塔克拉玛干沙漠腹地胡杨林土壤细菌多样性分析

【目的】对塔克拉玛干沙漠腹地胡杨林土壤细菌多样性进行初步探索,为下一步从中筛选可用于生物饲料或生物肥料的微生物奠定基础。【方法】采用可培养方法,进行细菌的分离纯化。对各菌株进行革兰氏染色及淀粉酶、酯酶、纤维素酶和NaCl耐受浓度的测定,并提取各菌株基因组DNA,进行16SrRNA基因扩增、测序及系统进化树的绘制,分析其多样性。【结果】共分离得到27株菌,其中放线菌门(Actinobacteria)16株,变形菌门(Proteobacteria)4株,厚壁菌门(Firmicutes)6株,拟杆菌门(Bacteroidetes)1株。革兰氏染色结果表明,5株菌为革兰氏阴性,其余为革兰氏阳性;酶活测定结果表明,15株菌具有淀粉酶活性,9株菌具有酯酶活性,9株菌具有纤维素酶活性;NaCl耐受浓度测定结果显示,NaCl浓度为2%时所有菌株均能生长,5%时能生长的有22株,15%时能生长的有1株。【结论】塔克拉玛干沙漠腹地胡杨林土壤中存在较丰富的细菌类群,且具有一定的酶学活性和NaCl耐受性,具有进一步研究开发的价值。     

降胆固醇微生态制剂对大鼠高血脂的影响

应用从鱼体内自行分离的一株细菌,以高脂大白鼠为实验模型,研究投喂不同浓度的该活菌制剂(5×10     

柞蚕蛹抗菌肽D对大肠杆菌K_(12)D_(31)的作用

本文报道了不同浓度的柞蚕蛹抗菌肽D,对大肠杆菌K_(12)D_(31)的杀灭作用动力学。在LEG培养液中,抗菌从D的浓度在5微克/毫升时显效。浓度在10微克/毫升以上时,其杀菌速度大于细菌的增殖速度。固定抗菌肽浓度为10微克/毫升,细菌浓度在3×10~7个细菌/毫升,培养在磷酸钾盐缓冲液中,4小时后能全部杀灭。同样浓度细菌在LEG培养液中,4小时后细菌数下降到约为10~2个细菌/毫升,但不能全部杀灭。同时还提供了柞蚕蛹抗菌肽D和B对大肠杆菌K_(12)D_(31)作用不同时间的电镜照片。     

含铜抗菌不锈钢的抗菌性能研究

对铁素体和奥氏体2种含铜抗菌不锈钢的抗菌性能进行了考察.采用覆膜法检测抗菌率,用透射电镜观察与铁素体抗菌不锈钢作用后的大肠埃希菌细胞形态.2种抗菌不锈钢材料对供试的 17 株常见菌,除产气肠杆菌外均显示较强的抗菌性能,抗菌谱广;铁素体和奥氏体对1×107 cfu/mL及以下浓度的大肠埃希菌在 24 h内杀灭率达到99%;铁素体和奥氏体分别在作用 3 h和 9 h时可将1×107 cfu/mL的大肠埃希菌全部杀灭;打磨次数和环境温度的变化不影响2种抗菌不锈钢的杀菌率;透射电镜结果显示,与抗菌不锈钢作用后的大肠埃希菌菌体结构松散,细胞壁和细胞膜破裂,有内容物漏出.铁素体和奥氏体抗菌不锈钢均具优良的抗菌性能,抗菌谱广,与其作用后的细菌菌体破裂,有内容物溶出,最终致菌死亡.     

一株培菌白蚁后肠木聚糖降解细菌的分离与鉴定

【目的】从培菌白蚁——黄翅大白蚁肠道微生物菌群中分离能降解木聚糖的细菌。【方法】以木聚糖为唯一碳源,利用刚果红染色,根据透明圈大小进行筛选。通过显微形态,革兰氏染色及16S r RNA基因序列分析进行菌株鉴定。二硝基水杨酸(DNS)法测定细菌生长过程中木聚糖酶酶活变化,比较酶活与菌株生长状况的关系。【结果】从黄翅大白蚁肠道中筛选到一株具有较高木聚糖降解活性的革兰氏阳性菌Mb1,16S r RNA基因序列分析表明为类芽孢杆菌属细菌,命名为Paenibacillus sp.Mb1。该菌培养72 h后菌体浓度达到最高,木聚糖酶酶活主要存在于培养液上清中,酶活在对数期增长快,在培养96 h时达到最高值,之后趋于稳定。【结论】从黄翅大白蚁肠道中分离出一株具有较高木聚糖酶活的类芽孢杆菌,可作为产细菌木聚糖酶的潜在优良菌株。     

聚六亚甲基双胍体外抗真菌作用研究

目的探讨聚六亚甲基双胍(PHMB)对浅部真菌病常见致病菌的杀灭作用。方法参照标准的微量液基稀释法和琼脂稀释法检测PHMB粉剂和溶液对红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及白念珠菌临床分离株的体外最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)。结果 PHMB对红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌和白念珠菌临床分离株的MIC范围分别为1.0～4.0μg/mL、2.0～4.0μg/mL、2.0～4.0μg/mL和0.3～5.0μg/mL;MFC范围分别为2.0～8.0μg/mL、 4.0μg/mL、2.0～4.0μg/mL和5.0～10.0μg/mL。琼脂稀释法结果表明PHMB溶液浓度为1.25%时,红色毛癣菌、犬小孢子菌和须癣毛癣菌无菌落生长;PHMB溶液浓度为0.32%时,白念珠菌无菌落生长。加入透皮剂氮酮后,杀菌效果并无改变。结论 PHMB对浅部真菌病常见的致病真菌皮肤癣菌及白念珠菌具有较好的抑制和杀灭作用。     

沙门氏菌增菌培养基中细菌混合培养生长动力学的试验研究

本文就甘露醇亚硒酸盐和亚硒酸盐两种增菌培养基对沙门氏菌各血清变型的选择性增菌作用作了研究。研究述及37℃下沙门氏菌与埃希氏大肠杆菌、绿脓杆菌、普通变形杆菌三种竞争菌混合培养生长动力学过程,测出了评价增菌培养基优劣的客观指标EI值;按沙门氏菌传统分离方法,对加有终浓度为10~1、10~2、10~4、10~6、10~8个活菌/毫升的沙门氏菌株与正常人大便的两种增菌培养基,经37℃下孵育20至24小时后作SS琼脂平板划线分离和沙门氏菌血清学鉴定。通过两种培养基EI值及沙门氏菌分离结果的比较证实,甘露醇亚硒酸盐培养基对沙门氏菌株的选择性增菌作用明显优越于亚硒酸盐培养基(P<0.001)。     

不同浓度酒精对两种常见细菌生物膜的影响

目的 探讨不同浓度的酒精对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌生物膜形成的抑制作用.方法 配制不同浓度的酒精(1.25％、2.5％、5％和10％),作用于培养24 h形成成熟生物膜的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌,利用FDA/PI荧光染料染色,在激光共聚焦显微镜扫描生物膜并分析活菌与死菌比例.结果 不同浓度的酒精对两种细菌生物膜的形成均有一定破坏作用,5％、10％浓度酒精对金黄色葡萄球菌生物膜破坏最大,活菌与死菌比例为0.142 ±0.007、0.006±0.001;10％浓度酒精对大肠埃希菌生物膜破坏最大,活菌与死菌比例为5.751±1.779.结论 较低浓度的酒精可抑制金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌生物膜的形成,且10％浓度的酒精效果最好.     

冰核细菌表达冰核蛋白特性的研究*

选用１００２５Ａ和ＱＦ－９５－Ｆ１９两株分离自杨树的冰核活性细菌,探讨了两株菌不同生长阶段与它们冰核活性表达的特性。实验结果显示,冰核活性细菌在ＭＰＤＡ培养液中表达冰核蛋白的特性及活性与细菌浓度、菌龄以及培养的环境条件相关,两株菌在表达冰核活性时对培养基的营养组分没有表现出特殊的要求。同时还进一步阐明了不同生长温度冰核活性细菌对冰核蛋白表达的影响。     

冰核细菌表达冰核蛋白特性的研究

选用１００２５Ａ和ＱＦ－９５－Ｆ１９两株分离自杨树的冰核活性细菌,探讨了两株菌不同生长阶段与它们冰核活性表达的特性。实验结果显示,冰核活性细菌在ＭＰＤＡ培养液中表达冰核蛋白的特性及活性与细菌浓度、菌龄以及培养的环境条件相关,两株菌在表达冰核活性时对培养基的营养组分没有表现出特殊的要求。同时还进一步阐明了不同生长温度冰核活性细菌对冰核蛋白表达的影响。     

抗多重耐药病原菌的越南槐内生菌TRPH-35的抗菌活性及其鉴定

以大肠杆ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923及其临床多重耐药分离株ETEC-AD9、MRSA-DF12共4株人体病原细菌为靶标菌,采用琼脂块法从越南槐内生真菌中筛选抗菌活性菌株,并以改良的微量肉汤稀释法测定其代谢产物的最小抑菌浓度;根据形态和分子特征鉴定拮抗菌株的分类学地位。结果表明,菌株TRPH-35的活菌块对各病原细菌的抑菌圈直径与阳性对照相当;其代谢产物对各病原菌的最小抑菌浓度为20~40μg/mL;初步鉴定该菌株为刺盘孢。本研究结果表明,菌株TRPH-35鉴定为刺盘孢,对参试病原细菌均显示强的抗菌活性,具有较大的开发应用潜力。     

钾细菌诱变选育和发酵的研究

通过钾细菌的诱变选育和发酵工艺探索 ,来提高发酵菌量和芽孢量 ,确保钾细菌肥的质量的研究。试验选用钾细菌P1为出发菌株 ,经紫外线、硫酸二乙酯交替处理 ,筛选出一株产菌量和芽孢量较高的突变株PE -R。用该菌株进行了发酵各因素的试验确定了最佳发酵条件 :接种量 2 0 %、淀粉浓度 1.2 %、氮源浓度 0 .3%、发酵初始pH7.0 - 7.2、发酵后期温度 37℃、发酵后期风量 1:1.2。试验结果表明 ,采用该工艺进行工业化生产 ,发酵菌量从 2 0× 10 10 个 /ml增加到 4 5× 10 10 个 /ml,芽孢生成量从 4 5 %增加到 95 % ,发酵时间从 2 4h缩短到 15h ,制成菌肥 1年后检测活菌保留率仍在 93 6 %。     

四株儿茶酚类铁载体高产菌株产消化酶活性及其益生特性

【背景】儿茶酚类铁载体对胃肠道菌群的生长代谢具有重要作用,研究儿茶酚类铁载体高产菌株的消化酶活性,挖掘其潜在益生特性具有重要意义。【目的】分析4株分离自健康成人粪样的儿茶酚类铁载体高产菌的产酶特性,通过分析菌株耐酸耐胆盐能力、粘附定殖能力、抗生素耐受性和急性毒性研究其益生特性。【方法】测定4株菌的蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、植酸酶、乳糖酶和β-葡萄糖苷酶的酶活性。4株菌经人工模拟胃、肠液连续培养后分别计算其活菌数;分析4株菌的自凝集率、黏蛋白粘附率和表面疏水率;对小鼠连续7 d灌胃不同剂量的4株高产菌,观察并记录小鼠的一般体征,计算小鼠脏器指数,进行阳性细菌移位试验。【结果】在试验所测的7种消化酶中,E. coli Gut 07、E. coli Gut 12无蛋白酶和脂肪酶活性,B. cereus Gut 16无乳糖酶活性,E. coli Gut 20无蛋白酶活性,其余均具有。4株菌经人工模拟胃液培养6h后存活率均大于60%,转移到人工模拟肠液培养24 h后活菌数均大于初始菌落数;该4株菌具备在胃肠道中粘附定殖的能力,对大多数抗生素敏感,在浓度低于4.5×10~(11)CFU/m L、灌胃剂量为20m L/kg-bw时对小鼠无急性毒性,无阳性菌株移位现象。【结论】4株儿茶酚类铁载体高产菌株可作为潜在益生菌进行进一步的安全性和功能性研究。     

2株越南槐内生真菌的抗菌活性及菌株鉴定

以2种人体病原细菌为靶标菌,采用琼脂块法从越南槐内生真菌中筛选拮抗菌株,以改良的微量肉汤稀释法测定其代谢产物的抗菌活性;根据形态和分子特征鉴定拮抗菌株的分类学地位。结果表明,菌株JXRPH-14和TRXY-9的活菌块对病原细菌的抑菌圈直径分别约等于或大于阳性对照;其代谢产物对病原细菌的最小抑菌浓度为20~40μg/m L,仅为阳性对照的20~40倍;初步鉴定这2株内生菌为不同的镰孢菌。菌株JXRPH-14和TRXY-9鉴定为不同的镰孢菌,对参试2种人体病原细菌均显示较强的抗菌活性,具有较大的开发应用潜力。     

一种具有CaPi矿化外壳的新型肺炎链球菌减毒活疫苗的构建

为构建肺炎链球菌减毒活疫苗SPY1矿化菌,并进一步探究其自身稳定性、热稳定性等生物学特性的改变,本研究以肺炎链球菌D39基因组DNA为模板设计合成构建突变体lyt A基因所需引物,采用插入失活的方法构建SPY1-△lyt A突变株,并以缺陷菌的生长特性以及PCR的方法进行鉴定;将SPY1-△lyt A突变株于富钙环境中培养,用不同浓度的磷酸盐进行滴定,使其形成磷酸钙矿化壳,通过扫描电镜以及直接荧光反应来检测疫苗菌株矿化情况;并将矿化菌株与未矿化菌株同时置于37℃不同时间后通过比较其存活率来评价矿化菌的热稳定性。PCR结果以及细菌长时间不溶解的生长特性表明成功构建了SPY1-△lyt A突变株;扫描电镜以及直接荧光反应结果显示细菌表面形成Ca Pi矿化外壳,并且SPY1-△lyt A-Ca Pi矿化菌具有较好的热稳定性。本研究为肺炎链球菌活菌疫苗的进一步研发奠定了基础。     

两株土壤耐镉细菌的筛选分离及与CdS-TGA纳米颗粒相互作用的研究

由受重金属镉污染严重的化工厂土壤中,筛选分离获得两株镉耐受性加强的菌株,菌体长1.0~2.0μm,宽0.5~0.8μm,单个细胞呈杆状,单菌落分别呈淡黄色与乳白色,经鉴定为Enterobacter sp.与Serratia sp.。对所分离细菌的最适生长条件、镉离子最小抑制浓度及抗生素抗性进行了检测和优化,并进一步研究了硫化镉-巯基乙酸纳米颗粒与细菌的相互作用,发现纳米颗粒浓度在150μg/m L时细菌增殖基本停滞;过氧化物酶和超氧化物歧化酶酶活测试显示纳米颗粒对酶抑制性较Cd2+更为强烈,细胞形态受到严重破坏。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药性的分子遗传和生物化学机理

枝菌酸是结核分枝杆菌细胞壁组分之一。异烟肼作用的主要靶标是参与枝菌酸生物合成的蛋白质。临床分离耐药株多数在KatG蛋白发生点突变,该蛋白也是INH作用靶标之一。但是,现有数据还不能解释INH耐药和INH杀灭细菌的全部机理。我们研究结核分枝杆菌耐药机理应该高起点,综合利用生物信息学、基因芯片、蛋白质组学、结构生物学等技术进行研究。     

紫色非硫光合细菌与大豆根瘤菌固氮作用的协同效应

从东北地区水稻及大豆根际分离出的两株紫色非硫光合细菌(球形红假单胞菌菌株N8611和胶质红假单胞菌菌株N84),分别与快生型大豆根瘤菌QB113以及慢生型大豆根瘤菌B16—11C共同培养时,其固氮比活与它们的纯培养菌相比有显著提高,说明这两类菌的固氮活性具有协同效应。两株光合细菌及其胞外组分,以及光合细菌与大豆根瘤菌共同培养时分离出的胞外组分,能显著加强由上述根瘤菌所形成根瘤的固氮活性。可以初步肯定,上述协同效应的原因之一是光合细菌胞外组分的刺激作用。     

肺切除术患者下呼吸道细菌L型培养及其临床研究

本文在５０例行肺切除术中,分别采集病肺、支气管切缘、健侧支气管内分泌物４５０份,做常规细菌和细菌Ｌ型培养及药敏试验。分离出需氧菌和真菌６０株,厌氧菌１２株、细菌Ｌ型４２株。菌群主要分布在病肺内约占５０％。需氧菌种中Ｇ＋球菌占６１．７％,葡萄球菌多见;其次Ｇ￣＋杆菌占２３．３％,以肠杆菌科细菌为主。厌氧菌占细菌型１６．７％。细菌Ｌ型特点与细菌型一致。围术期选择作用于细胞壁和细胞质的抗生素,以杀灭细菌型及细菌Ｌ型感染。     

越南槐内生真菌JXRPH-24的抗菌活性及其鉴定

以2株病原细菌金黄色葡萄球菌ATCC25923和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床分离株为靶标菌,采用琼脂块法和改良的微量肉汤稀释法测定越南槐内生真菌JXRPH-24的抗菌活性;根据形态和分子特征鉴定该菌株的分类学地位。结果表明,该菌株的活菌块对金黄色葡萄球菌ATCC25923的抑菌圈直径与阳性对照相当;其代谢产物对这2株病原细菌的最小抑菌浓度均为10μg/mL,仅为阳性对照的16倍;基于形态和ITS序列分析未能鉴定该菌株。菌株JXRPH-24可能是一个潜在的新内生真菌,对参试金黄色葡萄球菌均具有强的抗菌活性,具有较大的开发应用潜力。