人肝细胞癌中N－ras、c－myc癌基因的表达──原位分子杂交和免疫组织化学研究

为了明确Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ癌基因在人肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达及其形态学分布,我们对３８例石蜡包埋的ＨＣＣ（其中３３例带有癌周肝组织）标本进行了原位核酸杂交和免疫组化研究。结果表明,ＨＣＣ及癌周肝组织中Ｎ－ｒａｓ表达阳性率分别为４２％和３９％;ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ阳性表达率分别为４７％和３６％;ｃ－ｍｙｃ蛋白阳性率分别为５３％和３９％。ＨＣＣ与癌周肝之间Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ及ｃ－ｍｙｃ蛋白表达水平无显著差别;ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ及蛋白阳性强度也无显著差别,其形态学分布基本一致,主要集中于癌细胞和癌周肝中的部分高度增生结节;Ｎ－ｒａｓ表达增强主要见于癌细胞、癌周肝中的高度增生结节、小细胞性不典型增生及少部分肝小多角细胞。它们与ＨＢｘＡｇ表达之间无明确的对应关系。上述结果显示,ＨＣＣ中Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ表达都显著增强,它们可能是人ＨＣＣ发生中较晚期的事件,而Ｎ－ｒａｓ表达增强早于ｃ－ｍｙｃ癌基因活化。     

反义RNA对人胃癌细胞生长抑制及恶性表型的阻断作用

ｒａｓ原癌基因的点突变是人胃癌发生发展的重要机理之一。利用能表达ｃ－Ｈ－ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ的质粒,导入人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３,研究了ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ对人胃癌细胞生长及恶性表型的作用,结果表明,ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ可引起ＢＧＣ－８２３生长速率及形态的变化,在半固体培养基中细胞集落形成能力减弱,部分也抑制了ＢＧＣ－８２３在裸鼠体内的致瘤性。ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ对其ＲＮＡ的过量表达     

反义RNA对人胃癌细胞生长抑制及恶性表型的阻断作用

ｒａｓ原癌基因的点突变是人胃癌发生发展的重要机理之一。利用能表达ｃ－Ｈ－ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ的质粒,导入人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３,研究了ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ对人胃癌细胞生长及恶性表型的作用,结果表明,ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ可引起ＢＧＣ－８２３生长速率及形态的变化,在半固体培养基中细胞集落形成能力减弱,部分地抑制了ＢＧＣ－８２３在裸鼠体内的致瘤性。ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ对其ＲＮＡ的过量表达呈特异性抑制作用。     

大鼠星形胶质细胞组织因子活性的表达及其调控

本实验观察了基础培养条件和凝血酶刺激条件下,大鼠星形胶质细胞组织因子活性的表达及其信号传递途径。结果显示,基础条件下,Ａ２３１８７（４ｂｒｏｍｏｃａｌｃｉｕｍｉｏｎｏｐｈｏｒｅ）和佛波醇脂（ｐｈｏｒｂｏｌ１２ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３ａｃｅｔａｔｅ,ＰＭＡ）能明显提高星形胶质细胞组织因子活性的表达,而三氟吡啦嗪（ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ,ＴＦＰ）和１（５异喹啉磺胺）３甲基哌嗪［１（５ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）３ｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ,Ｈ７］则降低星形胶质细胞组织因子活性的表达。凝血酶能明显增加星形胶质细胞表达组织因子活性;当凝血酶与ＴＦＰ或Ｈ７联合应用时,凝血酶的刺激作用受到明显抑制。实验表明,星形胶质细胞在基础培养条件下能表达组织因子,凝血酶能刺激它表达组织因子活性。Ｃａ２＋／钙调素和ＰＫＣ途径参与了在基础条件以及凝血酶刺激条件下星形胶质细胞组织因子活性的表达。     

肝刺激因子对人肝癌细胞BEL—7402p21^ras表达的影响

从雄性初断乳ＳＤ大鼠肝匀浆中提取肝刺激因子（ＨＳＳ）并加以部分纯化,观察其促人肝癌细胞增殖活性及对ｐ２１＾ｒａｓ蛋白表达的影响。结果表明：⑴ＨＳＳ具有明显的促人肝癌细胞增殖活性,其分子量为１４－２０ｋＤ;⑵ＨＳＳ可提高ｐ２１＾ｒａｓ蛋白表达,具有时间－效应关系,并与ＥＧＦ呈协同作用;⑶ＨＳＳ调节ｐ２１＾ｒａｓ蛋白表达具有剂量－效应关系,且呈现出饱和性。鉴于我们已报道ＨＳＳ上调ＥＧＦ受体蛋白和基因表     

内源性一氧化碳在大鼠败血症性休克时低血压发生机制中的作用

应用盲肠结扎法制备大鼠败血症休克模型,研究内源性一氧化碳（ＣＯ）在败血症休克时低血压发病中的作用。用血红素加氧酶（ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ,ＨＯ）抑制剂２,４二甘油次卟啉锌（ｚｉｎｃｄｅｕｔｅｒｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ２,４ｂｉｓｇｌｙｃｏｌ,ＺｎＤＰＢＧ）处理大鼠后,观察动物动脉血压,同时测定主动脉平滑肌组织中ＨＯ活性和ＣＯ生成量。结果发现：败血症大鼠动脉收缩压、舒张压降低,同时血管平滑肌ＨＯ活性和ＣＯ生成明显增加。败血症大鼠用ＺｎＤＰＢＧ处理后,动脉血压明显回升,同时ＨＯ活性和ＣＯ生成明显被抑制。实验表明败血症休克时低血压的发生与血管平滑肌细胞ＨＯ活性增加和内源性ＣＯ生成增多明显相关;应用ＨＯ抑制剂阻断ＨＯ活性能导致内源性ＣＯ生成减少,继而使败血症休克时大鼠血压明显回升。实验提示,内源性ＣＯ对血管张力具有重要的调节作用;ＨＯ活性和内源性ＣＯ生成增加是败血症休克时低血压发生的重要机制之一。     

兔肢体火器伤骨骼肌组织TNF含量早期变化及意义

本实验以兔肢体火器伤为实验模型,观察距原发伤道不同距离的骨骼肌组织内肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦ）含量的变化,探讨与氧自由基生成、能量代谢以及Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ活性的关系,为进一步救治提供实验依据。１材料和方法...     

v－Ki－ras转化成纤维细胞中钙离子振荡的研究

ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ转化成纤维细胞中钙离子振荡的研究傅涛,徐永华,顾振纶（中国科学院上海细胞生物学研究所,苏州医学院药理教研室苏州２１５００７上海２０００３１）ｒａｓ癌基因是６０年代从大鼠的肉瘤病毒中分离得到的,ｒａｓ这一名词,由ｒａｔｓａｒｃｏｍａ的开...     

天然及氧化修饰脂蛋白对人动脉平滑肌细胞原癌基因表达的影响

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ＡＳ）的形成过程中极其重要。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,Ｈ－ｒａｓ原癌基因及Ｒｂ抗癌基因转录表达的影响。结果表明：（１）ＨＤＬ对ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,ｒａｓ基因表达无影响;（２）ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势;（３）ｏｘ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＶＬＤＬ和ｏｘ－ＨＤＬ具有使ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,和ｒａｓ基因表达显著增强的作用（Ｐ＜０．０１）,且其作用较相应的天然脂蛋白大（Ｐ＜０．０１）;（４）天然和氧化修饰型脂蛋白对Ｒｂ基因表达均无影响。据上述结果推测：ＬＤＬ,ＶＬＤＬ,ｏｘ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＶＬＤＬ和ｏｘ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与刺激ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ和ｒａｓ原癌基因表达增加有关。     

ras和c-erbB癌基因在特发性肺间质纤维化中的表达

采用原位分子杂交技术和免疫组织化学方法,对８例临床与肺组织学确诊的特发性肺间质纤维化（ＩＰＦ）病人的肺活检组织及７例正常肺组织进行了ｒａｓ和ｃ－ｅｒｂＢ癌基因及其产物的检测。结果：ｒａｓ癌基因产物Ｐ２１在６／８例ＩＰＦ肺组织中呈阳性反应;５／８例ＩＰＦ肺组织ｃ－ｅｒｂＢ－２显免疫阳性反应,而在７例正常肺组织Ｐ２１及ｃ－ｅｒｂＢ－２均无明显表达,原位杂交结果显示ＩＰＦ肺组织没有明显ｒａｓ和ｃ－ｅｒｂＢ癌基因的ＤＮＡ扩增提示ＩＰＦ的病变过程与ｒａｓ和ｃ－ｅｒｂＢ癌蛋白表达增强有关     

H－ras在颊粘膜正常、良性、癌前及恶性变上皮中的表达：免疫组织化学定量研究

本文通过建立图象分析方法对免疫组织化学反应结果进行定量,检测观察Ｈ－ｒａｓ在口腔颊粘膜上皮在正常（Ｎ）、慢性炎症（ＩＦ）、癌旁上皮（ＥＡＣ）和鳞癌（ＳＣＣ）的变化过程中的表达并进行分析。结果显示Ｈ－ｒａｓ在ＳＣＣ组中,以中等分化的ＳＣＣ无论是Ｈ－ｒａｓ表达的量还是细胞阳性率都较高。此外,组织学观察显示,Ｈ－ｒａｓ在处于分化末期但尚未角化的正常上皮细胞中有较高的表达。本文结果显示了Ｈ－ｒａｓ的过表达与上皮细胞的会化程度密切相关。本研究还显示,所采用的阳性区域透光值、平均总透光值及阳性反应区域与阴性反应区域比值可靠并有相关性。这进一步说明了用免疫组化定量方法检测Ｈ－ｒａｓ癌基因表达的精确和可靠性。     

利用减数分裂期成株电离辐射选育小麦—大赖草易位系的研究

采用６００１１２５Ｒ剂量的６０Ｃｏγ射线对小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）大赖草（Ｌｅｙｍｕｓｒａｃｅｍｏｓｕｓ（Ｌａｍ．）Ｔｚｖｅｌ．）Ｌｒ．７单体异附加系在减数分裂期进行成株辐射处理,经过Ｍ１代根尖细胞有丝分裂中期（ＲＴＣ,Ｍ期）染色体ＧｉｅｍｓａＣ分带粗筛,Ｍ２代ＲＴＣＭ期染色体Ｃ分带和荧光原位杂交鉴定,选育出２个小麦大赖草Ｌｒ．７异易位系。其中Ｔ０２易位系是由Ｌｒ．７染色体绝大部分与一小片段小麦染色体接在一起组成的易位类型（ＴＬｒ．７·Ｌｒ．７Ｗ）;Ｔ０８的易位染色体由小麦４ＡＬ和大赖草Ｌｒ．７某臂组成。     

粉防己碱抑制血管平滑肌细胞增殖及对HSP70和p53表达的影响

目的：观察粉防己碱（Ｔｅｔ）对ＶＳＭＣ增殖的作用及对热应激蛋白７０ｋｄ（ＨＳＰ７０）及其ｍＲＮＡ和抑癌基因ｐ５３ｍＲＮＡ的影响。方法：用内皮素建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型。采用氚－胸腺嘧啶核苷（［３Ｈ］ＴｄＲ）掺入法流式细胞术,Ｗｅｓｔｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交方法。结果：Ｔｅｔ能逆转内皮素所致的［３Ｈ］ＴｄＲ掺入量增多（Ｐ＜０．０１）,阻止血管平滑肌细胞由静止期（Ｇ０／Ｇ１期）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和有丝分裂期（Ｇ２／Ｍ期）,并能逆转内皮素引起的ＨＳＰ７０及ｍＲＮＡ表达增强（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）,ｐ５３抑癌基因ｍＲＮＡ表达减弱（Ｐ＜０．０５）。结论：Ｔｅｔ能抑制血管平滑肌细胞增殖,与ＨＳＰ７０及ｐ５３的调控有关     

H2O2和.OH及其清除剂对大麦叶片液泡膜微囊质子转运活性的影响

大麦叶片液泡膜微囊经Ｈ２Ｏ２ 和·ＯＨ处理后,Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ 和Ｈ＋ＰＰａｓｅ 水解活性和泵运质子活性下降, Ｈ＋ＰＰａｓｅ 对Ｈ２Ｏ２ 更敏感一些。同时加入与Ｈ２Ｏ２ 和·ＯＨ 相同浓度的抗坏血酸（ＡｓＡ） 或甘露醇可显著恢复两种酶的活性和质子转运活性。Ｈ２Ｏ２ 和·ＯＨ 处理后,Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ 米氏常数（ Ｋｍ） 变大,Ｈ＋ＰＰａｓｅ 的最大反应速度（ Ｖｍａｘ） 减小     

红细胞抗高血压因子舒血管作用机制的研究

本实验研究了从Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠红细胞中提取的抗高血压因子（ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｆａｃｔｏｒ,ＡＨＦ）对苯肾上腺素引起的Ｗｉｓｔａｒ大鼠胸主动脉螺旋条预收缩的舒张作用。结果表明：ＡＨＦ对主动脉条的舒张呈内皮与剂量依赖性。左旋硝基精氨酸与美蓝均可阻断ＡＨＦ的舒血管作用,而铜锌超氧化物歧化酶对ＡＨＦ的舒血管效应有促进作用。提示ＡＨＦ是通过刺激内皮细胞产生一氧化氨或其类似物,从而激活血管平滑肌细胞内可溶性鸟苷酸环化酶这一途径引起血管舒张的。     

DMBA、垂体移植诱发性乳腺瘤内172~（Arg－Leu）突变型p53的特性及其与基因重排和扩增关系的研究

ｐ５３最早发现于ＳＶ４０转化的细胞系,后来几乎在所有不同类型的细胞内均检测到这种蛋白质,野生型Ｐ５８是一种有效的肿瘤抑制因子,但突变体ｐ５２可与ｒａｓ－肿瘤基因协同转化体外的腺代细胞,而且在肿瘤发生时常伴随有ｐ５３基因的突变。乳腺癌内,ｐ５３基因的突变率为４０％,并可见到某些肿瘤基因参与癌症的形成过程,暗示ｐ５３基因结构和功能的改变可能与这些基因的重排和扩增有关。本实验选择４种不同年龄的１７２~（Ａｒｇ－Ｌｅｕ）突变型ｐ５３转基因小鼠为受试动物,将同系动物的垂体腺植入小鼠的肾脏后,再以致癌剂ＤＭＢＡ处理,以使动物乳腺内的ｐ５３基因表达和诱导小鼠乳腺癌形成。从乳腺癌小鼠分别摘取乳腺组织,提取ＤＮＡ和ＲＮＡ,以Ｈ－ｒａｓ、ＰＣＮＡ、ＣｙｌｉｎＤ１、ｐ５３基因的ＤＮＡ片段作为特异性核酸探针,进行ＳｏｕｔｈｅｒｍＢｌｏｔｔｉｎｇ和ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ分析,以检测在突变体Ｐ５３表达的情况下,ＰＣＮＡ、Ｈ－ｒａｓ、ＣｙｉｎＤ１等基因在体内的变化规律。实验发现,在４组不同的受试动物中,其乳腺癌细胞的ＰＣＮＡ和Ｈ－ｒａｓ两种基因发生了基因重排,特征是其ＤＮＡ标本中分别出现了一条很强的额外杂交带,但对照动物乳腺该类     

香茶菜黄酮诱导人肝癌细胞系GHC—3恶性表型的逆转

香茶菜提取物黄酮体外对人肝癌细胞系ＧＨＣ－３的诱导，从细胞生长特性、膜受体、肿瘤标志物、癌基因产物和遗传性状等方面观察到细胞恶性表型的逆转。经过药物作用１０周后发现细胞形态由多边形上皮样逐渐转变为梭形，生长速度减慢，分裂指数、集落形成、ＣｏｎＡ凝集和ＣｏｎＡ受体、ＤＮＡ含量及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入均明显减少，染色体分布较集中，出现二倍体细胞等变化。进一步以三种单克隆抗体测试，ＡＦＰ和ｒａｓ Ｐ２１合成     

小麦根质膜H^＋—ATPase的部分纯化

以小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）根为材料,采用不连续蔗糖密度梯度离心法制备高纯度质膜微囊。质膜经ＴｒｉｔｏｎＸ１００和ＫＣｌ处理后,再用Ｚｗｉｔｅｒｇｅｎｔ３１４增溶Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ,最后用硫酸铵沉淀得到部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ。ＳＤＳＰＡＧＥ结果表明,经过上述步骤纯化,分子量为９４ｋＤ的膜蛋白组分得到富集;与质膜相比,其含量提高１５．７倍。部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ可以水解ＡＴＰ,受Ｋ＋刺激,并被Ｎ,Ｎ′ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｍｉｄｅ（ＤＣＣＤ）抑制;ＡＴＰ水解活力被Ｎａ３ＶＯ４抑制９５％,但不被ＮａＮ３、ＮａＮＯ３和Ｎａ２ＭｏＯ４抑制。     

N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V在肿瘤发生及转移中的作用机制

N-糖链的β-1,6分支与肿瘤关系密切。N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosaminyltransferase V,GnT-V)可催化β-1,6糖链分支的生成。GnT-V是一种双功能蛋白,可以定位在高尔基体中,也可以分泌形式存在。该酶通过一种金属离子依赖的丝氨酸蛋白酶来破坏细胞外基质或者直接催化促血管因子的生成来促进肿瘤的生长或转移,也可以通过分泌型的GnT-V催化糖链生成改变血管生成因子的功能,或者直接促进它们的转录从而起到促进肿瘤转移的作用。另外,GnT-V可以与癌基因产物及其受体相互作用来促进肿瘤的发生及侵袭。本综述主要就GnT-V的基本性质、促肿瘤生成及转移的机理进行展开,并展望了其在肿瘤治疗中的应用。     

鲨鱼软骨血管生成抑制因子的纯化和功能

以中国东海鲸鲨软骨为原料,通过盐抽提、丙酮分级沉淀、离子交换层折、分子筛层析、高效液相色谱等步骤,获得鲨鱼软骨血管生成抑制因子－Ｉ（ｓｈａｒｋ ｃａｒｔｉｌｇａｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ－Ｉ,ＳＣＡＩＦ－Ｉ）,对其分子量、抑制血管生成及抑制肿瘤生长活性进行了研究。结果显示ＳＣＡＩＦ－Ｉ分子量１８ｋＤ,在细胞和整体水平上显著抑制新血管生成,显著抑制小鼠肿瘤的生长