,利用Annexin V—FITC／PI染色比较各纽细胞凋亡。结果：赫赛汀联合姜黄素治疗组SKOV3细胞活力明显低于对照组及单一药物处理纽,平板集落形成试验结果表明各组细胞集落形成率分别为83．4％、36．8％、59．2％和24．7％。赫赛汀联合姜黄素处理组SKOV3细胞集落形成能力显著低于另外3组（P〈0．01）,Annexin V-FITC／PI染色并用流式细胞仪分析表明各组SKOV3细胞早期凋亡率分别为1．3％、26．4％、9．3％和39．1％,赫赛汀联合姜黄素处理组细胞早期凋亡率显著低于其余3组（P〈0．01）。结论：赫赛汀联合姜黄素能够抑制卵巢癌细胞系SKOV3的增殖,这种抑制作用是通过促进肿瘤细胞凋亡实现的。     

双脱甲氧基姜黄素对SKOV3卵巢癌细胞抑制作用的体外实验研究

目的:研究双脱甲氧基姜黄素体外抑制SKOV3卵巢癌细胞抑制作用的体外实验研究。方法:(1)将不同浓度双脱甲氧基姜黄素(0、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用于人卵巢癌SKOV3细胞6、12、24h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测SKOV3细胞的增殖活性;(2)流式细胞仪观察双脱甲氧基对SKOV3卵巢癌细胞周期的作用,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:(1)双脱甲氧基姜黄素对SKOV3细胞具有增殖抑制作用,且具有浓度和时间依赖效应;(2)双脱甲氧基姜黄素能诱导SKOV3细胞G1期阻滞,通过抑制细胞生长周期,降低细胞增生速率抑制肿瘤细胞增殖;(3)双脱甲氧基姜黄素能下调SKOV3细胞PCNA蛋白表达,并呈一定的浓度依赖性。结论:双脱甲氧基姜黄素能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞的体外增殖,可能为临床治疗卵巢癌提供了一种新的方法。     

蝎毒多肽提取物对卵巢癌SKOV3 细胞HPA 与VEGF 抑制作用 的实验研究

目的:研究蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)对卵巢癌SKOV3细胞HPA与VEGF表达的影响,进一步探讨其抗血管生成的分子机制.方法:卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、PESV组,免疫组织化学方法检测各组HPA、VEGF的表达,western-blot方法检测各组HPA在蛋白水平的表达.结果:与对照组相比,PESV组HPA、VEGF表达明显降低(P＜0.05),进一步检测发现PESV组HPA在蛋白水平表达亦明显下调(P＜0.05).结论:PESV能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长,其机制可能与抑制HPA、VEGF的表达有关.     

药物治疗浓度的雌激素对卵巢癌3AO细胞生长的影响

在过去的20年里,人们对于雌激素在不同组织、器官中发挥不同功能的分子机制进行了深入的研究,并取得了非常快的进展。最近的研究表明,雌激素能够抑制包括卵巢癌在内的多种肿瘤细胞的生长。卵巢是女性雌激素的主要来源,多种卵巢细胞表达雌激素受体,其中包括90％以上的卵巢癌起源的卵巢表面上皮细胞。雌激素诱导卵巢癌细胞凋亡的研究非常有实验及临床价值,雌激素调控的凋亡相关的特异性基因的发现对于揭示卵巢癌的发生发展以及针对卵巢癌特异性治疗的研究将会提供巨大的帮助。以人卵巢癌3AO细胞为模型,探讨了药物治疗浓度的雌激素对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用以及其可能机制。首先用MTT检测方法观察了雌二醇及其受体拮抗剂ICI 182780对3AO细胞生长的影响。研究发现,高于0．1pmol／L浓度的雌二醇能够抑制3AO细胞的生长,其中5pmol／L浓度的雌二醇处理3AO细胞72h后,对3AO细胞的抑制率达到70％。雌激素受体的拮抗剂ICI 182780不但不能阻断雌激素的效应,它本身也能抑制3AO细胞的生长,并且与雌激素有协同效应,并且经流式细胞术证实雌激素及其受体拮抗剂引起的3AO细胞的死亡为凋亡。雌激素对生长的调控是细胞类型特异性的,其机制可能与细胞内雌激素受体不同亚型的表达有关。细胞内雌激素受体β亚型的表达利于细胞凋亡的发生,细胞内雌激素受体α亚型的表达则会保护细胞免于凋亡的发生。在对雌激素诱导的凋亡发生机制的探讨过程中,我们发现3AO细胞只表达雌激素受体β亚型,而不表达雌激素受体α亚型,并且与α亚型相比,β亚型的表达明显降低,这可以解释为何需要高浓度的雌激素才能够诱导3AO细胞凋亡。我们又观察了大分子BSA标记的雌激素对3AO细胞生长的影响,结果发现这种不能通过细胞膜的雌激素失去了对3AO细胞生长的抑制作用,从而排除了雌激素的膜效应。近来的研究表明,MAPK信号通路在调控细胞的生长过程中发挥了重要的作用,并且参与了雌激素调控细胞生长的过程。接下来我们观察了MAPK信号通路在雌激素诱导3AO细胞生长中的作用。研究发现,p38／MAPK激酶的抑制剂SB203580部分的阻断了雌激素的生长抑制效应,而JNK／MAPK激酶的抑制剂SP600125则能促进雌激素的效应,提示MAPK信号通路参与了雌激素的这种效应。     

AMPK在姜黄素诱导CaOV3人卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)系统在姜黄素诱导CaOV3人卵巢癌细胞凋亡中的作用及姜黄素对AMPK磷酸化水平及其信号通路的影响.方法:实验分为对照组、姜黄素单独作用组、compound C(AMPK抑制剂)预给药组,SB203580(p38抑制剂)预给药组,AMPK抑制剂单独作用组以及p38抑制剂单独作用组.Western blotting法检测AMPK、p38和p53的磷酸化水平,MTT法检测细胞活力.结果:与对照组相比,姜黄素作用组的AMPK和p38磷酸化水平增加(P＜0.05),与姜黄素单独作用组相比,SB203580预处理组的AMPK磷酸化水平下降(P＜0.05).姜黄素作用组的细胞活力低于对照组(P＜0.05),compound C和SB203580预处理组的细胞活力高于姜黄素单独作用组(P＜0.05).与对照组相比,姜黄素作用组的p53磷酸化水平(Ser 15)增加(P＜0.05),与姜黄素单独作用组相比,compound C(AMPK抑制剂)和SB203580预处理组的p53磷酸化水平(Ser 15)下降(P＜0.05).结论:姜黄素能激活CaOV3细胞的AMPK,而AMPK的激活依赖于p38.AMPK和p38调节p53的磷酸化,并介导姜黄素诱导的细胞凋亡.     

瘦素对卵巢癌细胞 SKOV3 增殖及凋亡的影响

目的:探讨瘦素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同浓度的瘦素(0、50、100、200 ng/m L)处理人卵巢癌SKOV3细胞48 h后,采用MTT法检细胞的生长;以血清饥饿诱导细胞凋亡,同时给予瘦素刺激,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡的变化;western blotting分析p21、cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平和ERK1/2通路的活化情况。结果:瘦素以剂量依赖性的方式促进人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,同时抑制血清饥饿诱导的细胞凋亡。瘦素处理可下调p21和上调cyclin D1的表达,抑制促凋亡分子Bax的表达和上调抗凋亡分子Bcl-2的表达。瘦素可诱导细胞中ERK1/2通路的活化,其抑制剂PD98059可明显抑制瘦素诱导的促细胞增殖和抗凋亡作用,同时伴随有cyclin D1、Bcl-2蛋白表达的下调和Bax的上调。结论:瘦素可能通过活化ERK1/2通路调节细胞有丝分裂进程,进而促进卵巢癌细胞的增殖;同时通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达抑制卵巢癌细胞的凋亡。     

姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

姜黄素是从姜科植物的根茎姜黄中提取的一种植物多酚,具有抗炎、抗氧化、抗凝、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等药理作用。本文综述了姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的分子生物学机制研究进展。     

lncRNA RPL34-AS1通过靶向调控miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的探究RPL34-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。 方法取对数生长期SKOV3细胞用无血清培养基同步化12 h,将pcDNA、pcDNA-RPL34-AS1、si-NC、si-RPL34-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-575转染至SKOV3细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-RPL34-AS1组、si-NC组、si-RPL34-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-575组;将pcDNA-RPL34-AS1与miR-NC、miR-575分别共转染至SKOV3细胞中,记为pcDNA-RPL34-AS1+miR-NC组、pcDNA-RPL34-AS1+miR-575组。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测临床组织标本及转染后各组细胞中RPL34-AS1和miR-575的表达水平;双荧光素酶报告实验检测RPL34-AS1和miR-575的靶向关系;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A （p21）、B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与癌旁组织相比,卵巢癌组织中RPL34-AS1表达水平降低（1.00±0.08比0.47±0.05）,miR-575表达水平升高（1.01±0.07比3.12±0.28）（P < 0.05）。转染si-RPL34-AS1后,细胞活性升高（48 h：0.68±0.06比0.55±0.05;72 h：0.99±0.08比0.71±0.06）,G1期细胞所占比例降低（13.42±1.38比32.15±2.11）,S期细胞所占比例升高（53.75±5.22比34.69±3.41）,细胞凋亡率降低（4.31±0.42比9.25±0.91）,CyclinD1、Bcl-2表达水平升高（0.92±0.08比0.71±0.07;0.86±0.07比0.61±0.06）,p21、Bax表达水平降低（0.13±0.02比0.29±0.03;0.19±0.02比0.31±0.03） （P均< 0.05）。RPL34-AS1靶向调控miR-575,过表达RPL34-AS1或抑制miR-575后可抑制细胞活性,阻滞细胞周期和促进细胞凋亡。miR-575过表达逆转了RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。 结论过表达RPL34-AS1可抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-575有关。     

beta-榄香烯对卵巢癌细胞SKOV3 增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯对卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,将β-榄香烯(浓度梯度为25,50,100,150,200μg/m L),单独作用于卵巢癌SKOV3细胞,加药24 h、48 h后用噻唑蓝(MTT法)法检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测加药24 h后对细胞凋亡的影响。结果:1MTT法结果显示β-榄香烯单独用药24 h、48 h后,与对照组相比,实验组对卵巢癌SKOV3细胞的抑制率均高于对照组(P<0.05),并且在一定程度上呈浓度和时间依赖性。2流式细胞术检测显示,β-榄香烯能够促进SKOV3细胞的凋亡。结论:β-榄香烯能够抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖,促进其凋亡。     

顺铂对卵巢癌SKOV3细胞水通道蛋白5表达的影响及调控

应用噻唑蓝法、蛋白质印迹和RT-PCR法研究顺铂对卵巢癌SKOV3细胞水通道蛋白5(AQP5)表达的影响及其调控.结果显示顺铂浓度增加,SKOV3细胞AQP5、胞浆和胞核NF-kB p65以及胞核IkBα表达均逐渐减少(P=0.001,0.000,0.000,0.000);10 μg/ml顺铂与SKOV3细胞温育6-12 h,AQP5、胞浆和胞核NF-kB p65以及胞浆IkBα表达均明显增加达峰值,24 h后急剧下降到低值,并维持至72 h后(P=0.000,0.000,0.000,0.000,0.000).随着核转录因子阻断剂PDTC浓度增加、作用时间延长,AQP5表达及mRNA量均逐渐减少(P=0.000,0.000);顺铂对细胞抑制率与AQP5呈负相关(r=-0.598;P=0.009),PDTC对细胞抑制率与AQP5和mRNA呈负相关(r=-0.983,-0.905;P=0.000,0.000).AQP5表达与NF-kB p65和IkBα呈正相关(r=0.894,0.857;P=0.000,0.000).提示AQP5与SKOV3细胞生长有关,顺铂下调AQP5表达,其过程可能受NF-kB调控,为AQP5成为卵巢癌治疗的靶目标提供了一定的理论基础.     

卵巢上皮性癌细胞系来源肿瘤干细胞的免疫特性研究

目的:探讨卵巢上皮性癌细胞系(SKOV3)来源肿瘤干细胞的免疫特性。方法:通过干细胞特异性标记物乙醛脱氢酶1ALDH1表达鉴定富集肿瘤干细胞(CSCs)的球状细胞(SDC)。将富集CSCs的SDC与相应的贴壁培养的普通卵巢癌细胞(MDC)进行比较。通过Transwell法(细胞侵袭试验)检测SDC和MDC对于T细胞增殖以及分泌功能的影响。RT-PCR检测SDC以及MDC免疫抑制基因表达情况。结果:以球体细胞形成方法获得的CSC富集SDC群比MDC表现出更高比例的ALDH1表达。将T细胞分别与SDC和MDC共培养,SDC组T细胞增殖率显著低于MDC组。MDC共培养的T细胞分泌IFN-γ、IL-2水平明显高于与SDC共培养的T细胞(P0.05)。SDC表达免疫抑制基因ArginaseⅡ、IDO、IL-8、TGF-β水平明显高于MDC,以ArginaseⅡ、IL-8的上调最为明显(P0.05)。结论:球体细胞形成试验是获得卵巢肿瘤干细胞的可靠方法。在卵巢上皮性癌细胞系(SKOV3)中,CSCs比普通肿瘤细胞表现出更强大的免疫抑制性,这可能是妨碍免疫治疗的免疫逃逸机制。     

靶向survivin基因的siRNA对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的影响

目的:研究靶向survivin基因的siRNA对胃癌细胞,survivin表达的影响,抑制survivin基因表达对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的影响。方法:通过脂质体将survivinsiRNA导入胃癌细胞株BGC-803,用Real-timePCR和Western-blotting检测转染后细胞内survivin基因表达水平,流式细胞仪和Hochest染色检测细胞凋亡的改变。结果:姜黄素可抑制BGC-803细胞的生长,其生长抑制率和药物浓度与作用时间呈依赖关系;姜黄素作用BGC-803细胞后,survivin蛋白和mRNA表达降低;通过转染survivinsiRNA抑制BGC-803细胞survivin基因的表达能促进姜黄素诱导BGC-803细胞凋亡的作用。结论:靶向抑制survivin基因表达后姜黄素诱导胃癌细胞BGC-803凋亡的作用增强。     

人OC-3-VGH卵巢癌细胞裸小鼠肿瘤模型的建立

目的建立人OC-3-VGH细胞株卵巢癌裸小鼠模型并观察该肿瘤生物学生长特性。方法OC-3-VGH细胞株复苏后加入10 mL RPMI-1640培养液,放入培养箱,传2～3代后,取细胞悬液,均以4×106个细胞,每只0.2 mL分别接种至BALB/c雌性裸小鼠皮下,2月后处死取材,观察肿瘤生长特性和转移情况。结果皮下接种一周后,裸鼠长出肿瘤,并随时间而增大,体积呈指数增长,第42天始,明显增大（P〈0.05）。组织学检查发现裸鼠皮下肿瘤细胞均细胞体积较大,细胞核大而染色深,核分裂相较多、异型性明显,接种2个月时,未发生其他组织转移。结论建立了新的卵巢癌动物模型,并初步研究了其生物学特性,为卵巢癌治疗方法的研究拓宽了道路。     

干扰LRP16基因表达对人卵巢癌耐药SKOV3/DDP细胞耐药性的影响及机制研究

目的:探究干扰人白血病相关蛋白16(LRP16)基因表达对人卵巢癌耐药SKOV3/DDP细胞耐药性的影响及其相关机制。方法:采用Real-time PCR和蛋白免疫印迹(WB)检测LRP16在敏感组(SKOV3细胞)、耐药组(SKOV3/DDP细胞)、LRP16干扰组(SKOV3/DDP细胞-稳定转染LRP16 shRNA质粒)和NC组(即阴性对照组,SKOV3/DDP细胞-稳定转染阴性对照质粒)细胞中的表达情况;MTT试验检测LRP16对SKOV3/DDP细胞耐药性的影响;彗星试验检测LRP16对顺铂(DDP)诱导DNA损伤的影响;流式细胞术(FCM)试验检测细胞凋亡变化;WB试验检测PTEN、p-Akt和NF-κB蛋白表达水平。结果:LRP16干扰组细胞的耐药指数(RI)值(3.19±0.21)显著低于耐药组细胞(6.84±0.37)(P0.05)。DDP(25μmol/L)处理24 h后,LRP16干扰组DNA损伤的细胞百分比、细胞凋亡百分比均显著低于耐药组和NC组(P均0.05),而耐药组和NC组比较差异无统计学意义(P0.05);LRP16干扰组细胞PTEN蛋白相对表达量高于耐药组和NC组(P均0.05),而p-Akt和NF-κB相对表达量低于耐药组和NC组(P均0.05)。结论:干扰LRP16基因表达可逆转卵巢癌耐药SKOV3/DDP细胞的耐药性,PTEN/Akt/NF-κB可能是其中的关键信号通路。     

小豆蔻明调控自噬抑制卵巢癌SKOV3 细胞增殖的研究

目的：卵巢癌为女性常见病,死亡率高,分子靶向治疗药物较少,研发高效低毒的靶向新药意义重大。细胞自噬（autophagy） 维持着细胞内稳态和生长,是抗癌药物作用的关键靶部位。本课题旨在明确小豆蔻明（Cardamonin,CAR）调控自噬对卵巢癌 SKOV3 细胞增殖的影响。方法：体外培养卵巢癌SKOV3 细胞,不同药物分组处理,荧光显微镜下观察单黄酰戊二胺（MDC）染色 后细胞自噬囊泡,Western Blot 法检测细胞自噬相关蛋白LC3的表达,四氮唑蓝（MTT）法观察SKOV3 细胞增殖情况,流式细胞 术检测SKOV3 细胞凋亡的变化。结果：自噬抑制剂3-MA 显著性降低SKOV3 细胞内MDC染色的荧光颗粒数目、LC3Ⅱ蛋白表 达,抑制细胞增殖;而CAR（高、中剂量）、雷帕霉素和AZD8055 与3-MA 联用后细胞内MDC荧光颗粒数目增多、LC3Ⅱ蛋白表达 增加、细胞增殖抑制率及凋亡率明显升高;且高剂量CAR（10-5mol·L-1）的作用比低剂量CAR（10-6mol·L-1）明显。结论：CAR能够 抑制SKOV3 细胞增殖,诱导细胞自噬,促进细胞凋亡。CAR有望成为卵巢癌药物治疗的先导化合物。本研究为进一步研发此类 化合物提供了实验依据及一定的理论基础。     

小豆蔻明调控自噬抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖的研究

目的：卵巢癌为女性常见病,死亡率高,分子靶向治疗药物较少,研发高效低毒的靶向新药意义重大。细胞自噬（autophagy）维持着细胞内稳态和生长,是抗癌药物作用的关键靶部位。本课题旨在明确小豆蔻明（Cardamonin,CAR）调控自噬对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。方法：体外培养卵巢癌SKOV3细胞,不同药物分组处理,荧光显微镜下观察单黄酰戊二胺（MDC）染色后细胞自噬囊泡,WesternBlot法检测细胞自噬相关蛋白LC3的表达,四氮唑蓝（MTT）法观察SKOV3细胞增殖情况,流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡的变化。结果：自噬抑制剂3-MA显著性降低SKOV3细胞内MDC染色的荧光颗粒数目、LC3II蛋白表达,抑制细胞增殖;而CAR（高、中剂量）、雷帕霉素和AZD8055与3-MA联用后细胞内MDC荧光颗粒数目增多、LC3II蛋白表达增加、细胞增殖抑制率及凋亡率明显升高;且高剂量CAR（10^-6mol·L^-1）的作用比低剂量CAR（10^-6mol·L^-1）明显。结论：CAR能够抑制SKOV3细胞增殖,诱导细胞自噬,促进细胞凋亡。CAR有望成为卵巢癌药物治疗的先导化合物。本研究为进一步研发此类化合物提供了实验依据及一定的理论基础。     

水蛭素联合阿霉素对人卵巢癌细胞株耐药性的实验观察

目的探讨水蛭素联合阿霉素对人卵巢癌细胞生长的影响。方法通过细胞培养后绘制生长曲线,了解联合用药对抑制癌细胞增殖及诱导凋亡的作用。结果水蛭素联合阿霉素具有杀伤人卵巢癌细胞的效果。结论水蛭素有可能作为临床抗癌和抑癌治疗的潜在辅助用药。