深层培养法生产无毒炭疽芽孢苗

1．以2％蛋白胨水溶液为培养基,以无毒炭疽芽孢为菌种,连续深层培养2—5代作为种子,再经深层通气培养制成芽孢苗。接种后先在35—36℃连续通气培养8小时,然后自然降温在31—33℃继续培养16小时至收苗。通气置为1:3(V／V),24—28小时芽孢形成率一般可达80％以上。此芽孢可经受60℃30分钟热处理。 2. 深层培养所得芽孢苗安全试验,对家兔注射1毫升(每毫升含1．5—2．5×10,活芽孢),对绵羊注射10毫升后动物均健活;区域试验时,对绵羊注射0．5毫升,对马、牛、驴、骡注射1毫升亦安全。 3. 免疫力试验表明,兔可获得3/4以上的保护,对绵羊,有二批可保护100％,一批保护80％。 4．用30％甘油水溶液稀释成含10‘活芽孢的液体免疫绵羊,二批可抗强毒炭疽芽孢200个,对最小致死量强毒芽孢获100％保护;一批保护75％,与同体培养芽孢苗相似。 5. 室温或10—15℃保存一年至43个月,芽孢菌原液活芽孢死亡不显著,免疫原性稳定,免疫力强。     

香榧体细胞中着丝粒散开的诱发

香榧离体幼根用对二氯苯饱和水溶液在室温(15℃左右)下处理24小时,再放入3℃冰箱中24小时,然后在3℃冷水中16小时,多次诱发了中期染色体的着丝粒散开,诱发频率平均为3.24％。此外对着丝粒散开由点状空泡向较大空泡发展的各期形态作了描述。     

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性研究

目的评价细胞工厂工艺连续生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性。方法疫苗在-20℃放置24个月,检测病毒滴度、外观、抗生素残留量、无菌性,及对病毒血清型进行鉴别;2~8℃放置12个月检测疫苗稳定性;室温放置7周、37℃放置7 d检测加速热稳定性并冻融的稳定性。结果该疫苗-20℃可贮存24个月以上,2~8℃有效期可延长至12个月,且冻融不会影响疫苗的稳定性。结论疫苗质量稳定,各项检测结果均符合《中华人民共和国药典》三部(2010版)及企业《口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)注册标准》。     

鲫鱼的人工和天然雌核发育

用照射处理的草鱼或华南鲤的精液授精的鲫鱼卵为单倍体雌核发育;所有单倍体胚胎都是畸形,并在孵化前死亡。如果用照射精液授精的鲫鱼卵在18—19℃的水中放置2分钟,然后在0—3℃的冰水中放置20分钟,再放回室温水中孵化,可以从每百颗受精卵中得到4.5—11.9(平均8.34)尾成活的二倍体仔鱼。根据38尾银鲫(其中33尾捕自黑龙江省方正县双凤水库)的细胞学和胚胎学检查,证实它们是雌核发育繁殖的。       

压制植物有丝分裂及减数分裂永久片的新方法

当我们获得一张理想的植物细胞有丝分裂或减数分裂的临时压片后,怎样才能比较简便地转成质量较好的永久片呢?常规转法手续复杂,在梯度乙醇和二甲苯中脱水与透明过程中材料易褪色和丢失。我们所用的方法是将临时压片在5—10℃或室温下放置24—48小时,放置过程中要注意保湿(最好放在玻璃器皿中用湿布盖好)。到时将压片取出,揭开盖片,严防搓动(此时材料绝大部分贴在盖片上)。将盖片材料向上放在室温下凉干30分钟(最好放在20—30℃的温台上5分钟)。取一张干净载片在酒精灯上过火2—3     

烟草花叶病毒及其核酸侵染烟草愈伤组织悬浮细胞的研究

比较了烟草的茎和叶片来源的愈伤组织对 TMV 侵染和繁殖的影响,发现 TMV 在单倍体植株茎的悬浮细胞中侵染和繁殖最好。TMV 在悬浮细胞中的繁殖曲线表明,接种后25℃保温6小时病毒滴度下降,24小时后对数增加,144—216小时病毒滴度达最高峰,其后病毒滴度下降。接种后经10℃低温预处理10小时、24小时和4天再转到25℃继续保温的细胞中,比接种后直接在25℃保温的大大增加了病毒复制的同步性,以低温处理10小时和24小时最佳。烟草悬浮细胞也适用于 TMV-RNA 接种。     

香榧体细胞中着丝粒散开的诱发

香榧离体幼根用对二氯苯饱和水溶液在室温(15℃左右）下处理24小时,再放人3℃冰箱中24小时,然后在3℃,冷水中16小时,多次诱发了中期染色休的着丝粒散开,诱发频率平均为3.24%。此外对着丝粒散开由点状空泡向较大空泡发展的各期形态作了描述。     

作为食物防腐剂的重组体昆虫肽

美国加州 Ingene 公司正在用重组体 DNA 技术生产一类天蚕抗菌素(cecropins)。它是抗菌性的肽,是某些昆虫的免疫系统的组成部分。它不象大多数抗菌素那样只是阻止细菌繁殖,实际上,它是通过破坏它们的细胞质膜来杀死许多种细菌。其分子包括约35个氨基酸,这意味着如果把它引入体内,就可以引起一个免疫反应,但它们可能在微生物引起的感染、皮     

水稻转化体系的改进及转os-miR398基因植株的获得

针对根癌农杆菌介导的愈伤转化技术在实际应用中转化效率低及农杆菌污染等问题,对该方法在水稻转化过程进行改良:(1)在转化前将空白愈伤从培养基取出,于室温放置在空白皿中约24 h,使之处于饥饿状态,以利于T-DNA转化并提高转化率;(2)在愈伤与农杆菌共培养并经无菌洗脱后,在转移到相应培养基之前,将其于室温下继续放置在含有滤纸的培养皿里约24 h,从而有效地抑制农杆菌生长.采用本改良措施,成功将所克隆构建的os-miR398(水稻microRNA398)前体基因表达载体转化入水稻,与对照相比,改良后水稻转化效率可提高10%.     

萌发的种子吸收O_2和放出CO_2的实验

把小麦种子浸泡12小时左右,在垫有湿滤纸的培养皿中使其萌发露白。分装在二只试管内约达3厘米深。把乙试管加些水,在酒精灯上煮沸5分钟,把水倒掉。再用少许药棉塞在试管内,挡住种子。另在250毫升烧杯内装入2％氢氧化钠溶液30—50毫升,并滴进几滴酚酞,溶液呈粉红色,然后将装有种子的两根试管     

水稻根系分离菌在橡胶塞斜面上的保存效果

Haynes等于1955年提出橡胶塞密封于试管棉塞上保存需氧芽孢细菌。1962年J. Antheunisse改进了Haynes方法,用橡胶塞代替棉塞,密封试管斜面保存菌种,于室温或4℃下暗处保存细菌及酵母菌取得了较好的效果,国内也有类似的报道。我们于1979年把部分水稻根系分离菌及固氮菌的斜面用橡皮塞代替棉塞置于室温下保存,经2—4.5年后检查     

分枝杆菌噬菌体生物学特性探讨

为了确定不同分枝杆菌噬菌体的宿主菌以及扩增方法和最佳保存方法,观察了七种分枝杆菌噬菌体对结核分枝杆菌、耻垢分枝杆菌的裂解情况,并分别于感染后 24、48小时采用离心 过滤、孵育 过滤方法收集噬菌体比较扩增效率,采用不同稳定剂对分枝杆菌噬菌体进行液体和冻干保存,在不同时间段采用琼脂双层法检测其效价。结果显示:①D29分枝杆菌噬菌体能同时较高效地裂解结核分枝杆菌和耻垢分枝杆菌;②感染 48小时后采用孵育 过滤方法收集的噬菌体效价高,方法简单;③液体 4℃保存的噬菌体稳定性好, 70℃液体保存和冻干后 4℃、室温、37℃保存依据不同稳定剂而相差较大。因此,在 48小时后采用孵育 过滤方法收集噬菌体具有高效率特性并且简单易行,噬菌体液体 4℃保存简单、有效,值得推荐。     

毛叶秋海棠叶片组织培养快速繁殖

毛叶秋海棠(Begonia rex Puts.)通常是用叶片进行繁殖。但繁殖系数不高,在短期内要得到大量繁殖植株是有困难的。采用离体叶片进行组织培养,能够做到快速无性繁殖。 材料与方法 实验材料为昆明植物园温室内盆栽的毛叶秋海棠。取植株上一年生左右的叶片,剪下后用自来水冲洗干净,用75%酒精进行表面灭菌。再在无菌条件下,用0.1％升汞液浸10分钟,无菌水冲洗5—6次,然后将叶片切成边长0.5—1厘米的方形小块,放在培养瓶中进行培养。基本培养基为改良MS,附加BA(6-苄基嘌呤)、     

100～700 mL液体培养基的微波灭菌效果观察

为研究家用微波炉对少量液体培养基的灭菌效果,对100 -700 mL液体培养基采取微波分别进行灭菌,测定其灭菌时间,并对达到灭菌效果的培养基通过接种不同细菌进行质检.结果显示100、200、300、400、500、600、700 mL液体培养基分别在4.5、5.0、7.0、9.0、12.0、19.0、25.0 min达到最有效的灭菌效果.室温保存15 d仍无细菌生长.枯草杆菌黑色变种芽胞菌测试无菌生长.金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及普通变形杆菌在液体培养基里的生长现象、特种后细菌的菌落和形态染色特征及其生化反应均无明显差异.实验表明2 450 MHz,700 W的微波炉对100 - 700 mL的液体培养基不但能快速达到有效的灭菌效果,且营养成分不会被破坏.     

人类肠道菌群DNA提取影响因素的研究

目的研究提取人类粪便中细菌基因组DNA的影响因素。方法采用溶菌酶和十二烷基磺酸钠(SDS)+石英砂+酚-氯仿抽提法提取粪便标本中细菌DNA,用PCR扩增细菌16SrDNA。比较不同粪便量,不同放置时间,不同放置温度下的粪便细菌DNA浓度及纯度改变;用Chao index评测高通量测序的结果。结果采用20mg粪便量提取出的细菌DNA的浓度最高;常温下放置3h后,提取的细菌DNA的浓度开始下降;在-20℃放置12h后,细菌DNA的浓度开始下降;-70℃放置48h后细菌DNA的浓度开始下降;样品纯度均在1.8以上;Chao index曲线趋于平缓表明测序数据量足够大。结论提取肠道细菌基因组DNA时,粪便标本取样量以20mg为宜,常温下粪便标本放置不超过2h,本研究所使用的方法所提取的DNA浓度可以达到高通量测序的样本要求。     

极端嗜热性微生物纤维素酶的活性

极端嗜热厌氧菌H173羧甲基纤维素酶的最适pH为6.5-7.0.加入二硫苏糖醇(DTT)和CaCl_2.2H_2O能使酶活稳定.80℃酶活非常稳定,放置120分钟仍保留原酶活的77%,90℃9分钟保留50%的活性,120分钟仅保留3%的原始酶活.在缓冲溶液中该酶能将微晶纤维素水解成葡萄糖和纤维二糖.培养基中含有最高至50mm葡萄糖时,对溶解微晶纤维素的活性不敏感.HPLC分析表明葡萄糖是该酶在液体培养基中的主要水解终产物.     

不同压力条件下油藏内源细菌群落激活过程中变性梯度凝胶电泳分析?

摘要：【目的】了解常压（1 MPa）和高压（10 MPa）条件下内源细菌激活中的细菌群落和结构的变化。【方法】利用胜利油田沾3×24井产出液水样,在常压和高压下进行富集培养后,定时取样,样品用变性梯度凝胶电泳（denature gradient gel electrophoresis,DGGE）技术分析。【结果】通过对内源微生物激活前后DGGE条带的数量和亮度变化分析表明,油藏环境中的细菌在种类和数量上并不丰富,激活剂的加入改变了菌群原有的贫营养环境,从而使一些因营养缺乏生长受抑制细菌得以大量繁殖,菌群结     

花椰菜幼苗下胚轴诱导再生植株

植物名称:花椰菜(Brassica oleracea varbotrytis)80天结球栽培品种。材料类别:无菌苗下胚轴。无菌苗培养:种子经70％酒精浸泡30秒钟后,转移到0.1％昇汞溶液灭菌20分钟,再用无菌水冲洗三次,接种于MS培养基上。培养温度为25—28℃;光强为散射光,约100 lux;每天照光12小时。培养8—10天时幼苗高约3—4厘米,子叶绿色,于无菌条件下先切除胚根、子叶和茎生长点。再把下胚轴切成约1厘米左右长的切段作为外植体进行诱导培养。     

棕尾别麻蝇幼虫生物活性物质研究进展

自Natori报道向棕尾别麻蝇三龄幼虫腹腔注入大肠杆菌悬液诱导出抗菌蛋白以来,许多学者在这方面做了大量工作,不仅对抗菌蛋白有了进一步认识,而且还发现一种外源凝集素,有介导杀伤肿瘤细胞的作用,这为抗菌和抗肿瘤提供了新方向,本文对此进行回顾。抗菌蛋白一、提取Okada等发现向幼虫腹腔注入细菌对产生抗菌蛋白并非必需。将三龄幼虫在室温下置于水中,停食5天,将幼虫置于冰中的玻片上几分钟使其麻痹以提高抗菌蛋白的产生,然后用皮下注射针头穿刺虫体后部,重新放置水中24～48小时,用剪刀断头收集血淋巴液。一般150条幼虫可收集1ml。将血淋巴液…     

遗传饰变的微生物及其制备和使用方法(续)

E.温度对存活力和质体消除的影响: 当X1776在L-液体培养基+DAP+Tha中生长到对数期,再把它悬浮在BSG或L-液体培养基+DAP+Thd之中,然后放在43℃下温育培养时,在培养的头6-9小时内,可观察到菌落形成能力的指数丧失率。在L-液体培养基中,存活力降低55％/每小